hMLH1

摘要： 目的:探讨错配修复基因 hMLH1、hMSH2 启动子区甲基化与胃癌(gastric cancer,GC)患者临床预后的相关性.方 法: 采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation- specific PCR, MSPCR)法检测77例GC肿瘤组织中hMLH1、hMSH2启动子区甲基化水平,Kaplan- Meier 法及log- rank 检验分析其与GC患者临床预后的相关性.结果:GC肿瘤组织中hMLH1高甲基化提示较短的无进展生存期(progression free survival,PFS)和总生存时间(overall survival,OS)(P ＜ 0.05).hMSH2甲基化水平与GC患者临床预后无相关性.结论:GC肿瘤组织中hMLH1启动子区甲基化与患者不良预后密切相关.

摘要： 目的通过检测hMLH1基因的表达及其启动子区甲基化呈现的状态,研究hMLH1基因同鼻咽癌临床和病理特征之间的关系,旨在找出可能作为鼻咽癌早期分子生物学诊断的标志物。方法(1)qRT-PCR检测hMLH1基因表达水平;(2)采用NCBI检测hMLH1基因组的序列,METH-PRIMER软件分析hMLH1启动子区有无经典的CpG岛。同时在线设计MSP及BSP特异性引物;(3)使用亚硫酸氢盐修饰后测序(BSP)检测鼻咽癌和正常鼻咽上皮细胞株中hMLH1基因的甲基化状态,每株细胞3个克隆,运用甲基化特异性PCR技术检测浙江省建德市第一人民医院20例正常鼻咽上皮组织和2012年5月-2016年5月初次确诊60例鼻咽癌组织hMLH1基因启动子区甲基化状态。结果(1)提示hMLH1在鼻咽癌细胞株和鼻咽癌组织中的相对表达量较正常鼻咽上皮细胞株和正常鼻咽上皮组织中的相对表达量明显降低。去甲基化药物5-Aza-dC处理后再次检测hMLH1的表达量,发现其在鼻咽癌细胞株中的表达量相对正常鼻咽上皮细胞株无明显降低。(2)在正常鼻咽上皮细胞株及20例正常鼻咽上皮组织中均未检测到hMLH1基因甲基化;而在5个鼻咽癌细胞株中hMLH1甲基化频率为80.0%(4/5),60例鼻咽癌组织中hMLH1甲基化频率为43.3%(26/60),两者与正常对照比较均有统计学差异(P0.05)。结论hMLH1基因启动子区甲基化具有肿瘤特异性,而hMLH1基因甲基化同鼻咽癌患者病理特征无明显相关性,可作为鼻咽癌早期预测因子,有望成为鼻咽癌早期诊断的分子标志物,将来还可能作为去甲基化基因治疗的靶点。

摘要： 目的 探究错配修复蛋白hMSH6、hMLH1和VEGF蛋白在结直肠癌组织中的表达及与预后的相关性.方法 选取2017年12月至2018年12月收治的100例结直肠癌手术患者作为研究对象,收集癌灶组织以及癌灶旁正常组织后采用免疫组化法检测MSH6、MLH1与VEGF蛋白表达情况,分析其与临床病理特征的相关性.结果 结直肠癌组的hMLH1和hMSH6缺失率高于正常结直肠组(P<0.05);结直肠癌组的VEGF阳性表达率高于正常结直肠组(P<0.05);hMSH6、hMLH1的缺失率和VEGF阳性率在不同肿瘤直径、分化程度、TNM分期、淋巴有无转移和发生远处转移间差异有统计学意义(P<0.05);hMLH1缺失率与VEGF阳性率,hMSH6缺失率与VEGF阳性率均呈正相关(r=0.489、0.497,P=0.018、0.021).结论 错配修复蛋白MSH6、MLH1和VEGF表达与结直肠癌的临床病理特征相关.

