Klotho

摘要： 背景:2型糖尿病并发症肾间质纤维化日益高发,然而有关2型糖尿病并发症肾间质纤维化及运动对其作用的影响机制尚待揭示。目的:探究不同方式运动对2型糖尿病小鼠肾间质纤维化的影响,及Klotho介导转化生长因子β1/Smad3途径在此过程中的调控机制。方法:44只4周龄C57BL/6雄性小鼠,1周适应性喂养后,随机分为正常对照组和2型糖尿病造模组。利用高脂膳食和一次注射链脲佐菌素法制备2型糖尿病小鼠模型,并随机分为模型对照组、高强度间歇训练组和下坡跑组,进行8周运动干预。结束后,检测肾功能生化指标;利用苏木精-伊红染色检测肾组织微细结构变化;Masson染色检测肾间质纤维化水平;实时定量PCR检测相关因子mRNA表达;Westernblotting检测相关因子蛋白表达;免疫组织化学染色检测肾中Ⅰ型胶原蛋白的蛋白表达。结果与结论:①与正常对照组相比,模型对照组血肌酐、尿素氮和24 h尿蛋白水平均显著升高;肾盂扩张、肾实质变窄、肾小管数量减少;胶原面积百分比升高;肾组织中Klotho mRNA和蛋白表达水平下调,转化生长因子β1、Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白mRNA和蛋白表达水平上调,Smad3 mRNA和p-Smad3蛋白表达水平均显著上调;肾组织中Ⅰ型胶原蛋白的蛋白表达阳性区域显著增加;②与模型对照组相比,高强度间歇训练组Klotho、Ⅰ型胶原蛋白和Ⅲ型胶原蛋白mRNA表达出现显著变化,转化生长因子β1和Ⅲ型胶原蛋白的蛋白表达上调;③与高强度间歇训练组相比,下坡跑组血肌酐、尿素氮和24 h尿蛋白水平下降;肾盂、肾小管、肾小球等结构病变被显著改善;胶原面积百分比显著降低;Klotho mRNA和蛋白表达上调,转化生长因子β1、Ⅰ型胶原蛋白、Ⅲ型胶原蛋白mRNA和蛋白表达水平均下调,p-Smad3蛋白表达下调;Ⅰ型胶原蛋白的蛋白表达阳性区域显著减少;④提示2型糖尿病小鼠肾间质发生了纤维化;下坡跑通过上调Klotho并抑制转化生长因子β1/Smad3途径进而改善2型糖尿病小鼠肾间质纤维化,但高强度间歇性运动的作用效果不显著。

摘要： 目的 探讨降脂灵胶囊联合非诺贝特治疗高脂血症的疗效,以及治疗对颈动脉粥样硬化斑块和血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、乳脂肪球表皮生长因子8(MFG-E8)、Klotho水平的影响.方法 选取重庆市第五人民医院2019年4月至2020年7月收治的高脂血症患者92例作为研究对象,按照随机数字表法将患者分为研究组和对照组,每组46例.对照组给予非诺贝特治疗,研究组在对照组基础上联合降脂灵胶囊治疗.对比2组的临床疗效、血脂水平、颈总动脉粥样硬化斑块横切面的最大面积、外周动脉内膜中层厚度(IMT)、血清MMP-9、MFG-E8、Klotho水平及不良反应发生情况.结果 研究组总有效率为95.65％,高于对照组的78.26％(P0.05).结论 降脂灵胶囊与非诺贝特联合治疗高脂血症患者疗效明显,可改善血脂水平,缩小颈动脉粥样硬化斑块面积以及IMT,降低血清MMP-9水平,提升血清MFG-E8、Klotho水平,且不良反应少.

