PCR鉴定

摘要： 猪细菌性疾病是由各种细菌感染引起的疾病,在世界养猪场中普遍存在,给养猪业带来巨大的经济损失,严重威胁着养猪业的发展。本研究目的是通过分析2016~2018年收集的来自于中国15个不同省份的14610份样本来探索多种细菌病原体的流行情况。对样本采集的地理分布、组织来源分析发现湖南省的细菌分离率最高,肺脏组织样本中细菌病原体率高于其他组织。病原分离情况分析表明,单一病原体感染的比例约为66.53%,主要细菌病原体包括猪链球菌(Ss)、大肠杆菌(E.coli)、副猪嗜血杆菌(Hps)、葡萄球菌(S.hyicus)、多杀性巴氏杆菌(Pm)、支气管败血杆菌(Bb)、胸膜肺炎放线杆菌(App)、猪红斑丹毒丝菌(Er)和沙门氏菌(Salm),分离率分别为21.32%、13.45%、13.42%、6.23%、3.47%、2.85%、2.07%、2.02%和1.70%。多种病原体混合感染的比例为33.47%,且存在46种混合感染组合,其中两种病原混合感染比例最高,如Ss与E.coli,Ss与Hps、Hps与E.coli。其中Ss、Hps和E.coli与其他病原体的分离率分别为26.45%、9.76%,20.36%。表明这三种病原体相互感染的现象最为常见。对9大病原在不同年份及不同月份的流行率分析发现,在2016~2018年App、Bb、Hps、Pm、Ss、Er和Salm的流行趋势呈上升趋势,但E.coli和S.hycius的流行率在2016~2018年呈下降趋势。Ss和E.coli具有季节性流行特征,在夏季(5~8月)流行率较高,而Hps在冬季(12月~第二年2月)流行率较高。综上所述,该研究从年份和季节层面提供了9大病原体流行率和多种病原体混合感染的情况,有助于监测、预防和控制中国养猪场的细菌性疾病。

摘要： 无菌采集榆林某湖羊场发生肺炎的羔羊肺组织,经抹片革兰氏染色镜检,PCR检测后进行分离培养、菌体形态和菌落形态等鉴定,并通过PCR检测及测序等对分离物进行菌株鉴定。结果表明,分离物革兰氏染色阴性,菌体呈多形性,在PPLO固体培养基上形成具有“中心脐”的典型煎蛋样菌落;PCR种属鉴定结果显示支原体目和精氨酸支原体引物扩增产物与预期一致,且精氨酸支原体引物扩增产物测序结果与Genebank中精氨酸支原体的序列相似性为100%。研究结果明确了精氨酸支原体能够引起绵羊支原体肺炎,其将为该病的防治和研究提供病原学基础。

摘要： 乙型脑炎病毒(JEV)属于黄病毒科黄病毒属,是一种重要的人畜共患病原体。JEV于1924年在日本首次被发现,至今已成为东南亚国家人类健康的主要威胁之一。JEV主要通过蚊媒传播,禽类是JEV的主要扩增宿主之一。本研究为了调查JEV在鸭群的流行情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对江苏省某地部分鸭群进行JEV的血清抗体检测,同时对疑似病例进行了JEV的PCR检测。结果显示,在被检测的20份产蛋种鸭血清样本中JEV抗体阳性率为75%(15/20);PCR检测结果显示,在所检测的19份病死雏鸭样本中,有1份为JEV阳性,2份为JEV弱阳性,20份产蛋种鸭抗凝血样本均为阴性。该项研究结果表明了该地鸭群中存在JEV感染,对当地养殖业构成潜在的威胁,同时提醒需要加强JEV在鸭群中的监测并采取有效的防控措施。

摘要： 对青海湖南岸普氏原羚保护站送检病死普氏原羚进行病原诊断,经临床症状、剖检变化、病原菌的分离培养、PCR鉴定,确诊该普氏原羚是由B型诺维氏梭菌感染引起的死亡。

摘要： 安徽省颍东区1个湖羊场从4月底开始发生羔羊气喘的病例,断断续续零星发生,时轻时重,于5月羔羊长期出现死亡现象,接到报告后,进行化验、诊断和治疗,很快控制了疫情。