摘要： 目的 探讨细胞增殖因子短截型核糖核酸?腺瘤性结肠息肉病(Survivin shRNA?APC)双基因共表达稳转株对HT?29结肠癌细胞裸鼠皮下转移瘤错配修复基因表达的影响.方法 将40只SPF级裸鼠随机分为Survivin shRNA?APC双基因组(双基因组)、Survivin shRNA组、APC组、空白对照组(空白组)和空载组,分别于裸鼠左前腋下注入0.2 ml已经构建成功的细胞悬液:Survivin shRNA?APC双基因稳转株、Survivin shRNA单基因稳转株、APC单基因稳转株、HT?29结肠癌细胞和空载稳转株,等待成瘤,观察裸鼠一般情况及移植瘤生长情况,4周后处死裸鼠,测量瘤体体积和质量,检测移植瘤生长抑制率.采用实时荧光定量聚合酶链反应(real?time PCR)及免疫组化检测HT?29结肠癌细胞裸鼠皮下转移瘤组织细胞中hMLH1、hMSH2的表达.结果 与空白组和空载组比较,双基因组、APC组、Survivin shRNA组裸鼠移植瘤的平均体积和平均重量明显减少(P0.05).结论 Survivin shRNA?APC双基因可以通过沉默Survivin上调hMLH1、hMSH2的表达,进而抑制裸鼠皮下移植瘤生长.

摘要： 为探讨错配修复基因1 (human mutL homolog 1,hMLH1)启动子区异常甲基化与甲基化转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)的关系,揭示子宫内膜异位症(endometriosis,EM)的可能病因,留取43例卵巢子宫内膜异位症患者的异位内膜组织纳入EM组,留取30例其他妇科手术患者的正常子宫内膜纳入对照组.采用甲基特异性PCR (methylation specificity PCR,MSP)检测2组标本中hMLH1启动子区甲基化水平.同时采用免疫组化SP法,检测2组标本中DNMT1和DNMT3a、DNMT 3b的表达.结果显示,EM组甲基化率37％ (16/43),对照组甲基化率3％ (1/30),两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).EM组DNMT1表达阳性率为28％ (12/43),对照组DNMT1表达阳性率为3％ (1/30),两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).甲基化的EM标本中,DNMT1表达阳性率为69％ (11/16);未甲基化的EM标本中,DNMT1表达阳性率为4％(1/27),两组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).DNMT1高表达所致的hMLH1启动子区异常甲基化可能是子宫内膜异位症的病因之一.

摘要： 目的观察新加良附方对人胃癌细胞BGC-823裸鼠移植瘤生长抑制作用及其对肿瘤组织中p16、hMLH1基因甲基化的影响。方法建立BGC-823裸鼠移植瘤模型,将其随机分为新加良附大、中、小剂量组,模型对照组及地西他滨组。接种胃癌BGC-823细胞第10天开始灌胃给药,新加良附方大、中、小剂量组给药剂量为5g/kg、2.5g/kg、1.25g/kg;地西他滨2.5mg/kg腹腔注射给药,每周给药3次;模型组以生理盐水每天0.2 ml/10g灌胃,共16d。末次给药后24 h处死动物,称体质量后完整剥离瘤结并称瘤质量,计算肿瘤抑制率;并用MSP(甲基化特异性PCR)方法对肿瘤组织中p16、hMLH1启动子甲基化进行检测。结果新加良附大剂量组和地西他滨组与模型组肿瘤质量比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。新加良附大、中、小剂量组和地西他滨组均能不同程度抑制p16基因甲基化,其中新加良附中、小剂量组逆转效果最好。hMLH1基因甲基化检测中,各组所检测标本均未见明显甲基化条带。结论新加良附方具有明确的抑瘤作用,随着剂量增加而增加。同时,人胃癌细胞BGC-823裸鼠移植瘤中存在p16基因甲基化,而新加良附方能够逆转胃癌组织中p16基因的甲基化;去甲基化可能是新加良附方抗胃癌的另一效应机制。

