摘要:
目的:应用PCR法检测微生物类农药木霉菌可湿性粉剂急性经口致病性,探讨PCR法在微生物类农药经口致病性研究中的应用。rn 方法:选用微生物农药木霉菌可湿性粉剂为受试样品,试验动物染毒组按108个孢子/只灌胃,对照组不做任何处理.记录观察期内动物的中毒症状、死亡情况、体重,对死亡动物进行大体解剖并进行病理组织学检查.于染毒后第1、7、14、21天收集动物粪便,同时剖解动物的肾脏、心脏和肝脏等组织提取DNA,利用木霉菌特异性引物进行PCR扩增,并进行琼脂糖凝胶电泳观察受试物目的基因的表达,以观察受试微生物农药的感染性、持久性,以判断其致病性。rn 结果:动物染毒后,未见明显中毒表现,观察期内无死亡,大体检查及病理检查均未见明显异常.染毒后第1天染毒大鼠粪便提取DNA,经PCR扩增琼脂糖凝胶电泳后可见目的基因扩增条带,其余各脏器提取DNA,经PCR扩增后均未见目的基因表达,表明仅粪便中含木霉菌,染毒后7天粪便中目的基因未见表达,表明粪便中木霉菌被清除至检测水平之下.受试物口服进入动物体内后发现仅在胃肠道内存在,并逐渐被清除掉,并未透过受试动物的胃和肠道而侵染进入动物的组织、器官中,提示受试物经口染毒后对大鼠无致病性。rn 结论:应用本检测方法可有效的检测出受试物的清除情况,且具有较好的特异性,可做为微生物农药经口毒性/致病性的检测方法。