摘要： 2019年12月广西玉林某猪场猪连续发生多起保育猪突然死亡病例,为确诊该猪场猪发病死亡原因并调查分离菌株的致病性与耐药情况,对发病猪场进行采样和细菌分离培养,并对分离菌株进行形态学观察、生化鉴定、gdh基因PCR扩增、血清型和7个毒力基因的鉴定、耐药性检测以及耐药基因的鉴定.结果显示,从两头病死猪中各分离出1株细菌,在TSB固体培养基表面培养为灰白色、表面光滑、边缘整齐且大小一致的圆形菌落,初步鉴定为革兰阳性链球菌,分别命名为GXYL-F1、GXYL-N2.经猪链球菌特异性基因gdh及血清型引物鉴定,两分离株均为9型猪链球菌.生化鉴定结果显示,两分离菌株均可发酵水杨素、麦芽糖、M.R.和七叶苷.PCR检测菌株的毒力基因结果显示,gdh、fbps、sao、sbp2'和orf2均为阳性,mrp、epf、sly基因均为阴性.药敏试验结果显示,两分离株均对新霉素、链霉素、替米考星、泰乐菌素、红霉素、四环素、左氧氟沙星、青霉素和磺胺嘧啶这9种药物呈耐药性,此外分离菌株GXYL-F1还对恩诺沙星耐药.两分离菌株均扩增出耐药基因aadA1、qnrB、qnrS.表明该猪场保育猪突然死亡是由9型猪链球菌引起.上述研究结果为该猪场制定9型猪链球菌防治措施提供参考依据,并为了解猪链球菌流行血清型多样性与防控技术研究提供了新的数据.

摘要： 为了解猪群中猪源肺炎克雷伯氏菌耐药情况和毒力基因携带状况,2019年采集存栏生猪肛拭子样品125份、宰后生猪肉类样品50份,通过细菌分离培养、药敏试验以及PCR扩增16S rRNA、khe基因、耐药基因和毒力基因等方法对肺炎克雷伯氏菌特性进行分析.结果显示,从125份肛棉拭子样品、50份宰后生猪肉类样品中各分离得到32、4株肺炎克雷伯氏菌;药敏试验结果显示,分离的肺炎克雷伯氏菌对四环素耐药性最高(83.3％),其次是氯霉素(63.9％).对36株分离菌进行耐药基因和毒力基因检测,发现携带耐药基因tet(A)的达30株、携带floR、mcr-1的分别为23、10株,且有23株菌同时携带tet(A)和floR基因,少部份菌株携带aadA1、blaTEM、blaCTX-M-1、blaOXA、qnrB、aac(6')-Ib-cr;携带毒力基因wabG的达26株、携带uge和fimH的25株、携带kfu的23株、携带aereobactin的7株,且有20株菌同时携带wabG、uge、fimH和kfu基因.结果表明,我国猪群中肺炎克雷伯氏菌检出率可能较高,菌株携带耐药基因及毒力基因较为集中,对部分抗生素耐药性较强.本研究为肺炎克雷伯氏菌的检测、诊断以及合理使用抗生素治疗提供了试验依据,同时也为猪源肺炎克雷伯氏菌防控提供了数据支撑.

摘要： 为了解云南某地区的猪嗜血支原体病的流行情况.采用血液涂片镜检、PCR鉴定、同源性比对与遗传进化分析.结果云南某地区猪嗜血支原体的感染率为2％;同源性比对与E.suis的同源性在97.2％～96.9％;遗传进化与U88565、AF029394为同一分支,亲缘关系较近,说明云南某地区存在猪嗜血支原体流行,这为该病的治疗提供科学依据.

