弹状病毒

摘要： 1检测总结2021下半年,活宝源鱼病室共检测185份加州鲈样本,大口黑鲈虹彩病毒阳性率为30.80%,传染性脾肾坏死病毒阳性率为1.08%,鳜鱼弹状病毒阳性率为1.08%,神经坏死总检出率为0.00%。1.1大口黑鲈虹彩病毒病(LMBV)该病为下半年加州鲈最主要病毒病,平均阳性率高达30.80%,6月份阳性率更是高达53.3%,七月至十月份的阳性率也高达25.0%以上;11月份至12月接检的样本绝大部分均为未发病的苗种,其平均阳性率也高达17.19%。

摘要： 为探明广东省韶关市某大口黑鲈(Micropterus salmoides)养殖场的大口黑鲈幼鱼大量死亡的原因,对患病鱼进行临床观察,并从细菌学、寄生虫学、病毒学三方面进行检测,排除细菌和寄生虫感染的可能性后,通过RT-PCR检测、细胞分离培养、人工感染、组织病理切片苏木精-伊红(H&E)染色、超薄切片透射电镜观察、系统发育树分析,初步确定分离得到1株大口黑鲈弹状病毒(micropterus salmoides rhabdovirus,MSRV),命名为大口黑鲈弹状病毒韶关株(MSRV-SG01)。人工感染试验结果显示,试验鱼2 d内出现死亡,并伴随出血、烂尾、拖便等临床症状,7 d内死亡率达100%,通过组织病理学切片观察到病鱼的肝脏、脾脏均呈现大面积坏死,与自然患病鱼症状相符。根据G蛋白氨基酸序列,将分离到的MSRV-SG01毒株与GenBank中已报道的其他的弹状病毒进行系统发育树分析比对,结果显示,MSRV-SG01毒株与MSRV-FJ985、MSRV-YH01、SCRV聚为一类,且与已报道的MSRV-FJ985毒株、MSRV-YH01毒株同源性高达97%以上。通过以上的试验分析,确定幼鱼大量死亡的原因为MSRV感染。

摘要： 采用MTT法,选择黄芪多糖、白花蛇舌草、金银花、葡萄糖酸锌、板蓝根、白芍、连翘及黄藤素8种中草药对大口黑鲈弹状病毒(Micropterus salmoides rhabdovirus,MSRV)进行体外抗病毒试验,并挑选黄芪多糖,利用荧光定量PCR方法研究其对病毒复制和宿主细胞内凝集素基因(Intelectin)表达的影响.体外抗病毒试验结果显示,黄芪多糖抗MSRV效果最好,兼具显著的阻断、抑制和中和病毒的效果,其最高阻断作用率为59.13％,最高抑制率为21.64％,最高中和率为105.46％.同时,黄芪多糖还可以抑制MSRV的复制,上调细胞Intelectin基因的表达.另外,连翘、金银花和白芍对MSRV分别有显著的阻断作用(阻断作用率为16.92％)、抑制作用(抑制率为21.64％)、中和作用(中和率为54.01％).结果表明,黄芪多糖相较试验中其他中草药制剂具有更好的抗MSRV效果,可为MSRV的药物防控提供参考.

摘要： 牛流行热病毒是一种由节肢动物传播的弹状病毒,可引起牛和水牛的急性发热性疾病,称为牛流行热、三日热、牛地方性发热等。牛流行热在全球广泛分布,从非洲南部到尼罗河三角洲,穿过中东、南亚和东南亚,进入澳大利亚北部和南部,并遍及中国大部分地区,延伸至日本南部和朝鲜半岛,牛流行热病毒也出现在太平洋岛屿、欧洲或美洲。牛流行热病毒感染后可在临床表现不明显,也可表现出轻微至严重的临床症状,如双相热、流涎、眼和鼻分泌物、卧床、肌肉僵硬、跛行和厌食等。通常牛流行热发病特点为发病快,恢复快,一般持续1~3天,但有报道称某些动物在感染急性期后会出现长时间的麻痹和共济失调。

摘要： 为研究L蛋白在乌鳢水泡病毒(snakehead vesiculovirus,SHVV)增殖过程中发挥的作用,扩增SHVV L基因的前900个碱基,将其克隆到载体pET-32a(+)中,构建原核表达质粒pET32a-L,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。设置不同温度、IPTG浓度及诱导时间,选择最佳的表达条件。通过NI-NTA亲和层析柱纯化蛋白,并利用纯化的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体。用Western blot鉴定抗体特异性,间接免疫荧光观察L蛋白在SHVV感染斑点叉尾鮰卵巢细胞(channel catfish ovary,CCO)中的定位情况。结果显示,纯化的L蛋白分子质量约42 ku,与预期大小相符。制备的L蛋白多克隆抗体可以与L蛋白发生特异性免疫反应,且L蛋白主要定位在细胞质,表明L蛋白多克隆抗体制备成功。

