腺苷对人结直肠癌SW480细胞hMLH1基因甲基化的影响

摘要

目的:探讨腺苷(adenosine)对人结直肠癌SW480细胞hMLH1基因甲基化的影响。
　　方法:分别以0、1.5、3.0、4.5 mmol/L的腺苷干预SW480细胞72 h后，采用亚硫酸氢盐测序(BSP)法检测hMLH1基因启动子区CpG岛甲基化情况;反转录PCR(RT-PCR)法检测hMLH1 mRNA各组的表达情况;Western印迹(Western blot)法检测hMLH1蛋白经过干预后各组的表达情况;使用流式细胞术(FCM)检测各组的细胞凋亡率;分别以0、1.5、3.0、4.5 mmol/L的腺苷干预SW480细胞24、48、72、96 h后通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞活力。
　　结果:(1)腺苷干预72h后，各组甲基化程度分别为（65±4）％、（45±11）％和（16±4）％，均明显低于对照组（80±4）％（P＜0.01）;(2)腺苷干预前，hMLH1 mRNA的相对表达量为0.079±0.010，随着腺苷浓度的增加，mRNA表达水平逐渐增加，分别为0.230±0.032、0.359±0.029和0.570±0.019(P＜0.01);(3)腺苷干预后，各组蛋白表达水平分别为0.353±0.016、0.654±0.018和0.854±0.014，均明显高于对照组0.126±0.016（P＜0.01）;(4)腺苷干预后，各组凋亡率分别为(11.9±0.6)％、（20.0±1.8）％和（35.8±1.8）％，均明显高于对照组（3.9±1.4）％(P＜0.01);(5) MTT法显示不同浓度腺苷干预细胞后，各组细胞活力均明显低于对照组(均P＜0.05)，有一定的时间-剂量依赖性。
　　结论:腺苷可逆转hMLH1启动子区异常甲基化状态，使hMLH1mRNA及hMLH1蛋白表达增加，抑制细胞的增殖，促进细胞凋亡。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

1 实验材料与方法

1．1 实验材料

1．2 方法

2 实验结果

2．1 不同浓度腺苷对hMLH1基因甲基化状态的影响

2．2 不同浓度腺苷对hMLH1 mRNA表达的影响

2．3 不同浓度腺苷对hMLH1蛋白表达的影响

2．4 不同浓度腺苷对SW480细胞凋亡的影响

2．5 MTT法检测各组细胞活力情况

3 讨论

全文总结

参考文献

文献综述 错配修复hMLH1基因与肿瘤

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文