具有高体内NMDA特异性的苯并氮杂卓-L,7-二醇衍生的放射性标记的配体

摘要

本发明涉及由苯并氮杂卓‑1,7‑二醇衍生的化合物(I)，其用于通过正电子发射断层显像(PET)、单光子发射计算机断层显像(SPECT)、基于液体闪烁和/或基于放射性自显影分析诊断与NMDA(N‑甲基‑D‑天冬氨酸)受体相关的疾病或病症。本发明还涉及一种用于诊断与NMDA受体相关的疾病或病症的方法，其通过以对于NMDA受体的PET成像、SPECT成像、基于液体闪烁和/或基于放射性自显影分析有效的量，向有这种诊断需要的患者或患者样品施用的本发明的化合物，记载至少一种PET或SPECT扫描、基于液体闪烁或放射性自显影的结果，以及在基于液体闪烁或放射性自显影结果中，诊断与NMDA受体相关的来自在PET或SPECT扫描上异常的NMDA受体表达模式的疾病或病症。本发明还提供了一种方法，其用于使用本发明的化合物在液体闪烁显像检测分析或放射性自显影分析中评估推定的NMDA受体拮抗剂。

说明书

技术领域

本发明涉及由苯并氮杂卓(benzazepin)-1,7-二醇衍生的化合物，其用于通过正电子发射断层显像(PET)、单光子发射计算机断层显像(SPECT)、基于液体闪烁(liquidbased scintillation-)和/或基于放射性自显影分析(autoradiography-based assay)诊断与NMDA(N-甲基-D-天冬氨酸)受体相关的疾病(disease)或病症(disorder)。本发明还涉及一种用于诊断与NMDA受体相关的疾病或病症的方法，其通过以对于NMDA受体的PET成像、SPECT成像、基于液体闪烁和/或基于放射性自显影分析有效的量，向有这种诊断需要的患者或患者样品施用本发明的化合物，记载至少一种PET或SPECT扫描、基于液体闪烁或放射性自显影的结果，以及在基于液体闪烁或放射性自显影结果中，诊断与NMDA受体相关的来自在PET或SPECT扫描上异常的NMDA受体表达模式的疾病或病症。本发明还提供了一种方法，其用于在液体闪烁显像检测分析或放射性自显影分析中使用本发明的化合物来评估推定的NMDA受体拮抗剂。

背景技术

近年来发现的NMDA受体家族的功能复杂性和配体结合位点的多样性为调节神经元活性提供了多种选择。然而，最近的经验(包括一些令人失望的临床试验)表明这种复杂性使得NMDA受体成为药物研发中的挑战性目标(Monaghan et al.,Neurochem.Int.2012,61,581-592；Curr Opin Pharmacol 2015,20,14-23)。功能性的NMDA受体由四个亚基组成，涉及七个同源性的基因产物中的两个或三个：GluN1、GluN2A-D、GluN3A和3B。亚基组成具有高度适应性，并且取决于受体的宏观或微观位置、发育年龄、神经元功能和活性(Paolettiet al.,Nat.Rev.Neurosci.2013,14,383-400)。由于各个受体异四聚体(heterotetramer)的功能不同，甚至有时是相反的功能，在药物研发中亚型选择性化合物引起了极大的兴趣。