摘要： 近年来宏基因组学研究的普及大大丰富了人们对RNA病毒多样性的认识,但对这些新发现病毒的生物学特性却所知甚少.本文围绕RNA病毒中一类重要的负单链RNA病毒——弹状病毒与其昆虫寄主互作的研究进行综述,总结已发现的弹状病毒及其昆虫寄主类型,共有20个属144种弹状病毒可以感染14个属的昆虫;根据已有的系统进化研究对弹状病毒的寄主起源进行推测;并以感染黑腹果蝇Drosophila melanogaster的sigma病毒(Drosophila melanogaster sigma virus,DMelSV)为主要对象,就弹状病毒引起的CO2麻痹致死症状以及昆虫寄主对其的免疫反应研究进行总结,而在对黑腹果蝇的研究中发现很多非经典免疫通路中的新抗病毒基因,暗示存在新的抗病毒免疫通路;通过飞虱、叶蝉与其传播的植物弹状病毒以及长须罗蛉Lutzomyia longipalpis与其传播的脊椎动物病毒的互作研究,发现Toll、IMD信号通路、细胞自噬及小RNA干扰(small interfering RNA,siRNA)通路等可能与昆虫对弹状病毒的免疫反应相关.昆虫是弹状病毒主要的寄主和媒介,也是病毒遗传多样性的储主,因此更好地研究和了解昆虫寄主与弹状病毒的相互关系,有助于病毒致病和传播机制以及昆虫抗病毒免疫机理的深入研究.

摘要： 为了分析中国北方地区现行的一株鲤春病毒血症病毒(Spring Virernia of Carp Virus,SVCV)SVCV-shlj4全基因组序列,根据GenBank收录的SVCV参考毒株(SVCV-A2,DQ491000.1)基因序列设计了3对重叠引物,对SVCV-shlj4毒株基因组编码区进行扩增,利用RACE试剂盒对该基因组5′和3′非编码区(Untranslated region,UTR)进行扩增,并利用DNAstar软件对测得的序列进行拼接,获得完整的SVCV-shlj4全基因组,结合Lasergene及MEGA 5.1生物信息学软件对该病毒基因组及其编码的核蛋白、糖蛋白和磷蛋白基因序列进行系统进化分析。结果表明:SVCV-shlj4毒株基因组全长为11029 bp,共编码5种结构蛋白(3′端-5′端),分别为核蛋白(Nuclear protein,N)、磷蛋白(Phosphoprotein,P)、基质蛋白(Matrix protein,M)、糖蛋白(Glycoprotein,G)和RNA聚合酶(RNA polymerase,L);基因组序列系统进化分析显示,SVCV-shlj4毒株与中国株SVCV-A2的核苷酸序列一致性最高(99.0%),与欧洲株VR-1390核苷酸序列一致性最低(93.0%);编码M蛋白、G蛋白和P蛋白的基因序列进化分析结果显示,SVCV-shlj4毒株在进化上处于亚洲分支,属于Ⅰa基因型,Ⅰaii基因亚型;SVCV-shlj4毒株各基因变异位点分析显示,与中国株SVCV-A1相比,SVCV-shlj4毒株在N基因编码区第1357、1364和1376 nt位点分别缺失1个碱基,在G基因3′端非编码区4630 nt位点和4639 nt位点分别缺失两段基因序列(44 bp和31 bp),与欧洲株VR-1390相比,SVCV-shlj4毒株在G基因3′端非编码区(4637 nt位点)插入10 bp的基因片段,与中国株BJ0505-2相比,SVCV-shlj4毒株在L基因编码区(5822 nt位点)缺失18 bp碱基。本研究系统地分析了中国北方地区现行SVCV分离株的分子特征,为SVCV分子进化研究提供了数据支撑。

摘要： (三)病毒性疾病1.弹状病毒病病原为弹状病毒,危害苗种,暴发性疾病,主要流行3-4月、10-11月,水温25~28°C易发病,死亡率高达100%。主要症状:体色发黑、反应迟钝、呼吸困难、池边漫游,解剖可见肝、脾、肾脏严重肿大、出血、空肠空胃…尚无有效治疗方法,综合预防为主。