摘要： [目的]为了鉴定甘肃武威地区某牛场中牛病毒性腹泻病的发病情况,分别采集了13只病牛的血液样品、粪便样品配合诊断.[方法]通过血清学诊断方法和PCR鉴定的方法对样本进行了检测.[结果]显示血清学方法中的13份血液样本有8份为抗原检测为阳性,粪便样本提取RNA,进行RT-PCR同样可以检测到8份样本中扩增得到片段大小为267bp的条带,检测的13份样本有8份样本的血清学检测和粪便PCR检测均为阳性.[结论]本次检测的BVDV阳性率为61.54％,结果表明本次检测的甘肃武威地区某养殖场的牛病毒性腹泻抗原阳性率较高,需要加强牛病毒性腹泻的防控,采取科学的手段治理该类疾病降低其对养牛产业的损失.

摘要： 兔巴氏杆菌(Pasteurella)病又称为兔出血性败血症,由多杀性巴氏杆菌引起的一种急性传染病.近期,福建省某兔场大量母兔死亡,笔者对病兔进行剖检和病理组织学观察,还进行了实验室分子生物学检测和药敏试验.剖检发现病兔主要为肾脏有出血和白色病死灶,肺脏肿胀、出血、淤血,淋巴结出血等.病理组织学变化主要表现为病兔肺脏呈间质性肺炎,局部充血、出血;淋巴结则表现为生发中心增多;肾脏肾小管上皮细胞变性坏死,有的部分可见化脓性肾炎.细菌的分离鉴定结果表明,该病原体为革兰阴性菌,在血琼脂平板上呈单菌落、透明露滴状;生化试验结果表明,枸橼酸、明胶、葡萄糖、阿拉伯糖阳性;分子生物学PCR鉴定结果表明,1450 kb左右有一条特异性条带,符合预期;PCR产物测序结果表明,该菌与巴氏杆菌1986076011株同源性最高达到98.24％;动物试验结果表明,接种的试验小鼠全部死亡.可见,所分离的细菌是兔巴氏杆菌.药敏试验结果表明,该细菌对氟苯尼考、先锋霉素V、头孢曲松敏感,对氨苄西林、苯唑西林、哌拉西林等药物不敏感.

摘要： 目的:构建广西巴马小型猪p-PSP-Intron-Cafp载体并生产转植酸酶基因的猪. 方法:根据GenBank上登录的猪腮腺分泌蛋白(PSP)基因序列设计合成一对特异性引物,利用PCR技术扩增广西巴马小型猪的PSP基因启动子序列,并与连有Cafp基因的重组质粒进行酶切、连接、转化,构建p-PSP-Intron-Cafp载体,利用电转方法将p-PSP-Intron-Cafp载体转入胎猪成纤维细胞中,通过荧光观察及细胞PCR鉴定的方法,证明转染成功.再将此细胞用于手工克隆的供体,生产转植酸酶基因环保猪,并进行鉴定. 结果:成功构建了p-PSP-Intron-Cafp载体,并验证其在细胞中成功表达,并生产转植酸酶基因的猪. 结论:成功获得转植酸酶基因猪.

摘要： 目的:构建广西巴马小型猪p-PSP-Intron-Cafp载体并生产转植酸酶基因的猪. 方法:根据GenBank上登录的猪腮腺分泌蛋白(PSP)基因序列设计合成一对特异性引物,利用PCR技术扩增广西巴马小型猪的PSP基因启动子序列,并与连有Cafp基因的重组质粒进行酶切、连接、转化,构建p-PSP-Intron-Cafp载体,利用电转方法将p-PSP-Intron-Cafp载体转入胎猪成纤维细胞中,通过荧光观察及细胞PCR鉴定的方法,证明转染成功.再将此细胞用于手工克隆的供体,生产转植酸酶基因环保猪,并进行鉴定. 结果:成功构建了p-PSP-Intron-Cafp载体,并验证其在细胞中成功表达,并生产转植酸酶基因的猪. 结论:成功获得转植酸酶基因猪.