摘要： 目的:观察hMLH1基因对脑胶质瘤替莫唑胺耐药的影响并探讨其机制.方法:检测脑胶质瘤患者组织、耐药细胞株(U251/TMZ)和亲本敏感细胞株(U251)的hMLH1表达水平;使用5氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)予耐药细胞株去甲基化干预后,采用MBP法检测其hMLH1基因启动子甲基化水平;检测干预前后耐药细胞株的hMLH1表达水平以及替莫唑胺IC50的变化.结果:脑胶质瘤复发患者组织hMLH1表达水平低于初治患者;耐药细胞株hMLH1表达水平低于敏感细胞株,去甲基化干预后耐药细胞株hMLH1表达水平及对替萸唑胺敏感性增加.结论:hMLH1沉默促进脑胶质瘤替莫唑胺耐药,其机制可能与该基因启动子甲基化增强有关.

摘要： 目的 检测hMLH1、ERCC1和Ki67在食管鳞状细胞癌及正常食管黏膜鳞状上皮的表达情况,研究错配修复系统对食管鳞癌发生发展的影响,探讨其成为食管鳞癌个体化治疗及临床预后判定指标的可行性.方法 应用免疫组织化学技术检测1 20例食管鳞癌和20例正常食管鳞状上皮组织中hMLH1、ERCC1和Ki67的表达.结果 hMLH1和ERCC1在食管鳞癌组的阳性表达率均显著低于正常食管黏膜组(P＜0.05);Ki67在食管鳞癌组的阳性表达率显著高于正常食管黏膜组(P＜0.05).食管鳞癌组中hMLH1、ERCC1与 Ki67表达显著负相关,hMLH1与 ERCC1表达不相关(P＞0.05).结论 错配修复系统参与食管鳞状细胞癌的发生、发展过程,对评估食管鳞癌的进展情况并制定合理化疗方案具有重要指导意义.

摘要： 目的 研究DNA错配修复基因hMLH1和hMSH2在结直肠癌合并慢性血吸虫肠病患者与散发型结直肠癌患者的肿瘤组织中的表达差异.方法 回顾性分析浙江省肿瘤医院2008年1月至2010年12月收治的338例结直肠癌患者的临床病理资料, 根据术前患者病史和肿瘤标本病理检查结果,将患者分为慢性血吸虫肠病组(80例)和散发型结直肠癌组(258例).应用免疫组织化学法检测hMLH1和hMSH2蛋白在两组患者肿瘤组织中的差异性表达, 并分析其与患者临床病理特征的关系.结果 与散发型结直肠癌组患者相比,慢性血吸虫病组患者的年龄更高[(62.2 ± 9.6)岁比(57.2 ± 11.7)岁,P=0.000],术前血小板与白细胞水平更低[(197.0 ± 59.6)×109/L比(217.0 ± 84.3) × 109/L, (5.9 ± 1.9) × 109/L比(6.6 ± 2.8) × 109/L,均P=0.020]. 两组患者的低分化和未分化肿瘤的比例分别为44.2%(34/77)和4.9%(12/247),差异具有统计学意义(P=0.001). 慢性血吸虫病组中hMLH1和hMSH2的表达水平均低于散发型结直肠癌组 [77.5%(62/80) 比98.1%(253/258),75.0%(60/80)比95.3%(246/258), 均P=0.000]. 合并慢性血吸虫病是hMLH1和hMSH2表达缺失的危险因素之一(RR:0.913, 95%CI:0.836~0.997, P=0.043),但非独立危险因素(RR:0.951,95%CI:0.867~1.043, P=0.286).结论 慢性血吸虫肠病的结直肠癌组织中hMLH1和hMSH2蛋白的表达水平低于散发型结直肠癌,提示慢性血吸虫肠病诱发结直肠癌的机制可能与hMLH1和hMSH2基因的缺失有关.%Objective To investigate the expression difference of DNA mismatch repair gene hMLH1 and hMSH2 between schistosomiasis-associated colorectal cancer and sporadic colorectal cancer. Method Clinical and pathological data of colorectal cancer patients receiving operations in Zhejiang Cancer Hospital between January 2008 and December 2010 were retrospectively analyzed. Patients were divided into schistosomiasis group (n=80) and sporadic group (n=258) according to the preoperative history and pathologic results. Pathological specimens were collected and tissue chips were made to analyze the expression of hMLH1 and hMSH2 by immunohistochemistr. Results Compared with sporadic group, older age [(62.2 ± 9.6) year vs. (57.2 ± 11.7) year, P = 0.000)], lower platelet level [(197.0 ± 59.6) × 109/L vs. (217.0 ± 84.3) × 109/L, P = 0.02] and lower WBC level [(5.9 ± 1.9) ×109/L vs. (6.6 ± 2.8) ×109/L, P = 0.02] were found in schistosomiasis group. Ratio of low differentiation-undifferentiation tumor was significantly higher in schistosomiasis group [44.2% (34/77) vs. 4.9% (12/247), P<0.05]. Lower positive rate of hMLH1 expression [77.5% (62/80) vs. 98.1%(253/258), P = 0.000] and hMSH2 expression [75.0% (60/80) vs. 95.3% (246/258), P = 0.000] was found in schistosomiasis group compared with sporadic group. Concurrent schistosomiasis was one of the risk factors of hMLH1/hMSH2 deficiency (RR:0.913, 95%CI:0.836-0.997, P=0.043), but not an independent factor (RR:0.951, 95%CI:0.867-1.043, P=0.286). Conclusion Schistosomiasis is associated with lower positive expression of hMLH1 and hMSH2 , which indicates that hMLH1/hMSH2 deficiency may be a potential mechanism of schistosomiasis inducing carcinogenesis of colorectal cancer.

