中国仓鼠卵巢细胞中内源性逆转录病毒的表征及灭活

摘要

嵌入中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的C型内源性逆转录病毒(ERV)被改变以改变培养上清液中逆转录病毒颗粒和/或逆转录病毒样颗粒的释放。尽管缺少这些颗粒的传染性证据，但它们的存在已经引发了安全问题。鉴定出聚集在功能性保守组内的173个C型ERV序列。鉴定出来自一个C型ERV组的转录物为具有完整的开放阅读框的全长转录物，并且具有装载到逆转录病毒样颗粒中的相应病毒RNA基因组。此外，对来自病毒颗粒的基因RNA的序列分析表明，它们可能是由少数表达的ERV序列导致的。本文公开了使用CRISPR‑Cas9基因组编辑对表达的ERV组的gag基因进行破坏/改变。对在DNA和mRNA水平上CRISPR衍生的突变进行比较，从而确定了负责从CHO细胞中释放病毒RNA负载颗粒的单个ERV基因座。在这个特定ERV基因座带有Gag功能缺失突变的克隆显示细胞上清液中含病毒RNA的颗粒减少了超过250倍。值得注意的是，ERV的诱变没有损害细胞生长、细胞大小或重组蛋白的产生。本文提供了一种新的策略和细胞，特别是工程化CHO细胞，以减轻生物制药过程中来自CHO内源性逆转录病毒的潜在污染。