摘要： 为弄清近来鳢科鱼类疫病频发的病因,本研究对采集的患病杂交鳢病料分别从细菌学和病毒学两方面进行病原分离和鉴定.排除细菌感染的可能后,通过细胞培养技术、回归感染试验、电镜技术、分子生物学技术等进行病毒学分析,最终分离到一株弹状病毒,命名为HSHRV-C1207.研究结果显示,该病毒在EPC、FHM、GSB、SFC、CIK等8种细胞中都能复制,并对其中6种细胞产生明显的细胞病变效应(CPE).用分离的病毒进行回归感染实验,可使感染的杂交鱧复制出自然发病鱼的相同症状,且死亡率达90％.感染病料组织液的EPC细胞固定后经电镜观察,发现细胞质内有大量子弹状病毒聚集,直径约60nm,长度约为160nm,形态和排列方式与已报道的鱼类弹状病毒相似.参考OIE中传染性造血器官坏死病毒(IHNV)、病毒性出血性败血症病毒(VHSV)、鲤春病毒血症病毒(SVCV)的检测引物及根据乌鳢弹状病毒(SHRV)、鳜鱼弹状病毒(SCRV)、比目鱼弹状病毒(HIR RV)的G蛋白基因设计特异性引物,分别对自然发病病料组织、接种病料组织的细胞进行RT-PCR扩增,仅针对SCRV的引物能扩增出大小约350bp的片段.对HSHRV-C1207株的G基因进行序列测定和分析,结果表明其核苷酸序列同SCRV和SHRV的同源性分别为93.8％和20.4％,推导的氨基酸序列同源性分别是93.7％和18.3％.用G基因推导氨基酸序列与其它弹状病毒的G蛋白进行系统进化树分析,表明该毒株与水泡性病毒属聚为一支,其中与SCRV的亲缘关系最近,而与属于诺拉弹状病毒属的SHRV相距甚远,可能为SCRV的变异株或一个新的毒株.

摘要： 水疱性口炎病毒属于弹状病毒科,是弹状病毒科中结构最为简单的一种病毒。水疱性口炎病毒能够引起多种动物发病,但人只是偶尔感染,并且仅出现轻微的临床症状。本文介绍了水疱性口炎的基因组结构，分析了水疱性口炎病毒的反向遗传操作技术，阐述了水疱性口炎病毒载体作为载体的优点，探讨了水疱性口炎病毒载体的类型，浅谈了水疱性口炎病毒作为载体的应用情况。

摘要： 本发明构建了基于碳纳米管的G2‑2M重组蛋白亚单位疫苗，浸浴免疫后，鱼群的保护率达到94%左右，高于G2蛋白片段，基于M蛋白片段的引入，提高了重组蛋白的免疫原性和保护效力，其相比在先研究，不需要在进行甘露糖化修饰，生产工艺极大地简化，且生产成本也大幅降低，对渔业可持续发展和水产品食品安全生产具有重要意义。

摘要： 本发明属于病毒检测技术领域，具体涉及传染性脾肾坏死病毒、大口黑鲈鱼病毒和鳜弹状病毒的三重荧光PCR检测试剂盒。本发明的试剂盒包括病毒特异性扩增引物和探针、阳性标准品、阴性标准品、Taq酶、反转录酶、RNA酶抑制剂、反应缓冲液、dNTP、无核酸酶水和冻干保护剂。本发明试剂盒利用三重荧光PCR可以多个通道同时检测，使用不同荧光标记的探针，做到可以一个反应体系同时检测三种病毒，降低了检测难度，缩短了检测时间，可以帮助养户准确及时的拿到检测结果。本发明试剂盒检测灵敏度高、稳定性高，特异性强，与其他水产病毒没有交叉反应，可以用于疫病的早期监测和防控。

摘要： 本发明公开了一种微载体悬浮培养CPB细胞生产鳜传染性脾肾坏死病毒和鳜弹状病毒的方法，本发明的方法包括选择CPB细胞作为制苗用细胞系；CPB细胞依次经搅拌瓶、生物反应器的逐级放大的微载体悬浮培养后作为病毒感染的宿主，最终获得鳜传染性脾肾坏死病毒液和鳜弹状病毒液。所制得的ISKNV效价高达8.34LgTCID

