基于纳米免疫磁珠快速富集4种海洋致病性弧菌的研究

摘要

为研究海洋中常见致病性弧菌的快速分离富集方法——免疫磁珠法,本文以副溶血弧菌、哈维氏弧菌、创伤弧菌、灿烂弧菌为研究对象,制备纳米免疫磁珠,并通过一系列优化条件,用3M试纸计算捕获率来确定免疫磁珠最佳捕获条件.最后分别对4种致病性弧菌的不同菌液稀释浓度、对1株目标菌和8株非目标菌、4种混合菌进行捕获,从而评价免疫磁珠的灵敏度、特异性以及抗干扰能力.结果表明,4种磁珠偶联最佳抗体量为300、600、150、150μg.最佳捕获条件:副溶血弧菌免疫磁珠用量3mg,免疫反应45min,磁分离3min,pH 7.4缓冲液体系.哈维氏弧菌免疫磁珠用量3mg,免疫反应45min,磁分离1min,pH 6.0缓冲液体系.创伤弧菌免疫磁珠用量12mg,免疫反应60min,磁分离5min,pH 8.0缓冲液体系.灿烂弧菌免疫磁珠用量6mg,免疫反应30min,磁分离3min,pH 7.4缓冲液体系.在纯培养情况下,4种免疫磁珠灵敏度均达到10 CFU/mL数量级;分别对9株菌进行捕获,对目标菌的捕获率均达到87％以上,对非目标菌的捕获率均低于32％;对4种混合菌进行捕获时,免疫磁珠捕获率不受其它杂菌干扰.本研究证明了该免疫磁珠有较好的灵敏度、特异性和抗干扰能力,且与其它增菌方法相比,大大缩短了时间,具有较好的应用前景.