RGA法检测促胰岛素分泌肽融合蛋白生物学活性

摘要

一种新的促胰岛素分泌肽融合蛋白(Exendin-4-HSA，Byetalog)生物活性测定方法。它的基本原理是：将GLP-1R和cAMP反应元件(cAMP？response？element，CRE)报告基因载体共转染CHO-K1细胞，加压筛选和单克隆分离培养得到稳定单克隆细胞株CHOglplr/crec14。GLP-1R与配体结合后，经过一系列信号转导，激活CRE报告基因萤光素酶的表达，通过检测Byetalog刺激后萤光素酶表达的变化来对Byetalog活性进行定量。具体检测步骤为：CHOglplr/crec14细胞6000个/孔铺96孔板，培养16-18小时，加入不同浓度Byetalog刺激6小时，检测萤光素酶活性。该方法操作简单，反应灵敏，变异性小，对于Byetalog的质量控制和临床应用具有重要意义。