摘要： 目的:构建广西巴马小型猪p-PSP-Intron-Cafp载体并生产转植酸酶基因的猪. 方法:根据GenBank上登录的猪腮腺分泌蛋白(PSP)基因序列设计合成一对特异性引物,利用PCR技术扩增广西巴马小型猪的PSP基因启动子序列,并与连有Cafp基因的重组质粒进行酶切、连接、转化,构建p-PSP-Intron-Cafp载体,利用电转方法将p-PSP-Intron-Cafp载体转入胎猪成纤维细胞中,通过荧光观察及细胞PCR鉴定的方法,证明转染成功.再将此细胞用于手工克隆的供体,生产转植酸酶基因环保猪,并进行鉴定. 结果:成功构建了p-PSP-Intron-Cafp载体,并验证其在细胞中成功表达,并生产转植酸酶基因的猪. 结论:成功获得转植酸酶基因猪.

摘要： 目的:构建广西巴马小型猪p-PSP-Intron-Cafp载体并生产转植酸酶基因的猪. 方法:根据GenBank上登录的猪腮腺分泌蛋白(PSP)基因序列设计合成一对特异性引物,利用PCR技术扩增广西巴马小型猪的PSP基因启动子序列,并与连有Cafp基因的重组质粒进行酶切、连接、转化,构建p-PSP-Intron-Cafp载体,利用电转方法将p-PSP-Intron-Cafp载体转入胎猪成纤维细胞中,通过荧光观察及细胞PCR鉴定的方法,证明转染成功.再将此细胞用于手工克隆的供体,生产转植酸酶基因环保猪,并进行鉴定. 结果:成功构建了p-PSP-Intron-Cafp载体,并验证其在细胞中成功表达,并生产转植酸酶基因的猪. 结论:成功获得转植酸酶基因猪.

摘要： 目的:构建广西巴马小型猪p-PSP-Intron-Cafp载体并生产转植酸酶基因的猪. 方法:根据GenBank上登录的猪腮腺分泌蛋白(PSP)基因序列设计合成一对特异性引物,利用PCR技术扩增广西巴马小型猪的PSP基因启动子序列,并与连有Cafp基因的重组质粒进行酶切、连接、转化,构建p-PSP-Intron-Cafp载体,利用电转方法将p-PSP-Intron-Cafp载体转入胎猪成纤维细胞中,通过荧光观察及细胞PCR鉴定的方法,证明转染成功.再将此细胞用于手工克隆的供体,生产转植酸酶基因环保猪,并进行鉴定. 结果:成功构建了p-PSP-Intron-Cafp载体,并验证其在细胞中成功表达,并生产转植酸酶基因的猪. 结论:成功获得转植酸酶基因猪.

摘要： 为确诊引起某养貂场的主要细菌性疾病,对山东省潍坊市某水貂养殖户送检的病死水貂进行剖检,根据病貂的临床症状、病理剖检变化及对分离纯化的细菌进行形态特征观察、生化试验、细菌16SrRNA PCR 鉴定、药物敏感试验、致病性试验,确诊为绿脓杆菌感染.药物敏感试验结果表明,分离菌株对羧苄青霉素、庆大霉素、新霉素N、环丙沙星、磺胺嘧啶高度敏感,对土霉素、替米考星、氨苄青霉素、大观霉素、先锋霉素Ⅵ等表现耐药性.

摘要： 为确诊引起某养貂场的主要细菌性疾病,对山东省潍坊市某水貂养殖户送检的病死水貂进行剖检,根据病貂的临床症状、病理剖检变化及对分离纯化的细菌进行形态特征观察、生化试验、细菌16SrRNA PCR 鉴定、药物敏感试验、致病性试验,确诊为绿脓杆菌感染.药物敏感试验结果表明,分离菌株对羧苄青霉素、庆大霉素、新霉素N、环丙沙星、磺胺嘧啶高度敏感,对土霉素、替米考星、氨苄青霉素、大观霉素、先锋霉素Ⅵ等表现耐药性.

摘要： 为确诊引起某养貂场的主要细菌性疾病,对山东省潍坊市某水貂养殖户送检的病死水貂进行剖检,根据病貂的临床症状、病理剖检变化及对分离纯化的细菌进行形态特征观察、生化试验、细菌16SrRNA PCR 鉴定、药物敏感试验、致病性试验,确诊为绿脓杆菌感染.药物敏感试验结果表明,分离菌株对羧苄青霉素、庆大霉素、新霉素N、环丙沙星、磺胺嘧啶高度敏感,对土霉素、替米考星、氨苄青霉素、大观霉素、先锋霉素Ⅵ等表现耐药性.