摘要： 耐药是导致肺癌化疗与靶向治疗失败的关键,机制复杂.研究证实表观遗传学改变与肿瘤耐药的形成关系密切,DNA甲基化是重要的表观遗传学修饰方式.文章就hMLH1基因启动子区甲基化与肺癌顺铂耐药、DAPK基因启动子区甲基化与肺癌EGFR-TKI耐药的关系进行阐述.%Drug resistance is one of the major obstacles for chemotherapy and targeted therapy in lung cancer with complex mechanisms.The researches have demonstrated that epigenetic changes are closely related to drug resistance of tumor.DNA methylation is an important epigenetic modification.In this paper, the relationships between hMLH1 promoter aberrant methylation and platinum-resistance, and DAPK promoter aberrant methylation and EGFR-TKI resistance in lung cancer will be briefly reviewed.

摘要： 目的:检测膀胱癌组织中hMLH1基因启动子甲基化状态,并探讨其对膀胱癌早期诊断的临床意义.方法:收集新鲜的膀胱癌组织及癌周组织30例,正常人血清14例.采用甲基化特异PCR分别检测膀胱癌组织、癌周组织及正常血清DNA中hMLH1基因启动子甲基化状态.结果:在所测的30例膀胱癌标本中,10例癌组织(33.3％),1例癌周组织.(3.3％)中检测到hMLH,基因异常甲基化,正常血清中未检测到hMLH基因异常甲基化.结论:错配修复基因hMLH1在膀胱癌组织中有一定程度的过甲基化,可作为膀胱癌临床早期诊断的指标之一.

摘要： 目的:检测膀胱癌组织中hMLH1基因启动子甲基化状态,并探讨其对膀胱癌早期诊断的临床意义.方法:收集新鲜的膀胱癌组织及癌周组织30例,正常人血清14例.采用甲基化特异PCR分别检测膀胱癌组织、癌周组织及正常血清DNA中hMLH1基因启动子甲基化状态.结果:在所测的30例膀胱癌标本中,10例癌组织(33.3％),1例癌周组织.(3.3％)中检测到hMLH,基因异常甲基化,正常血清中未检测到hMLH基因异常甲基化.结论:错配修复基因hMLH1在膀胱癌组织中有一定程度的过甲基化,可作为膀胱癌临床早期诊断的指标之一.

