腺病毒介导的小鼠Flt3配体抗肝癌基因治疗的研究

摘要

目的观察腺病毒载体介导的小鼠Flt3配体(mFL)对小鼠肝癌的基因治疗效果.方法腺病毒体外感染小鼠肝癌细胞株Hepa1-6,48 h后,用绿色荧光蛋白的表达检测感染的效率,ELISA检测培养上清中mFL的表达量,每天细胞计数(连续14 d)观察细胞的生长曲线.建立小鼠肝癌模型,肿瘤局部分别单次注射1×109表达形成单位的mFL重组腺病毒、空载体对照和PBS,观察肿瘤大小和小鼠生存期.治疗20 d后,取肿瘤消退小鼠的脾细胞过继至正常小鼠,3 d后接种Hepa1-6细胞,观察肿瘤大小;治疗38 d后,再接种Hepa1-6细胞或EL4细胞对照于肿瘤消退小鼠原接种部位的对侧,观察肿瘤大小并作统计学处理.结果腺病毒体外能有效地感染靶细胞Hepa1-6,培养上清中mFL表达量为80.5 ng*10-6*24 h-1±7.3 ng*10-6*24 h-1,感染后Hepa1-6的生长未受到明显抑制.瘤体内注射mFL重组腺病毒导致90%的小鼠肿瘤消退,并显著延长小鼠生存期;脾细胞过继能保护正常小鼠免于Hepa1-6细胞的攻击;再接种Hepa1-6细胞于肿瘤消退小鼠,未见肿瘤生长,而再接种的EL4细胞呈渐进性生长,与对照组无显著差异.结论腺病毒介导的小鼠Flt3配体的基因治疗导致肿瘤消退,并能激发可过继的、特异性免疫保护反应,可能成为有效的肝癌基因治疗的候选方案.