一种改进扩增DNA片段的重叠式PCR方法

摘要

本发明提出了一种改进扩增DNA片段的重叠式PCR方法，包括两轮PCR扩增；第一轮PCR扩增：以HEK‑293T细胞裂解的基因组DNA为模板扩增，所用引物包括正向引物和反向引物，所述正向引物和反向引物的5＇端均含有酶切位点；第二轮PCR扩增：以第一轮PCR扩增后的产物为模板，加入正向引物和反向引物进行扩增；将第二轮PCR扩增后的产物依次分离、纯化和孵育，然后检测孵育后DNA片段的A260/280。本发明使用含有酶切位点的引物，采用两轮PCR扩增，获得高纯度含有双酶切位点的互补双链基因片段，有利于限制性内切酶识别并获得粘性末端双链。