然而，尽管在针对GluN1/GluN2B选择性NTD(N-末端域)配体的药物研究中付出了巨大的努力，临床试验的结果还是令人失望，并且没有达到基础和临床前研究的预期(Ikonomidou and Turski,Lancet Neurol.2002,1,383-386)。比较体外和体内实验的结果，在很多情况下，实验的Ki值(对GluN1/GluN2B受体的亲和力)和诱发特定的药效或药理反应所需的浓度或剂量之间的差异是惊人的。一些体外实验表明了在低纳摩尔的浓度范围内的GluN1/GluN2B选择性NTD调节剂的结合亲和力和药效学作用，而其他工作报道了只在高纳摩尔或低纳摩尔浓度范围内的显著的结合和与受体相关的作用(Schepmann et al.,J.Pharm.Biomed.Anal.2010,53,603-608)。这些研究中的一些表明了与天然的(混合的四异聚(tetraheteromeric))受体的高亲和力和低亲和力相互作用，与绝对值无关，这与报道的分别与重组的GluN1/GluN2B和GluN1/GluN2A的高亲和力和低亲和力结合是一致的。考虑到依利罗地(eliprodil)的高脑摄取率(脑/血浆比率大约为20)(Garrigou-Cadenne etal.,J Pharmacokinet Biopharm 1995,23,147-161)并假设低纳摩尔的结合亲和力(Teweset al.,ChemMedChem 2010,5,687-695)，在临床前的体内研究中，依利罗地的有效剂量以数量级高于预期的足以占据高比例GluN1/GluN2B NTD结合位点的有效剂量(Toulmond etal.,Brain Res.1993,620,32-41)。另外，尽管NMDA受体的各个亚基的区域表达水平是已知的(Laurie et al.,Brain Res Mol Brain Res 1997,51,23-32)，GluN1/GluN2B NTD选择性药物的体内区域结合模式仍然是难以捉摸的。该矛盾的发现鼓励学术和工业研究团队去研发具有改善的药效性质的调节剂，特别是在亲和力和选择性方面(Strong et al.,Expert Opin.Ther.Pat.2014,24,1349-1366；Tewes et al.,ChemMedChem 2010,5,687-695)。除了调节剂的改进的选择性模式，还需要有一些方法以优化剂量方案，以在与脱靶(包括替代的NMDA受体亚型)的结合最少的情况下达到最佳的受体亚型占有率。

Tewes等(ChemMedChem 2010,5,687-695)描述了作为NR2B选择性NMDA受体拮抗剂的3-苯并氮杂卓类的合成和生物学评价。在使用的氚标记的艾芬地尔(Ifenprodil)作为放射性配体的竞争测定中，证明了对于一些3-苯并氮杂卓类稳定地表达重组人NR1a/NR2B受体(地塞米松诱导的，氯胺酮(NMDA拮抗剂)稳定化用于避免细胞死亡)的细胞膜匀浆中含NR2B的NMDA受体的亲和力。为了研究这些3-苯并氮杂卓衍生的NR2B配体的选择性，在受体结合研究中，针对NMDA受体和两种σ受体亚型(σ1和σ2)的苯环己哌啶(PCP)结合位点对这些化合物进行测试。苯并氮杂卓类没有表现出与PCP结合位点显著的相互作用，而表现出对于NMDA受体的多胺结合位点具有高选择性。通常对于σ2受体的亲和力也很低。关于σ1受体，结果表明，3-苯并氮杂卓类中的结构变化可以改变从NR2B选择性配体到σ1选择性配体的受体特性。虽然GluN2B拮抗剂的研发产生了前景光明的临床前结果，以及具有治疗用途潜力的高亲和性和选择性的NR2B NMDA受体拮抗剂，但是迄今为止临床试验也没有建立足够的治疗效益用于医学用途(Addy et al.,J Clin Pharmacol,49,856-864,2009)。

正电子发射断层显像(PET)是一种核医学、功能性的成像技术，其产生体内功能过程的三维图像。该系统检测由发射正电子的放射性核素(示踪剂)间接发射的γ射线对，该放射性核素被引入体内生物活性分子上。然后通过计算机分析构建体内示踪剂的浓度的三维图像。在现代PET-CT扫描仪中，通常借助集成在同一台机器上的同一期间内对患者进行的CT X-射线扫描来完成三维成像。PET和单光子发射计算机断层显像(SPECT)是用于潜在药物的研究和其药效学临床前研究的有价值的技术，并且它们经常用于诊断某种疾病和病症。

