葡萄糖异构酶

摘要： 高果糖浆是一种可替代蔗糖的甜味剂,在食品和饮料行业应用广泛。该研究实现了经密码子优化的密苏里游动放线菌(Actinoplanes missouriensis) CICIM B0118(A)来源的葡萄糖异构酶在食品安全菌株谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum) 13032中的异源表达,构建了重组谷氨酸棒杆菌C.glutamicum 13032/pXMJ19-xylA。以其细胞菌体作为全细胞催化剂,对D-葡萄糖异构化生成D-果糖的全细胞转化体系进行优化,结果表明,菌体质量浓度40 g/L、底物D-葡萄糖质量浓度180 g/L、Mg^(2+)浓度10 mmol/L、Co^(2+)浓度1 mmol/L,70°C、220 r/min下连续转化18 h,D-果糖质量浓度达到103.32 g/L,转化率为57.4%,实现了高果糖浆的一步法安全生物合成。该研究为高果糖浆的工业化生产提供了实验和理论基础,具有重要的参考价值。

摘要： 以土壤为材料,经过初筛平板富集培养,分离纯化得到了能正常生长的28株细菌和35株放线菌;再分别进行液体发酵,用改进的硫酸-咔唑法测定胞内、外酶活,筛选出了一株产胞外葡萄糖异构酶活力最高的细菌株菌XJ-27.对该菌株进行形态特征和16S rDNA序列比对分析,并对其胞外葡萄糖异构酶进行了部分性质研究.结果 表明:该菌株酶活力为242.1 U·mL-1,属于芽孢杆菌属(Bacillus),70°C测得最适pH为7.0～7.8;在pH 7.4时其最适反应温度为70～80°C;Mg2+和Co2+对其酶活力有显著提高,Mg2+的效果最明显.

摘要： 葡萄糖异构酶在体外可以将D-葡萄糖异构化为D-果糖,是商业制备高果糖浆的关键酶.本研究从嗜热菌Alicyclobacillus sp.A4中克隆了葡萄糖异构酶(A4GI)基因,并在大肠杆菌BL21中成功进行了表达.利用His-tag蛋白纯化磁珠对粗酶液进行纯化,并对已纯化的重组A4GI进行详细的酶学性质及转化率的测定.结果表明:A4GI的最适温度和pH分别为65°C和pH 7.5,该酶在pH 6.0-11.0之间很稳定,在pH 6.0-11.0缓冲液中37°C处理1h后,剩余酶活99％以上.最适反应条件下,重组酶对D-葡萄糖的Km与Vmax值为99.8 mM与3.75 μmol/min/mg.在不同浓度的葡萄糖转化实验中,A4GI的转化率在一定底物浓度范围内随底物浓度增加呈现升高的趋势,在底物葡萄糖浓度为3M时达到52.7％的最高转化率,因此可以实现在高浓度葡萄糖下进行高效转化,降低后期浓缩的生产成本,具有较好的工业应用潜力.

摘要： 磷脂酶C(PLC)能够水解细胞膜主要成分磷脂,使细胞膜通透性增强,从而能够释放出胞内物质.作者构建了PLC与天然胞内定位蛋白葡萄糖异构酶(GI)共表达的重组大肠杆菌,摇瓶发酵胞外上清液中GIC酶活达到3.4 U/mL,占胞外和胞内总酶活的93％,表明GIC成功实现了胞外表达.将胞外上清液中的GIC进行分离纯化和酶学定性,发现其比活为12.1 U/mg,最适反应温度为80°C,最适pH为10,均与对照菌单独表达的GIo性质基本一致.在此基础上,对上述重组菌进行3L发酵罐培养,发酵周期为24 h,酶活达到17.7 U/mL,表明其良好的工业化放大生产前景.%Phospholipase C (PLC) hydrolyzes the phospholipids in the membrane.The hydrolysis was partial,which would enhance the cell membrane permeability,and then proteins in the cytoplasm were released into culture medium.In this study,PLC was co-expressed with glucose isomerase (GI).In shake flask fermentation of recombinant E.coli BL21 (DE3),the activity of GIC in culture supernatant was 3.4 U/mL,which was 93％ of the total enzyme activity in culture supernatant and cytoplasm.GIc was released into culture medium.The GIC was purified andcharacterized.The specific activity of GIc was 12.1 U/mg,the optimum temperature was 80 °C,and the activity of GIc was maximal at pH 10.The characteristics of GIc were similar to GIo,In addition,The enzyme activity reached 17.7 U/mL in 24 hours by utilizing fed-batch strategy in 3 L fermentor.

