基于纳米抗体CDR3区抗原表位展示的β-HCG抗体制备及鉴定

摘要

cqvip:目的通过纳米抗体CDR3区展示β-HCGC端表位的方式,验证纳米抗体在抗原表位展示中的作用。方法采用基因合成的方法,将β-HCGC端表位(氨基序列151~165)插入到纳米抗体CDR3区,酶切、连接原核表达载体pET24a,IPTG诱导表达。将His标签填料纯化得到的高纯度目的蛋白免疫新西兰大耳白兔,经5次免疫后,间接ELISA检测效价,抗原偶联纯化介质进行免疫多抗纯化,Western blot进行多抗特异性检测。结果成功构建原核表达重组载体,并获得高表达菌株,IPTG诱导后,目的蛋白主要以包涵体的形式存在,亲和层析获得纯度大于98%的目的蛋白,包涵体经复性后免疫,效价可达1∶512000,Western blot特异性检测显示免疫多抗能够特异性结合β-HCG。结论纳米抗体CDR3区β-HCG抗原C端表位展示的方法,可用于抗β-HCG抗体的制备,并为今后纳米抗体表位展示相关研究奠定基础。