因为放射性示踪剂形成具有生物活性和靶标特异性的分子(所谓的PET或SPECT配体)的一部分，所以PET或SPECT技术对在健康和病变的活组织中示踪剂的靶标特异性分布进行成像。根据PET或SPECT配体的靶标特异性，靶标的异常生物分布可以指示疾病和病症。例如，PET或SPECT成像有用于肿瘤和转移位点的诊断(肿瘤学)、神经退行性疾病(例如，阿尔茨海默症)的成像、癫痫发作病灶(seizure focus)的定位、精神病(例如，精神分裂症、药物滥用、心境障碍)的成像(神经影像学)、动脉粥样硬化和血管疾病(心血管病学和神经病学)的成像，以及细菌感染的成像。

PET配体的一个普遍性问题是生物分布缓慢或不足，或者甚至没有配体渗透穿过某些组织，例如，血脑屏障。此外，配体与非靶向蛋白(例如血清白蛋白)的非特异性结合通常会损害对目标靶标的PET配体特异性。所有这些缺点导致了低质量的PET图像，这些图像缺少适当的信噪比或显示伪像(artifact)。

有许多用于神经成像的PET配体，例如，

US 2017/0224852 A1公开了化学稳定的PET配体，其选择性地与NMDA受体结合，特别是与GluN2B亚基。这些PET配体在所有主要的大脑区域都具有良好的亲和力，并且异质地积累在大鼠大脑的不同区域中。US 2017/0224852 A1中报道的PET配体适用于在哺乳动物的大脑中对含GluN2B(C,D)的NMDA受体的密度进行非侵入性成像，并且适用于评估GluN1/GluN2B NTD调节剂对受体占有的程度。

发明内容

鉴于以上所述，本发明的目的是提供进一步和/或任选地改进的放射性标记的配体(例如PET或SPECT配体)，其具有高NMDA受体亲和力和高NMDA受体选择性，适于在诊断与NMDA受体相关的疾病或病症中使用，例如，通过正电子发射断层显像(PET)、单光子发射计算机断层显像(SPECT)、基于液体闪烁以及放射性自显影分析，这些方法具有良好的生物分布、高信噪比并且很少产生伪像。

在第一方面，本发明的目的通过以下式(Ⅰ)的化合物解决的：

其中

-式(Ⅰ)的至少一个原子是放射性标记的原子，任选地，放射性标记的原子选自由以下组成的组：

-R

氢、氘、氚、氟、氯、溴、碘、-OH、-CN、-NO

以及R

-R

氢、-(C

-Y选自由以下组成的组：

(C

被至少一个氘、氚、

-(CH

-R

取代或未取代的(C

任选地

-YR

其中R

以及其药学上可接受的盐或溶剂化物，用于通过正电子发射断层显像(PET)、单光子发射计算机断层显像(SPECT)、基于液体闪烁计数分析法以及放射性自显影法诊断与NMDA受体相关的疾病或病症。

在本发明的上下文中，应理解，先前的术语如“烷基”应解释为包括直链或支链、取代或未取代的烷基残基。术语“直链或支链、取代或未取代的烷基”的范围包括直链或支链、取代或未取代的烷基残基。例如，术语“(C

本文所用的烷氧基烷基基团应理解为是指任何直链或支链的、取代或未取代的烷基链，其包含一个氧原子，要么作为醚模体(ether motif)(即被两个碳键合的氧)，要么作为与除碳以外的任何其他化学原子键合的氧(例如，羟基或氧阴离子)。

本文所用的术语杂原子应理解为除碳和氢以外的其他原子，例如和任选地，O、N、S、P、F、Cl、Br以及I。

杂烷基残基是一个或多个碳原子可任选地被杂原子取代的碳链，任选地被O、N、S、P、F、Cl、Br或I取代。如果N未被取代，则其为NH。杂原子可以取代在直链或支链的碳链内的末端或中间的碳原子。这样的基团可以如本文所述被基团(例如，氧代(oxo))取代以进行限定，例如但不限于烷氧基羰基(alkoxycarbonyl)，丙烯酰基(acryl)、氨基和硫代(thioxo)。