摘要： 目的探讨新生血管性青光眼(NVG)患者血清、房水中Klotho、内皮素-1(ET-1)表达,分析Klotho、ET-1与VEGF、炎性细胞因子及NVG病情进展的关系。方法选择2016年8月—2019年10月收治的NVG患者62例(62只眼)为NVG组,Teich分级:Ⅱ级13例,Ⅲ级25例,Ⅳ级24例,选择同期住院的年龄相关性白内障患者51例(51只眼)为对照组。检测受试者房水、血清中Klotho、ET-1、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。分析NVG患者血清、房水中Klotho、ET-1水平与VEGF、炎性细胞因子及Teich分级之间相关性。结果(1)Klotho、ET-1与VEGF、炎性细胞因子水平:NVG组房水、血清中Klotho水平低于对照组(t_(房水)=14.486,t_(血清)=10.000,均P=0.000),而ET-1、VEGF、IL-6、IL-8、TNF-α水平高于对照组(房水:t_(ET-1)=42.086,t_(VEGF)=78.161,t_(IL-6)=56.977,t_(IL-8)=44.505,t_(TNFa)=15.659,均P=0.000。血清:t_(ET-1)=30.066,t_(VEGF)=34.949,t_(IL-6)=18.686,t_(IL-8)=23.069,t_(TNFa)=11.096,均P=0.000),比较均有统计学意义。(2)Teich分级影响:NVG患者血清、房水Klotho水平随着Teich分级的增加而降低(F_(房水)=16.352,F_(血清)=8.569,均P=0.000),ET-1、VEGF、IL-6、IL-8、TNF-α水平均随着Teich分级的增加而升高(房水:F_(ET-1)=23.651,F_(VEGF)=23.165,F_(IL-6)=18.241,F_(IL-8)=13.264,F_(TNFa)=14.243,均P=0.000。血清:F_(ET-1)=12.351,F_(VEGF)=19.354,F_(IL-6)=21.054,F_(IL-8)=16.342,F_(TNFa)=16.351,均P=0.000),比较均有统计学意义。(3)相关性分析:NVG患者血清、房水中Klotho水平与VEGF、IL-6、IL-8、TNF-α、Teich分级呈负相关,均有统计学意义(P<0.05),ET-1与VEGF、IL-6、IL-8、TNF-α、Teich分级呈正相关,均有统计学意义(P<0.05)。结论NVG患者房水、血清中Klotho水平降低,ET-1水平增高,Klotho、ET-1可能与VEGF、炎性细胞因子相互作用,参与了NVG新生血管形成和病情进展,可以作为NVG诊断和病情评估的生物学指标。

摘要： Klotho(KL)基因主要在肾脏、甲状旁腺、脑组织中表达,其编码的蛋白具有抗氧化应激、抑制炎症反应、调节自噬等多种生物学功能,参与肾脏病、心血管疾病、肿瘤等多系统疾病。KL蛋白家族共有3个成员,其中α-Klotho(α-KL)目前研究得较为广泛和深入,在慢性肾脏病早期α-KL蛋白即开始下降,且随着损伤程度的持续加深,所能检测到的值更低,但其调控机制尚未完全阐明。本文主要通过阐述α-KL蛋白在慢性肾脏病中的生物学功能,以期发现新的研究思路,为慢性肾脏病的治疗提供新的依据。

摘要： 目的探讨康柏西普联合全视网膜光凝(PRP)治疗缺血型视网膜中央静脉阻塞(CRVO)引起新生血管性青光眼(NVG)的效果及对房水Klotho和Endothelin-1的影响。方法选取2019年12月—2020年12月80例缺血型CRVO引起的NVG(80只眼),根据治疗方法不同分为对照组和研究组,每组40例(40只眼)。对照组采用PRP治疗,研究组采用康柏西普联合PRP治疗。对比两组综合疗效、不良事件及复发情况。比较两组治疗前后眼压和最佳矫正视力(BCVA),房水Klotho、Endothelin-1、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板反应蛋白-1(TSP-1)、细胞色素C(CytC)、线粒体融合蛋白1(Mfn1)水平,以及视网膜中央动脉舒张末期血流速度(EDV)、收缩期峰值血流速度(PSA)。结果研究组总有效率高于对照组(P0.05)。结论采用康柏西普联合PRP治疗缺血型CRVO引起NVG,能显著提高治疗效果,进一步提高患者视力水平,抑制新生血管生成,改善房水Klotho、Endothelin-1水平。

摘要： 目的研究法舒地尔在调控Klotho抑制甲状旁腺激素(PTH)诱导的肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化(EMT)中的作用。方法采用第3代人肾小管上皮细胞,分为5组,经不同浓度法舒地尔进行处理,用倒置显微镜观察细胞形态变化,采用蛋白免疫印迹法(Western-blot)测定细胞中Klotho蛋白的表达情况,实时定量PCR法(RT-PCR)测定Klotho mRNA、间充质细胞标志物α-SMA mRNA和上皮细胞标志物E-cadherin mRNA表达情况,并观察量效关系。结果正常肾小管上皮细胞经PTH刺激后呈不同程度的拉长,变为长梭形或不规则形,胞间连接变松散,Klotho mRNA和蛋白表达明显减少,E-cadherin mRNA表达减少,α-SMA mRNA表达增多,差异均有统计学意义(P<0.05),标志着肾小管上皮细胞向间充质细胞转化。而在法舒地尔的干预下,上皮细胞发生EMT的数量减少,E-cadherin mRNA表达增多,α-SMA mRNA表达减少,Klotho mRNA和蛋白表达均明显增强,差异均有统计学意义(P<0.05),其中法舒地尔在20μmol/L时抑制作用最显著。结论法舒地尔可以通过上调肾小管上皮细胞内Klotho表达,减轻PTH诱导的肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化,为法舒地尔在临床预防和治疗肾脏纤维化中的应用提供实验数据。