摘要： 葡萄糖异构酶(glucose isomerase, GI)又称D2木糖异构酶(D-xylose isomerase)，能催化D2葡萄糖至D2果糖的异构化反应, 它是工业上大规模从淀粉制备高果糖浆(high fructose corn syrup ,HFCS)的关键酶[1]。葡萄糖异构酶是葡萄糖转化成果糖的关键酶制剂，其产能一直是各科研机构及企业研究的课题。本文阐述了在果葡糖浆生产过程中，研究酶制剂的性能参数，通过异构的精细化操作，对异构酶运行各因素进行了分析，并对最大限度提升异构酶产能做出了一系列阐述。

摘要： 高果糖浆作为一种天然甜味剂,被广泛应用于食品和饮料中.葡萄糖异构酶是生产高果糖浆的关键酶之一,是重要的工业用酶,其固定化技术十分成熟,被认为是固定化酶制剂的一个范本.主要介绍了葡萄糖异构酶及其固定化方法以及葡萄糖异构酶在高果糖浆生产中的应用.

摘要： 通过基因挖掘的方法从NCBI数据库中筛选得到一株嗜热的葡萄糖异构酶(GI)产生菌株Thermotoga petrophila RKU-1,化学合成该酶的基因并在大肠杆菌E.coli BL21 (DE3)中进行可溶性表达.重组葡萄糖异构酶经过Ni-NTA柱亲和层析分离纯化后,对纯酶进行SDS-PAGE检测,结果显示为单一条带,其分子量大小为50.8 kDa.测定了该重组酶对底物D-葡萄糖的活力为19.8 U/mg,并对其酶学性质进行了表征.该酶最适温度和pH分别为85 °C和7.0,Co2+对催化活力起着非常重要的作用,对底物D-葡萄糖的Km值和Vmax值分别为373 mmol/L和13.4 U/mg.在最适条件下,反应在4h内达到平衡,果糖得率最高达到53.8％.

摘要： 本研究比较了壳聚糖微球法、聚乙烯醇-海藻酸钠包埋法、微晶纤维素法及壳聚糖絮凝-戊二醛交联法对含有葡萄糖异构酶细胞的固定化效果,发现壳聚糖絮凝-戊二醛交联法效果最好.最佳固定化条件为:壳聚糖浓度为0.015％ (m/v),戊二醛浓度为0.05％ (v/v),交联时间为3h.采用该方法制备的固定化细胞的酶活为2579 U·g-1,酶活回收率为70.5％,机械强度为1797 g.在分批转化方面,固定化细胞在70°C下重复使用8批次后,转化率仍保持在42.1％以上.此外,固定化细胞在连续柱式转化反应器中连续转化19天,转化得到了约5.7 kg果糖.

摘要： 研究微波处理对葡萄糖异构酶酶活性、稳定性、动力学参数及构象的影响.结果表明:不同微波处理时间和微波处理功率对葡萄糖异构酶的活力都有着不同的影响.在70°C处理5 min条件下,当微波功率为300、400W时,葡萄糖异构酶的相对酶活力分别增加14.23％、8.42％;而当微波功率为600、800 W时,葡萄糖异构酶的相对酶活力分别降低到95.69％、90.78％;微波处理也对葡萄糖异构酶的最适反应温度和动力学参数Km和Vmax有影响,但对其最适pH值几乎没有影响.紫外和荧光光谱研究表明微波处理将导致葡萄糖异构酶部分去折叠,分子中赖氨酸和色氨酸残基所处的微环境发生变化,葡萄糖异构酶的三级结构因此可能发生了改变,即微波处理可能通过改变葡萄糖异构酶的构象从而改变酶的性质.