摘要： 目的:检测膀胱癌组织中hMLH1基因启动子甲基化状态,并探讨其对膀胱癌早期诊断的临床意义.方法:收集新鲜的膀胱癌组织及癌周组织30例,正常人血清14例.采用甲基化特异PCR分别检测膀胱癌组织、癌周组织及正常血清DNA中hMLH1基因启动子甲基化状态.结果:在所测的30例膀胱癌标本中,10例癌组织(33.3％),1例癌周组织.(3.3％)中检测到hMLH,基因异常甲基化,正常血清中未检测到hMLH基因异常甲基化.结论:错配修复基因hMLH1在膀胱癌组织中有一定程度的过甲基化,可作为膀胱癌临床早期诊断的指标之一.

摘要： 目的:检测膀胱癌组织中hMLH1基因启动子甲基化状态,并探讨其对膀胱癌早期诊断的临床意义.方法:收集新鲜的膀胱癌组织及癌周组织30例,正常人血清14例.采用甲基化特异PCR分别检测膀胱癌组织、癌周组织及正常血清DNA中hMLH1基因启动子甲基化状态.结果:在所测的30例膀胱癌标本中,10例癌组织(33.3％),1例癌周组织.(3.3％)中检测到hMLH,基因异常甲基化,正常血清中未检测到hMLH基因异常甲基化.结论:错配修复基因hMLH1在膀胱癌组织中有一定程度的过甲基化,可作为膀胱癌临床早期诊断的指标之一.

摘要： 目的:检测膀胱癌组织中hMLH1基因启动子甲基化状态,并探讨其对膀胱癌早期诊断的临床意义.方法:收集新鲜的膀胱癌组织及癌周组织30例,正常人血清14例.采用甲基化特异PCR分别检测膀胱癌组织、癌周组织及正常血清DNA中hMLH1基因启动子甲基化状态.结果:在所测的30例膀胱癌标本中,10例癌组织(33.3％),1例癌周组织.(3.3％)中检测到hMLH,基因异常甲基化,正常血清中未检测到hMLH基因异常甲基化.结论:错配修复基因hMLH1在膀胱癌组织中有一定程度的过甲基化,可作为膀胱癌临床早期诊断的指标之一.

摘要： 本发明涉及错配修复基因hMLH1异常剪接体的定性及定量检测试剂盒及其用途。试剂盒的主要成分包括：(1)hMLH1基因cDNA？PCR定性扩增与测序引物2对；(2)hMLH1基因cDNA实时定量PCR扩增引物8对；(3)RT-PCR试剂；(4)PCR扩增用试剂。通过本试剂盒得到的PCR扩增产物，可通过琼脂糖凝胶电泳结合DNA序列分析确认mRNA表达产物，并采用实时定量PCR方法定量分析mRNA表达水平。本试剂盒具有高效的mRNA检出作用。用于hMLH1基因异常剪接体的检测。

摘要： 本发明公开了中国北方大肠癌患者hMLH1基因的新突变及其用途，它涉及中国北方散发大肠癌患者的hMLH1基因的一种新的突变类型。本发明在1/342例散发大肠癌患者中发现一种新的突变，即：c.704GAT＞GTT(p.Asp235Val)。本发明按照以下步骤操作进行：1、DNA提取；2、设计引物；3、PCR-SSCP；4、测序；5、与GeneBank原始序列核对。本发明在已报道hMLH1基因突变基础上更丰富了hMLH1基因在大肠癌患者中的突变谱。为大肠癌患者的分子诊断和治疗提供了理论基础。