本文所用的术语芳基应理解为本文所限定的芳香碳环或杂芳基。每个芳基或杂芳基(除非另有说明)包括其部分或完全氢化的衍生物。例如，喹啉基可包括十氢喹啉基(decahydroquinolinyl)和四氢喹啉基(tetrahydroquinolinyl)；萘基(naphthyl)可包括其氢化的衍生物，例如四氢萘基(tetrahydronaphthyl)。本文所述的芳基和杂芳基化合物的其他部分或完全氢化的衍生物对于本领域普通技术人员是显而易见的。自然地，该术语包含芳烷基(aralkyl)和烷芳基(alkylaryl)，两者都是用于实施本发明的化合物的其他实施方案。例如，术语芳基包括苯基、茚满基(indanyl)、茚基(indenyl)、二氢萘基(dihydronaphthyl)、四氢萘基、萘基和十氢萘基(decahydronaphthyl)。

术语杂芳基应理解为芳香族C

如本文所用，术语氮和硫包括氮和硫的任何氧化形式以及任何碱性氮的季胺化(quaternized)形式，只要所得的化合物是化学稳定的。例如，–S-C

本文所使用的术语聚乙二醇是指取代或未取代的环氧乙烷单体的链。

本文所使用的和在所有实施例的上下文中，术语“包含(comprising)”任选地还包括可以不存在其他组成，即包括术语“由……组成(consisting of)”。

发现本发明的化合物选择性地与NMDA受体结合，尤其是与GluN2B亚基，具有出乎意料的高结合亲和力和对σ1受体的选择性(参见，例如下面代表性的示例5)。

在不希望被理论束缚的情况下，认为根据本发明所使用的化合物的双环结构的芳香环上的羟基(在R

(i)放射性自显影结果(参见图1、2和3)，

(ii)对于NMDA受体的GluN2B亚基的结合亲和力和对σ1受体的选择性(参见下面的表1)，以及

(iii)体内摄取量(反映在示例4的时间活性曲线和图9、10和11)。

总而言之，根据本发明所使用的化合物出乎意料地，但明显表现优于现有技术的化合物。

优选地，本发明的化合物在纳摩尔范围内对NMDA受体具有亲和力，任选地少于100nM。用于评估NMDA受体亲和力的分析法是本领域的公知常识并且可以在例如，Tewes等(ChemMedChem 2010,5,687-695)以及下面的示例中找到。

本发明的PET配体提供了高质量的核医学图像(例如在5-90分钟内的短扫描时间内)，并且可以定量分析血液中的配体。本配体摄取到大脑中可以用于NMDA受体的密度的非侵入性成像并且能够评估GluN1/GluN2B NTD调节剂对受体的占有程度。在放射性自显影研究中，本PET配体在基本上所有的主要的富含GluN2B的大脑区域中的结合都具有高亲和力(参见图5、6和7)。在大鼠的脑匀浆中未检测到放射性代谢物，表明本PET配体的代谢稳定性(参见图8)。

在PET实验中，本发明的放射性配体对携带GluN2B的NMDA受体表现高选特异性，这表明PET配体在大鼠大脑中的不同区域的异质性积累，在阻断条件下被CP-101,606特异性地减少了(参见图10和11)。

总之，本配体代表改进的化合物，其用于哺乳动物的大脑中含GluN2B的NMDA受体的密度的非侵入性成像以及GluN1/GluN2B NTD调节剂对受体占有程度的评估。改进的选择性与改进的大脑积累一起使得本发明的化合物成为与哺乳动物中ESC相关的诊断应用的极好候选。

另外，当例如用氚和

在另一个实施例中，本发明使用一种PET或SPECT配体，其中至少一种放射性标记的原子是

放射性标记的原子可以通过本领域已知的放射性合成方法引入(参见图1至4和下面的示例2和7)。通常，本PET配体的放射性合成可以在轰击结束之后例如2.5小时内完成，并且在合成结束时产出例如大约1GBq。

