逆转录病毒载体介导的白细胞介素-1Ra基因体外转染兔膝关节软骨细胞表达的研究

摘要

目的 探讨运用重组逆转录病毒载体介导白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)体外转染兔膝关节软骨细胞,观察其在关节软骨细胞中的表达情况及其对软骨细胞生物学性状的影响.方法 将构建含有目的 基因的表达载体PLNCX2-IL-1Ra-GFP体外转染到兔膝关节软骨细胞,采用-氧化氮(NO)检测试剂盒检测基因转染对软骨细胞的影响,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞培养上清液中hIL-1Ra的表达情况.结果 酶切和测序表明构建成功预期的真核表达载体PLNCX2-IL-1Ra-GFP;稳定转染软骨细胞后免疫荧光倒置显微镜观察到绿色荧光,证明转染成功;培养液中NO含量检测发现基因转染组比非基因转染组高,并且差异有统计学意义(P＜0.05);ELISA检测发现基因转染组有一定量的hIL-1Ra表达,未转染组与空载体组均无基因表达,基因转染组与非基因转染组间比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 逆转录病毒载体PLNCX2 介导的IL-1Ra能有效地转染到兔膝关节软骨细胞并获得稳定表达,同时转染后的软骨细胞增生活跃.为目的 基因IL-1Ra转染治疗骨关节炎提供了理论基础.