禽流感病毒T细胞表位与体外重建鸡MHC Ⅰ类分子结合试验

摘要

为探讨体外重建的MHC Ⅰ复合体BF2-linker-β2m鉴定病毒抗原肽系统能否在体外结合抗原多肽,以及不同类的MHC Ⅰ类分子结合相同和不同抗原多肽表位能力的差异,本研究采用人工合成的禽流感病毒的3条多肽,猪口蹄疫病毒的2条多肽,以及来源于草鱼呼肠孤病毒的2条多肽分别与4类体外重建的串联鸡MHC Ⅰ类分子复合体BF2-linker-β2m进行了体外结合试验.BF2-linkerβ2m与不同的病毒抗原九肽按照1∶10的摩尔比进行混合,作用后取反应混合物离心除去未与MHC Ⅰ类分子结合的抗原多肽;然后取BF2-linker-β2m分别与抗原多肽形成的复合体,利用酸洗法将结合的多肽自MHC Ⅰ类分子的抗原多肽结合槽中洗脱,洗脱后的蛋白和多肽混合物离心收集洗脱的多肽溶液,随后利用C18柱对洗脱的多肽进行去盐、脱酸处理;将多肽样品冻干,用基质溶解后直接点样进行一级质谱(MS)和二级质谱(MSMS)测定,结果表明,3类体外重建的BF2-linker-β2m可与禽流感病毒多肽KILTIYSTV和LLLAIVSLV结合,而不与禽流感病毒多肽TIGECPKYV以及猪口蹄疫病毒和草鱼呼肠孤病毒的4条多肽结合.证实由于MHC Ⅰ类分子的多态性导致复等位基因的MHC Ⅰ类分子结合病毒抗原表位的能力存在差异;病毒的T细胞抗原表位是MHC Ⅰ类分子限制性的;KILTIYSTV和LLLAIVSLV是禽流感病毒的候选表位.