基于纳米抗体CDR3区抗原表位展示制备生存素抗体及其鉴定

摘要

目的:通过纳米抗体CDR3区展示生存素N端表位的方式,探索纳米抗体在抗原表位展示中的作用.方法:通过基因合成方法将生存素N端起始表位(氨基酸序列1～15)插入纳米抗体CDR3区,再构建到原核表达载体pET24a中,IPTG诱导表达,用带His标签的填料纯化,获得高纯度的目的蛋白,免疫雌性BALB/c小鼠,间接ELISA检测5次免疫后的效价,用抗原偶联纯化介质纯化免疫多抗,Western印迹检测多抗特异性.结果:IPTG诱导后,目的蛋白主要以包涵体形式存在,亲和层析获得纯度大于96％的目的蛋白,包涵体经复性后免疫小鼠,效价可达1:512000,West-ern印迹特异性检测显示免疫多抗能够特异性结合生存素.结论:纳米抗体CDR3区生存素抗原N端表位展示的方法可用于抗生存素抗体的制备,并为今后纳米抗体表位展示相关研究奠定基础.