替米沙坦对3T3－L1脂肪细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ信号通路的影响

摘要

目的观察替米沙坦对3T3-L1脂肪细胞过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）信号通路的影响, 探讨替米沙坦延缓2型糖尿病病程的作用机制。方法诱导3T3-L1前脂肪细胞至80%成熟（对照组）, 加入50 ng/ml肿瘤坏死因子α（TNF-α）刺激1 h（TNF-α组）, 分别以0.1、5、10 μmol/L替米沙坦加入培养基干预24 h, 即T0.1,T5和T10组。应用Western印迹检测PPARγ及其磷酸化水平、细胞周期依赖性蛋白激酶5（CDK5）表达变化;酶联免疫吸附测定（ELISA）检测培养基中脂联素含量。短发夹RNA（shRNA）沉默未分化3T3-L1的PPARγ, 筛选PPARγ丝氨酸突变型3T3-L1细胞系即S273A、S112A、S186A, 以进一步确定磷酸化位点。shRNA沉默CDK5, 油红O染色、异丙醇萃取检测分化效率, 以10 μmol/L替米沙坦干预成熟3T3-L1, Western印迹检测pPPARγ/PPARγ, ELISA检测培养基脂联素含量。结果 TNF-α刺激及替米沙坦干预后各组CDK5表达差异均无统计学意义（均P＆0.05）。与TNF-α组相比, T5组、T10组pPPARγ/PPARγ降低, 脂联素含量增加, 差异均有统计学意义（均P＆0.05）, T0.1组差异均无统计学意义（均P＆0.05）。与3T3-L1野生型（WT）相比, S186A、S112A组加入TNF-α后pPPARγ/PPARγ升高, 脂联素降低, 加入替米沙坦后pPPARγ/PPARγ降低, 脂联素含量增加, 差异均有统计学意义（均P＆0.05）, S273A组pPPARγ/PPARγ、脂联素差异均无统计学意义（均P＆0.05）。异丙醇萃取显示沉默CDK5组（shCDK5）与随机对照（shCon）组相比3T3-L1分化差异无统计学意义（P＆0.05）, Western印迹显示与shCDK5组相比, shCon组加入替米沙坦后pPPARγ/PPARγ降低, 脂联素增加, 差异均有统计学意义（均P＆0.05）。结论替米沙坦能够缓解因TNF-α刺激导致的PPARγ磷酸化水平升高, 上调脂联素含量。CDK5介导了替米沙坦对3T3-L1脂肪细胞PPARγ信号通路的影响。替米沙坦的作用位点为PPARγ第273位丝氨酸, PPARγ第273位丝氨酸上游激酶为CDK5。