摘要： 本发明属于病毒检测技术领域，具体涉及传染性脾肾坏死病毒、大口黑鲈鱼病毒和鳜弹状病毒的三重荧光PCR检测试剂盒。本发明的试剂盒包括病毒特异性扩增引物和探针、阳性标准品、阴性标准品、Taq酶、反转录酶、RNA酶抑制剂、反应缓冲液、dNTP、无核酸酶水和冻干保护剂。本发明试剂盒利用三重荧光PCR可以多个通道同时检测，使用不同荧光标记的探针，做到可以一个反应体系同时检测三种病毒，降低了检测难度，缩短了检测时间，可以帮助养户准确及时的拿到检测结果。本发明试剂盒检测灵敏度高、稳定性高，特异性强，与其他水产病毒没有交叉反应，可以用于疫病的早期监测和防控。

摘要： 本发明提供了重组的、具有复制能力的以弹状病毒疫苗株为基础的表达载体，它表达异种病毒的抗原性多肽，如免疫缺陷病毒外壳蛋白或其亚基。插入一个弹状病毒基因组内的另外的转录终止/起始单元以表达异种抗原性多肽。象通过重组RVs感染后与人T－细胞系融合所显示的一样，HIV－1gp160蛋白被稳定地和功能性地表达。用一个分离的重组HIV－1gp120蛋白进行单一的强化免疫后，用表达HIV－1 gp160的重组狂犬病毒接种小鼠诱导出强烈的针对HIV－1外壳蛋白的体液应答。而且，在鼠血清中检测到的抗HIV－1的中和滴度高达1∶800。这些表达病毒抗原性多肽的重组病毒载体提供了可产生病毒特异性免疫应答的有用的和有效的药剂组合物。

摘要： 本发明涉及一种鳜鱼蛙病毒及弹状病毒双重PCR检测试剂盒及检测方法，属于PCR技术领域。本发明提供的鳜鱼蛙病毒及弹状病毒双重PCR检测试剂盒，包括引物、EasyTaq PCR SuperMix、阴性对照液和阳性对照液；其中，所述引物包括针鳜鱼蛙病毒的MCP基因保守区设计的的引物，还包括针对鳜鱼弹状病毒的N基因保守区设计的引物。本发明所述的鳜鱼蛙病毒及弹状病毒双重PCR检测试剂盒及检测方法，可以同时快速、高效、准确的检测鳜鱼蛙病毒和弹状病毒，省时省力，为染病的鳜鱼争取更多的治疗时间，对于后续研究及防控具有重要意义。

摘要： 本发明公开了一种重组杆状病毒表达的鳜鱼弹状病毒糖蛋白的制备方法，包括：引物设计与合成：目的基因的扩增与纯化；重组供体质粒pFastBac‑G的构建；重组穿梭质粒rBacmid‑G的构建；重组杆状病毒的制备；目的蛋白的纯化及Western blot检测。本发明可以获得大量抗原性、免疫原性较好的、与天然蛋白功能相似的可溶性重组蛋白，适用于鳜鱼弹状病毒糖蛋白的高效表达及DNA疫苗制备。

摘要： 本发明公开了一种制备和纯化溶瘤病毒的方法及重组溶瘤弹状病毒，该制备方法利用Vero细胞制备溶瘤病毒（特别是VSV病毒），首先利用Vero细胞优化病毒扩增条件，包括优化病毒感染复数（MOI）、病毒稀释液、病毒扩增液、扩增时血清浓度、细胞培养体积、病毒收获时间等条件；进一步通过优化病毒纯化条件，包括优化离心力、蔗糖垫底离心、离心时间、分步离心等条件，发现VSV病毒粒子在3%FBS培养基中，按MOI=5的比例感染Vero细胞48h，收获病毒液，在4°C、26000×g离心1h后，进行28000×g离心（30min‑45min）确定在分步离心条件下能稳定制备出高滴度的VSV病毒。该制备方法能高效、稳定、节约成本，为后续VSV病毒的规模化生产提供了技术支持，可用于制备抗肿瘤用的病毒药物。

摘要： 本发明提供了用于检测传染性脾肾坏死病毒与鳜鱼弹状病毒的引物组，所述引物组包含两对引物，所述第一对引物的序列如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4，所述第二对引物序列如SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8所示。本发明可同时对染性脾肾坏死病毒与鳜鱼弹状病毒进行快速检测，而且可以简化操作程序、节约成本。

摘要： 本发明公开了一种微载体悬浮培养CPB细胞生产鳜传染性脾肾坏死病毒和鳜弹状病毒的方法，本发明的方法包括选择CPB细胞作为制苗用细胞系；CPB细胞依次经搅拌瓶、生物反应器的逐级放大的微载体悬浮培养后作为病毒感染的宿主，最终获得鳜传染性脾肾坏死病毒液和鳜弹状病毒液。所制得的ISKNV效价高达8.34LgTCID