摘要： 目的探讨山茱萸多糖对D-半乳糖致衰老大鼠学习记忆能力及Klotho/Akt信号通路的影响。方法采用D-半乳糖腹腔注射法制备Wistar大鼠脑老化模型,然后给予不同剂量山茱萸多糖观察大鼠学习记忆能力、β-半乳糖苷酶活性、Klotho、Akt、FoxO3a、Mn-SOD等指标变化。结果与模型组比较,山茱萸多糖中、高剂量组学习记忆能力提高(P<0.01),Klotho、Mn-SOD、FoxO 3 a mRNA表达升高(P<0.01),Klotho、Mn-SOD蛋白表达升高(P<0.01),而Akt mRNA表达降低(P<0.01)。结论山茱萸多糖可提高脑老化模型大鼠学习记忆能力,其机制与提高海马组织中Klotho通路相关分子表达,激活下游靶分子Mn-FoxO3a和Mn-SOD表达有关,进而改善大鼠的学习记忆能力。

摘要： 急性肾损伤(AKI)在世界范围内具有较高的发病率和病死率,且是慢性肾脏病(CKD)和进展为终末期肾脏病的危险因素,给患者带来日益沉重的健康负担。成纤维生长因子23(FGF23)和a-Klotho(以下称“Klotho”)通路是近年来的研究热点。AKI发生后,血清中FGF23水平迅速上升,Klotho表达下降。这两种指标的变化被认为是预测AKI发生及预后的新型生物预测标志。本文围绕FGF23和Klotho在AKI中的表达改变和相关机制进行综述。

摘要： more than 20 years ago,and immediately emerged as a master regulator of aging-related processes,which basically operates as an anti-aging factor.It is expressed through the entire human body,representing the choroid plexus and the kidney as the most active sources at the central nervous system(CNS)and periphery level respectively.To a lesser extent,also the parathyroid gland,the adipose tissue,and the liver express KL.KL is a transmembrane protein serving as an essential co-receptor for fibroblast growth factor receptors,but,in general,it mediates a number of molecular pathways and biological functions at a multisystem level.In fact,even a soluble form exists,originated by the extracellular domain cleavage,which circulates in human fluids,allowing a sort of systemic signaling.Although all the tissue-specific actions have not been completely clarified,there is solid evidence that KL regulates basic mineral homeostasis and internal metabolism pathways.

摘要： 目的探讨血清Klotho、脑啡肽酶(NEP)、脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)在糖尿病视网膜病变(DR)患者中的表达及临床意义。方法选取2017年1月至2019年12月在重庆大学附属三峡医院接受治疗的180例2型糖尿病患者作为研究对象,根据患者有无视网膜病变分为DR组(n=106)与非糖尿病视网膜病变(nDR)组(n=74)。根据DR分期将患者分为非增殖性视网膜病变组(nPDR组,n=66)和增殖性视网膜病变组(PDR组,n=40)。同期,另选取该院体检健康志愿者60例作为对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清Klotho、NEP、Vaspin水平。出院后随访1年,根据患者是否发生视力残疾,分为预后不良组(n=23)与预后良好组(n=83)。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清Klotho、NEP、Vaspin水平对DR患者视力残疾的评估价值。结果DR组血清Klotho水平低于nDR组、对照组(P<0.05),DR组血清NEP、Vaspin水平分别高于nDR组、对照组(P<0.05)。与nPDR组相比,PDR组血清Klotho明显降低(P<0.05),NEP和Vaspin水平明显升高(P<0.05)。多因素分析结果显示,糖尿病病程、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及血清Klotho、NEP、Vaspin是DR发生的独立影响因素(P<0.05)。与无视力残疾者相比,视力残疾者血清Klotho水平明显降低(P<0.05),NEP和Vaspin水平明显增高(P<0.05)。血清Klotho、NEP、Vaspin预测DR患者视力残疾的曲线下面积(AUC)分别为0.760、0.798、0.817。结论DR患者血清Klotho水平降低,血清NEP、Vaspin水平升高,与患者病情进展及不良预后密切相关。

摘要： 本发明属于分子生物医学领域，具体涉及Klotho‑beta在的功能与应用。本发明通过现代分子生物学实验证明，外源性加入KLB可以抑制肿瘤细胞的增殖，同时也可以促进肿瘤细胞凋亡，为肿瘤的治疗提供了新的靶点和思路。

摘要： 本发明公开了一种能与人β‑Klotho受体特异性结合的抗体及其用途。这些抗体能与成纤维细胞生长因子21的辅助受体β‑Klotho特异性结合并激活人β‑Klotho/FGFR1c复合受体，可以应用于治疗或预防哺乳动物中的II型糖尿病以及相关疾病。

