SCARB2和PSGL-1在EV71感染小鼠脑干细胞表达的实验研究

摘要

目的：清道夫受体B2(SCARB2)和P-选择素糖蛋白配体-1(PSGL-1)为EV71(enterovirus 71,EV71)受体,本研究通过对EV71感染小鼠后SCRAB2和PSGL-1在脑干细胞表达的实验研究,探讨:a.EV71在脑干细胞的感染量与SCARB2和PSGL-1在脑干细胞量的关系;b.EV71对脑干细胞的损害和嗜神经性是否与SCARB2和PSGL-1的表达有关系;c.通过EV71感染小数后SCARB2和PSGL-1的表达试阐明EV71与宿主细胞早期的相互作用机制和致病机制.方法：取SPF级ICR小鼠24窝(144-288只,每窝6-12只,为1日龄乳鼠),均分为12组,实验组6组,分别为1、3、5、7、10、14天组,对照组也相应分为1、3、5、7、10、14天组,每组2窝,实验组腹腔注射107.5～8.5半数组织培养感染剂量(TCID50)/mLEV71 0.5mL,对照组腹腔注射RD细胞培养上清液0.5mL.实验组分别于新生鼠接种EV71后1天、3天、5天、7天、10天、14天安乐死,取出脑干组织;对照组的新生鼠也在相应的时间段进行安乐死取出脑干组织,进行EV71荧光定量PCR检测;脑干细胞组织SCARB2和PSGL-1的免疫组化学检测、蛋白Western blot检测、基因荧光定量-PCR检测(qRT-PCR)检测.多组间比较采用方差分析.结果：1.新生鼠感染EV71后出现生长缓慢、消瘦、弓背、瘫痪麻痹、爬行不稳、易摔倒、甚至抽蓄死亡,以第3天和5天感染的症状最明显.2.荧光定量-PCR显示脑干中的病毒载量在感染后3天和5天的达到高峰,实验组1mg脑干组织分别为(3.20±0.40)、(6.05±0.52)、(5.90±0.67)、(3.39±0.46)、(2.69±0.61)和(1.18±0.89)Ig拷贝,3天组、5天组与其他组比较差异显著(P＜0.05).3.免疫组织化学显示感染后小鼠脑干细胞组织SCARB2和PSGL-1有特异性分布.4.Western blot结果显示SCARB2和PSGL-1在3天组和5天组较其他组表达明显增高.5.荧光定量-PCR结果示实验组脑干组织SCARB2分别为(0.14±0.06)、(1.63±0.30)、(1.85±1.73)、(0.19±0.12)、(0.17±0.07)和(0.12±0.14).3天组和5天组与其他组比较差异显著(P＜0.05);PSGL-1分别为(0.45±0.28)、(12.62±15.07)、(9.54±10.76)、(0.31±0.16)、(0.71±0.80)和(0.38±0.29),3天组和5天组与其他组比较差异显著(P＜0.05).结论：SCARB2和PSGL-1在EV71感染后在脑干细胞的表达增多,3天组和5天组的表达增高最明显,与新生鼠的感染症状和病毒感染量是相向的;作为EV71的受体,在EV71感染后第3天和5天表达量增多明显,可能与EV71的易损害脑干细胞和嗜神经性有关,在EV71致病机制中起着重要的作用.