摘要： 为确诊引起某养貂场的主要细菌性疾病,对山东省潍坊市某水貂养殖户送检的病死水貂进行剖检,根据病貂的临床症状、病理剖检变化及对分离纯化的细菌进行形态特征观察、生化试验、细菌16SrRNA PCR 鉴定、药物敏感试验、致病性试验,确诊为绿脓杆菌感染.药物敏感试验结果表明,分离菌株对羧苄青霉素、庆大霉素、新霉素N、环丙沙星、磺胺嘧啶高度敏感,对土霉素、替米考星、氨苄青霉素、大观霉素、先锋霉素Ⅵ等表现耐药性.

摘要： 以国家级地方鸡种基因库中所保种的乌鸡公鸡和茶花鸡母鸡为实验材料，通过PCR鉴定乌鸡公鸡个体的玫瑰冠位点显隐性情况，交配得到不同组合的种蛋，进行孵化实验分析玫瑰冠R位点对精子受精能力影响。交配组合分为4组:(1)RR公鸡精液输茶花鸡母鸡;(2)Rr公鸡精液输茶花鸡母鸡;(3)RR公鸡精液与茶花鸡公鸡精液等比例混合输茶花鸡母鸡;(4)Rr公鸡精液与茶花鸡公鸡精液等比例混合输茶花鸡母鸡。对乌鸡公鸡个体通过PCR等分子生物学的方法进行基因型的判定，成功区分了显性杂合个体和显性纯合个体，改变了传统育种通过性成熟个体与隐性纯合个体进行测交，观测后代表型来区分显性杂合个体和显性纯合个体的做法，极大的缩短了育种和实验时间，节约了大量的人力和物力。同时，在育种实践中根据亲本的基因型，设计配种组合，可以成功地控制后代的冠型表型。

摘要： 本发明公开了一种特异性PCR引物及利用其鉴定鬣羚(Capricornis sumatraensis)的方法，该所述方法包括：1)提取待测样品的总DNA；2)采用特异性PCR引物对所述总DNA进行PCR扩增；3)取步骤2)中得到的产物做琼脂糖凝胶电泳检测；在步骤3)所得的琼脂糖凝胶电泳图中，若泳道中出现1条特定长度的条带，则判断所述待测样品为来自鬣羚的样品，若泳道中不出现1条条带，则判断所述待测样品不是来自鬣羚的样品。该方法中的DNA模板可从动物的毛发、残肢、骨骼、皮张及粪便中提取，大大降低了取样的难度，且该方法可简便快捷地鉴定鬣羚，从而达到了简便易行且经济实用地鉴定鬣羚的目的。

摘要： 本发明提供了一种豌豆PCR鉴定用引物及PCR鉴定方法，所述引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1&2所示。本发明的豌豆PCR鉴定方法，是以样品总DNA为模板，利用上述引物进行PCR扩增，反应结束后根据琼脂糖电泳判定结果。本发明引物特异性好，检测方法快速简单，准确性高，灵敏度好，为豌豆物种资源的鉴定提供了检测方法。

摘要： 本发明提供了珙桐PCR鉴定用引物及PCR鉴定方法。本发明通过分析珙桐与其近缘种植物atpF-atpH基因，设计了dCAPS引物，所述引物核苷酸序列见序列表SEQ ID No.1和SEQ ID No.2。本发明的珙桐PCR鉴定方法，是以样品总DNA为模板，利用上述引物进行PCR扩增，选择相应的限制性内切酶进行酶切，反应结束后根据琼脂糖电泳判定结果。本发明引物特异性好，检测方法快速简单，准确性高，灵敏度好，为珙桐物种资源的鉴定提供了检测方法。