摘要： 本发明公开了一种分析非小细胞肺癌中Klotho相互作用蛋白的研究方法，包括Klotho相互作用蛋白的筛选、Rab8与Klotho基因相互结合的验证、Rab8与Klotho相互作用的机制分析这三步骤。本发明首次发现，非小细胞肺癌细胞中Rab8与Klotho存在相互结合，在亚细胞中存在共定位，Rab8通过蛋白合成后途径，与Klotho结合并以囊泡形式促进其向膜表面转运，从而提高膜表面Klotho分布水平。

摘要： 本发明公开了一种分析Rab8调节Klotho表达在非小细胞肺癌中的作用的方法，包括分析Rab8通过翻译后环节对调节膜表面Klotho表达的作用、分析Rab8调控Klotho膜表面表达在Wnt信号通路及EMT中的作用以及分析Rab8调控Klotho膜表面表达在非小细胞肺癌细胞功能学方面的作用。本发明首次发现，Rab8与Klotho结合，通过蛋白生物合成后途径促进其向膜表面转运，提高Klotho膜表面分布水平，抑制Wnt/β‑catenin信号激活，抑制细胞发生上皮‑间质转化，从而抑制肺癌细胞迁移、侵袭。因此，Rab8具有主动调节Klotho功能。

摘要： 本发明涉及通过测量唾液或泪液中Klotho的含量来确定和/或监测个体健康状况的体外方法。进行这种测定的测试试剂盒是免疫分析测试试剂盒，尤其适于进行双抗体夹心分析或竞争性分析。

摘要： 公开了一种包含柠檬酸盐和肉碱的组合物，其通过保护肾小管细胞激活蛋白质Klotho的产生，从而降低其氧化应激条件，其可用于器官移植的器官的保护、灌注和再灌注。此外，液体和膳食/营养制剂中的组合物可用于减小由含碘造影剂、抗生素、NSAID或诱导氧化应激的剂诱导的肾毒性。

摘要： 本发明公开了一种抗衰老分泌型Klotho蛋白及其编码基因、重组表达载体与应用。本发明采用基因工程技术与策略，通过采用高保真的Taq聚合酶，优化目的基因的密码子序列及添加组氨酸标签，筛选得到一种原核表达载体表达的重组抗衰老蛋白，其氨基酸序列SEQ ID NO.1所示。本发明还提供编码该抗衰老分泌型Klotho蛋白的基因，其序列如SEQ ID NO.2所示。本发明中获得的Klotho蛋白具有较好的抗衰老功能，可以用于抗衰老、调节一氧化氮的生成、抗氧化应激、调节钙磷代谢、抗炎以及抑癌等方面。

摘要： 本发明公开了重组腺病毒技术领域的一种携带Klotho启动基因的重组腺病毒，通过将Klotho启动基因插入含有腺病毒基因组的腺病毒穿梭质粒pHBAd‑MCMV‑GFP中获得；本发明针对构建Klotho启动基因重组腺病毒以代替基因的模式，可以针对性对细胞生长情况进行调控，本发明的携带Klotho启动基因重组腺病毒，对抗衰老细胞衰老中有着显著促进作用，为众多老年病的预防和治疗提供新的治疗思路；获得腺病毒载体宿主范围广，能感染大多数的哺乳动物细胞，感染效率高；同时，纯化后的腺病毒可用于活体动物的研究，具有良好的生物安全性，且本发明构建过程中获得的重组腺病毒穿梭质粒pAdtrace‑RARγ能作为一般的真核表达质粒，通过脂质体转染介导真核细胞内RARγ基因的表达。

摘要： 本发明涉及诱导抗老化基因klotho的表达的化合物及其制备方法，本发明的由化学式1表示的化合物提高作为老化相关基因的Klotho基因的表达量的效果优秀，由此可用作预防皮肤老化、抑制细胞老化或用于预防、治疗、改善因血管老化诱发的疾病或肾脏疾病的药物组合物、化妆品组合物或食品组合物。

摘要： 本发明公布了基因转导干细胞筛选构建方法技术领域的一种原发性肝细胞klotho基因转导干细胞筛选构建方法，通过PCR扩增得到klotho基因外显子4区的多态DNA序列为基础，利用rs648202的T等位位点作为药物设计靶点进行药物的筛选，筛选出能够调节klotho基因表达水平的活性分子，基于人体肝细胞采用多态分型的DNA片段转导，且先后采用hTERT和pLXSN双重载体进行载体转导，达到高效表达hTERT的pLXSN‑hTERT表达载体转导，达到了构建高效表达klotho基因的干细胞的效果，在低溶度潮霉素双重筛选培养体系中，提高转导外源klotho基因的骨髓间充质干细胞的存活能力。