摘要： 葡萄糖异构酶(Glucose isomerase,GI)能催化D-葡萄糖的异构化反应,生成D-果糖,是目前工业上制备高果糖浆(HFCS)的关键酶之一。本文对GI的来源、分类、高级结构特征和催化机制进行了介绍,并从GI催化功能的改善、基因工程菌的构建和固定化三个方面对GI在HFCS生产中应用的关键技术和策略进行分析。

摘要： 采用半胱氨酸-咔唑法测定发酵粗酶液中葡萄糖异构酶的酶活,确定了半胱氨酸—咔唑法测定葡萄糖异构酶酶活的最佳酶促反应条件为pH值8.0、温度70°C、反应时间75min。

摘要： 葡萄糖异构酶是水溶性酶,固定化葡萄糖异构酶是指通过物理、化学的方法把这种酶固定在不溶性的固体载体上,使载体具有较高的酶活性。rn 得到的固定化酶可以把底物葡萄糖部分的转化为果糖,这种葡萄糖和果糖的混合糖浆称为果葡糖浆。由于固定化酶有许多优点,如：酶可长期多次使用,工业生产可连续化、自动化,易于控制,避免不利副产品的反应发生和产品易精制,从而提高了产品质量,降低了生产成本。因此,固定化葡萄糖异构酶这一新技术的问世促进了果葡糖浆事业的飞跃发展。

摘要： 从海南岛等全国各地收集样品经过六年的分离筛选、诱变育种筛选出一支产葡萄糖异构酶嗜热放线菌高产优良菌种H1033。在此基础上，我们通过细胞融合技术获得一支H1033-101菌株，该菌株生长条件粗放，发酵周期短，不易染菌，发酵液易过滤，胞外酶占95％以上，酶热稳定性好。根据H1033-101菌株的特点，用离子交换树脂作载体进行嗜热放线菌葡萄糖异构酶固定化的研究。通过实验证明，此固定化方法易掌握，工艺简单，操作方便，载体可反复使用，得到的固定化酶机械强度好，保存期长，该固定化酶对发酵液总酶活回收率85％，每千克固定化酶(干)18000-20000u/g可转化42％的果葡糖浆7-8吨。

摘要： 从海南岛等全国各地收集样品经过六年的分离筛选、诱变育种筛选出一支产葡萄糖异构酶嗜热放线菌高产优良菌种M1033.在此基础上,我们通过细胞融合技术获得一支M1033-101菌株,该菌株生长条件粗放,发酵周期短,不易染菌,发酵液易过滤,胞外酶占95﹪以上,酶热稳定性好.根据M1033-101菌株的特点,用离子交换树脂作载体进行嗜热放线菌葡萄糖异构酶固定化的研究.通过实验证明,此固定化方法易掌握,工艺简单,操作方便,载体可反复使用,得到的固定化酶机械强度好,保存期长,该固定化酶对发酵液总酶活回收率85﹪,每千克固定化酶(干)18000-20000u/g可转化42﹪的果葡糖浆7-8吨.