摘要： 本发明提供了菜豆PCR鉴定用引物及PCR鉴定方法，所述引物能对菜豆的叶绿体trnL基因进行扩增，生成菜豆特异性扩增片段，具体核苷酸序列可如序列表SEQ ID No.1&2和No.3&4所示。本发明的菜豆PCR鉴定方法，是以样品总DNA为模板，利用上述引物进行PCR扩增，反应结束后根据琼脂糖电泳判定结果。本发明引物特异性好，检测方法快速简单，准确性高，灵敏度好，为菜豆物种资源的鉴定提供了检测方法。

摘要： 本发明公开了血清1型、2型和11型鸭疫里默氏菌的PCR鉴定引物、试剂盒及多重PCR鉴定方法，属于生物技术领域，PCR鉴定引物分别具有如SEQ ID NO：1‑SEQ ID NO：8所示核苷酸序列；采用分子生物学方法检测并鉴定鸭疫里默氏菌主要流行血清型，实现鸭疫里默氏菌血清1型、2型和11型的准确、快速、稳定和特异性检测，在分子流行病及疫苗研发上有较大的使用价值。

摘要： 本发明公开了一种特异性PCR引物及利用其鉴定鬣羚(Capricornis sumatraensis)的方法，该所述方法包括：1)提取待测样品的总DNA；2)采用特异性PCR引物对所述总DNA进行PCR扩增；3)取步骤2)中得到的产物做琼脂糖凝胶电泳检测；在步骤3)所得的琼脂糖凝胶电泳图中，若泳道中出现1条特定长度的条带，则判断所述待测样品为来自鬣羚的样品，若泳道中不出现1条条带，则判断所述待测样品不是来自鬣羚的样品。该方法中的DNA模板可从动物的毛发、残肢、骨骼、皮张及粪便中提取，大大降低了取样的难度，且该方法可简便快捷地鉴定鬣羚，从而达到了简便易行且经济实用地鉴定鬣羚的目的。

摘要： 本发明公开了一种畜禽肉中猪、牛、羊源性成分鉴定用的引物体系以及PCR鉴定方法与试剂盒。根据动物线粒体DNA 16S rRNA基因的差异位点，设计特异性引物，见序列表SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6。PCR鉴定方法，包括提取待测样本DNA，PCR扩增。试剂盒，包括SEQ ID NO.1?6。本发明引物均仅对各自物种目标片段进行特异性扩增，不会与其他物种发生反应，检测灵敏度较高，能有效鉴别出畜禽肉中的猪、牛、羊源性成分，该方法快速、灵敏、实用；若将该引物体系配合相关的试剂可以制成试剂盒，为工业化生产及应用提供可能，具有良好的应用前景。

摘要： 本发明提供了珙桐PCR鉴定用引物及PCR鉴定方法。本发明通过分析珙桐与其近缘种植物atpF-atpH基因，设计了dCAPS引物，所述引物核苷酸序列见序列表SEQ ID No.1和SEQ ID No.2。本发明的珙桐PCR鉴定方法，是以样品总DNA为模板，利用上述引物进行PCR扩增，选择相应的限制性内切酶进行酶切，反应结束后根据琼脂糖电泳判定结果。本发明引物特异性好，检测方法快速简单，准确性高，灵敏度好，为珙桐物种资源的鉴定提供了检测方法。

摘要： 本发明提供了一种豌豆PCR鉴定用引物及PCR鉴定方法，所述引物的核苷酸序列如序列表SEQ ID No.1&2所示。本发明的豌豆PCR鉴定方法，是以样品总DNA为模板，利用上述引物进行PCR扩增，反应结束后根据琼脂糖电泳判定结果。本发明引物特异性好，检测方法快速简单，准确性高，灵敏度好，为豌豆物种资源的鉴定提供了检测方法。

摘要： 本发明提供了菜豆PCR鉴定用引物及PCR鉴定方法，所述引物能对菜豆的叶绿体trnL基因进行扩增，生成菜豆特异性扩增片段，具体核苷酸序列可如序列表SEQ ID No.1&2和No.3&4所示。本发明的菜豆PCR鉴定方法，是以样品总DNA为模板，利用上述引物进行PCR扩增，反应结束后根据琼脂糖电泳判定结果。本发明引物特异性好，检测方法快速简单，准确性高，灵敏度好，为菜豆物种资源的鉴定提供了检测方法。