海藻酸钠固定化重组川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶

摘要

利用IPTG诱导含有川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶(LCCOMT)的大肠杆菌工程菌E.coli BL21(DE3)/pET28a-LCCOMT,经Ni2+亲和层析、质谱鉴定获得纯化的LCCOMT.采用海藻酸钙凝胶包埋固定LCCOMT,单因素实验考察最佳固定化条件对固定化酶活力的影响,并确定了固定化酶的最适温度、pH值、Kn、Vmax与反应批次等酶学性质.确定的条件分别为海藻酸钠质量分数1.5％,CaCl2浓度2.5 g/L,固定化时间2h,载体与酶质量比40 000∶1.通过正交实验确定最终固定化条件为CaCl2浓度2.5 g/L,海藻酸钠质量分数2.0％,固定化时间1h,载体与酶质量分数35 000∶1时,固定化效果最好,此时相对酶活力为75.43％.固定化酶的最适催化温度为37℃、最适pH值为7.5,较游离酶分别增加0℃和0.5;Km、Vmax分别增高0.40和0.74;实验确定固定化酶的半衰期,连续使用6次,酶活力仍保留50％.