离子交换色谱法检测人血白细胞基因组DNA整体甲基化水平

摘要

目的改进现有方法,能快速、稳定、简便地测定人基因组DNA整体甲基化水平。方法采用美国HP Agilent 1100色谱工作站,利用离子交换液相色谱法对健康人外周血白细胞基因组DNA整体甲基化水平进行检测。色谱柱采用德国MN公司的强阳离子交换色谱柱（250 mm×4.6mm 5μm）;流动相为60 mM醋酸+15%乙腈,用氢氧化钠调节pH为4.6;流速为1.0 ml/min;检测器波长为276 nm;柱温为28℃;进样量为50μl。基因组DNA整体甲基化水平用5甲基脱氧胞嘧啶核苷占DNA样品中总脱氧胞嘧啶核苷的百分数来表示。结果在上述色谱条件下,约10 min可以将DNA中的脱氧胞嘧啶核苷和5甲基脱氧胞嘧啶核苷完全分离。并测得健康成人血白细胞基因组DNA整体甲基化水平为（4.389±0.0159）%。结论本方法能快速、有效地对基因组DNA整体甲基化水平进行检测,可供广大实验室采用。