摘要： 通常酶法生产低聚果糖由于副产品葡萄糖的存在，使转化率不高。该文通过用改进的PVA-硼酸法，将磷酸化的PVA-海藻酸钠凝胶包埋黑曲霉细胞，探索了若干固定化条件，并与固定化的葡萄糖异构酶协同作用，将葡萄糖异构化为果糖，减少了底物抑制在50°C，pH7.0条件下与40℅蔗糖溶液反应3.5h，可得较高含量的低聚果糖。重复反应5批，平均转化率57℅，高于单独固定化细胞反应转化率5℅以上。

摘要： 研究了在金属催化剂存在条件下，氢气的压力ＭＧ〈’＋＋〉ＣＡ〈’＋＋〉、过渡金属离子、金属加氢催化剂、硼酸盐和加氢产物甘露醇和山梨醇对固定化葡萄糖异构酶性能的影响，得出了一些消除干扰的方法。

摘要： 本发明涉及利用包含酶和电子传递物质的反应体系测定葡萄糖浓度的技术。在本发明中，提供了使用结合有细胞色素C的葡萄糖脱氢酶或源自属于伯克霍尔德氏属的微生物的葡萄糖脱氢酶作为酶、使用Ru化合物作为电子传递物质的葡萄糖浓度测定方法。在本发明中，还提供了使用结合有细胞色素C的葡萄糖脱氢酶或源自属于伯克霍尔德氏属的微生物的葡萄糖脱氢酶作为酶、使用Ru化合物作为电子传递物质的葡萄糖传感器。

摘要： 本发明公开了一种利用巯丙基琼脂糖球负载葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶检测葡萄糖的方法。该方法以巯丙基琼脂糖球为载体，通过化学反应在巯丙基琼脂糖球的表面和内部负载葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶，形成检测微单元，然后将负载酶的巯丙基琼脂糖球固定在试纸上形成葡萄糖检测试纸条，对葡萄糖进行检测。本发明制备简单，反应条件温和，可以实现随时随地快速高效检测，并且价格低廉，使用安全，对临床葡萄糖监测和疾病诊断有重要指导意义。

摘要： 一种葡萄糖淀粉酶、葡萄糖氧化酶、果胶酶和CBD-木素过氧化物酶棉织物前处理方法，属于棉织物染整前处理技术领域。棉织物先在含葡萄糖淀粉酶和葡萄糖氧化酶的混合酶溶液中处理，通过葡萄糖淀粉酶催化织物上淀粉浆料分解成葡萄糖而将浆料退尽；葡萄糖氧化酶催化葡萄糖与氧气作用生成双氧水。所生成的双氧水既起到漂白作用，又能破坏棉疏水性表层结构，使下层果胶质暴露。然后将棉织物在碱性果胶酶溶液中处理，分解去除果胶质。最后将棉织物在CBD-木素过氧化物酶溶液中处理，通过分解棉籽壳中木素，最终去除棉籽壳。通过本发明，可代替传统化学处理实现棉织物的全生物酶前处理，同时可不再采用传统的双氧水漂白。

摘要： 本发明涉及利用包含酶和电子传递物质的反应体系测定葡萄糖浓度的技术。在本发明中，提供了使用结合有细胞色素C的葡萄糖脱氢酶或源自属于伯克霍尔德氏属的微生物的葡萄糖脱氢酶作为酶、使用Ru化合物作为电子传递物质的葡萄糖浓度测定方法。在本发明中，还提供了使用结合有细胞色素C的葡萄糖脱氢酶或源自属于伯克霍尔德氏属的微生物的葡萄糖脱氢酶作为酶、使用Ru化合物作为电子传递物质的葡萄糖传感器。

摘要： 本发明涉及利用包含酶和电子传递物质的反应体系测定葡萄糖浓度的技术。在本发明中，提供了使用结合有细胞色素C的葡萄糖脱氢酶或源自属于伯克霍尔德氏属的微生物的葡萄糖脱氢酶作为酶、使用Ru化合物作为电子传递物质的葡萄糖浓度测定方法。在本发明中，还提供了使用结合有细胞色素C的葡萄糖脱氢酶或源自属于伯克霍尔德氏属的微生物的葡萄糖脱氢酶作为酶、使用Ru化合物作为电子传递物质的葡萄糖传感器。

