烟曲霉对人急性单核细胞白血病细胞系产生肿瘤坏死因子α、活化信号分子p38丝裂原活化蛋白激酶的影响

摘要

目的探讨烟曲霉对人急性单核细胞白血病细胞系THP-1细胞分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）和细胞内信号分子p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）激活的影响。方法 106、107 CFU/ml烟曲霉悬液（106和107 CFU/ml烟曲霉组）、100 mg/L阳性刺激物β-葡聚糖（β-葡聚糖组）及培养基（空白对照组）分别与2 × 105/ml THP-1细胞共孵育1、3、6 h, 实时荧光定量PCR分析各组THP-1细胞TNF-α mRNA表达水平。107 CFU/ml烟曲霉悬液（烟曲霉组）、β-葡聚糖（β-葡聚糖组）及培养基分别作用THP-1细胞24 h, 酶联免疫吸附法检测各组培养上清液中TNF-α含量。Western印迹法检测107 CFU/ml烟曲霉体外作用THP-1细胞后15、30、60 min p38MAPK和磷酸化p38MAPK水平。采用20 μmol/L SB203580预先与THP-1细胞共培养2 h后, 再用107 CFU/ml烟曲霉、β-葡聚糖或培养基作用6 h, 检测各组THP-1细胞TNF-α mRNA表达水平变化。结果 106、107 CFU/ml烟曲霉组、100 mg/L β-葡聚糖组及空白对照组TNF-α mRNA表达水平差异有统计学意义（F=110.983, P ＆ 0.001）, 且随培养时间延长, THP-1细胞TNF-α mRNA水平增高（F=701.680, P ＆ 0.001）。107 CFU/ml烟曲霉刺激THP-1细胞24 h后, TNF-α蛋白水平（6 236.30 ± 437.12 ng/L）较空白对照组（132.10 ± 0.61 ng/L）明显升高（P ＆ 0.01）。107 CFU/ml烟曲霉作用THP-1细胞30 min后磷酸化p38MAPK蛋白水平明显升高, 60 min时开始减弱。SB203580阻断的烟曲霉组TNF-α mRNA表达水平（3.83 ± 0.62）较未阻断的烟曲霉组（187.23 ± 21.62）明显降低。结论人THP-1细胞体外与烟曲霉作用后激活信号分子p38MAPK并分泌TNF-α, 表明单核细胞可能参与抗烟曲霉感染固有免疫反应。