摘要： 本发明公开了一种利用巯丙基琼脂糖球负载葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶检测葡萄糖的方法。该方法以巯丙基琼脂糖球为载体，通过化学反应在巯丙基琼脂糖球的表面和内部负载葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶，形成检测微单元，然后将负载酶的巯丙基琼脂糖球固定在试纸上形成葡萄糖检测试纸条，对葡萄糖进行检测。本发明制备简单，反应条件温和，可以实现随时随地快速高效检测，并且价格低廉，使用安全，对临床葡萄糖监测和疾病诊断有重要指导意义。

摘要： 一种葡萄糖淀粉酶、葡萄糖氧化酶、果胶酶和CBD-木素过氧化物酶棉织物前处理方法，属于棉织物染整前处理技术领域。棉织物先在含葡萄糖淀粉酶和葡萄糖氧化酶的混合酶溶液中处理，通过葡萄糖淀粉酶催化织物上淀粉浆料分解成葡萄糖而将浆料退尽；葡萄糖氧化酶催化葡萄糖与氧气作用生成双氧水。所生成的双氧水既起到漂白作用，又能破坏棉疏水性表层结构，使下层果胶质暴露。然后将棉织物在碱性果胶酶溶液中处理，分解去除果胶质。最后将棉织物在CBD-木素过氧化物酶溶液中处理，通过分解棉籽壳中木素，最终去除棉籽壳。通过本发明，可代替传统化学处理实现棉织物的全生物酶前处理，同时可不再采用传统的双氧水漂白。

摘要： 本发明公开了一种固定D‑葡萄糖异构酶与D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶的方法，属于食品加工技术领域。本发明具体公开了一种以大孔载体、交联剂、双酶、无机金属离子杂化形成纳米花的固定化双酶方法，具体步骤是：a具有吸附功能的大孔载体吸附D‑葡萄糖异构酶与D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶；b加入交联剂对酶进行交联；c酶与无机金属离子组装形成双酶‑无机杂化纳米花；其中可以将a、b和c按任意顺序或同时进行制备固定化酶。本固定化双酶既具有较高的酶活，还能保持较好的稳定性和机械强度，既改善大孔载体固定化酶易解吸的问题，又解决有机‑无机杂化纳米花不易装柱连续生产的弊端，对双酶和多酶的固定化应用具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种固定D‑葡萄糖异构酶与D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶的方法，属于食品加工技术领域。本发明具体公开了一种以大孔载体、交联剂、双酶、无机金属离子杂化形成纳米花的固定化双酶方法，具体步骤是：a具有吸附功能的大孔载体吸附D‑葡萄糖异构酶与D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶；b加入交联剂对酶进行交联；c酶与无机金属离子组装形成双酶‑无机杂化纳米花；其中可以将a、b和c按任意顺序或同时进行制备固定化酶。本固定化双酶既具有较高的酶活，还能保持较好的稳定性和机械强度，既改善大孔载体固定化酶易解吸的问题，又解决有机‑无机杂化纳米花不易装柱连续生产的弊端，对双酶和多酶的固定化应用具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种蔗糖磷酸化酶和葡萄糖异构酶级联催化合成黑曲霉二糖的方法，属于酶工程领域。本发明以来源于青春双歧杆菌蔗糖磷酸化酶(BaSP)和葡萄糖异构酶(GI)为研究对象，利用BaSP水解蔗糖产生的葡萄糖启动转糖苷反应，通过GI将副产物果糖转化为转糖苷受体葡萄糖，促进整个反应向转糖苷方向进行，抑制水解作用，最大程度利用副产物，并降低辅底物葡萄糖的添加。在单一底物蔗糖的条件下，级联反应的黑曲霉二糖产量约为BaSP单酶反应的192％，同时果糖产量降低为BaSP单酶反应的80％。本发明构建的酶级联反应对于促进黑曲霉二糖绿色、高效合成具有重要意义。