在另一个实施例中，本发明使用一种化合物，其中R

在另一个实施例中，R

在另一个实施例中，R

在另一个实施例中，R

在另一个实施例中，Y选自由以下组成的组：–(CH

在另一个实施例中，R

在另一个实施例中，本发明使用一种化合物，其中R

在另一个实施例中，本发明使用一种化合物，其中R

在另一个实施例中，本发明使用一种化合物，其中该化合物在碳1是R构型。

在另一个实施例中，本发明使用一种化合物，其中该化合物在碳1是S构型。

在另一个实施例中，本发明使用一种化合物，其中

-R

-R

-Y是-(CH

-R

在另一个实施例中，本发明使用一种化合物，其中

-R

-Y是-(CH

-R

其中R

在另一个实施例中，本发明使用一种化合物，其中

-R

-Y是(CH2)4，以及

-R

在另一个实施例中，本发明所使用的化合物选自由以下组成的组：

其中

-R

-X和Z独立地选自由以下组成的组：氢、氘、氚、氟、碘和腈。

在另一个实施例中，本发明所使用的化合物选自由以下组成的组：

其中

-X和Z独立地选自由以下组成的组：氢、氘、氚、氟、碘和腈；并且

-如果X和/或Z是氚，则氟是

本发明包括式I的化合物的药学上可接受的盐或溶剂化物。“药学上可接受的盐或溶剂化物”是指任何药学上可接受的盐或溶剂化物，在向患者给药之后，能够(直接或间接)提供本发明的化合物，或者其药理活性代谢物(pharmacologically active metabolite)或药理活性残余物(pharmacologically active residue)。药理活性代谢物应理解为能够被酶促或化学地代谢的任何本发明的化合物。

药学上可接受的盐包括那些从药学上可接受的无机或有机的酸和碱衍生的盐。合适的酸的示例包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、高氯酸、富马酸、马来酸、磷酸、乙醇酸、乳酸、水杨酸、琥珀酸、对甲苯磺酸、酒石酸、乙酸、柠檬酸、甲磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-硫酸和苯磺酸。其他酸，例如草酸，尽管它们不是药学上可接受的，但可用于在盐的制备中作为获得化合物和其药学上可接受的酸加成盐的中间体。合适的碱衍生的盐包括碱金属盐(例如钠)、碱土金属盐(例如镁)、铵盐和N-(C

另外，本发明的范围还包括式I化合物的前体药物(prodrug)。前体药物包括以下化合物，其在患者的体内进行简单的化学转化之后，被修饰以产生本发明的化合物。简单的化学转化包括水解、氧化和还原。特别地，当把前体药物施用给患者时，前体药物可转化至上文公开的化合物，从而给予所需的药理作用。

在另一方面，本发明涉及一种用于诊断与NMDA受体相关的疾病或病症的方法，包括以下步骤：

(a)以对于NMDA受体的PET成像、SPECT成像、基于液体闪烁和/或基于放射性自显影分析有效的量，向有这种诊断需要的患者或患者样品施用本发明所使用的化合物，

(b)记载至少一种PET扫描、SPECT扫描、基于液体闪烁或放射性自显影结果，任选地通过离体分析，以及

(c)在基于液体闪烁或放射性自显影结果中，诊断与NMDA受体相关的来自在PET或SPECT扫描上异常的NMDA受体表达模式的疾病或病症。

如上文所使用的术语患者，包括人类和动物患者，任选地，哺乳动物。

如上文所使用的术语患者样品，意思是包括任何组织，例如活体组织(biopsy)、体液(例如包含或可能包含NMDA受体的血液、血清、脑或脑脊液(cerebral or cerebrospinalfluid))。

任选地，在本发明的所有方法方面中，使用基于液体闪烁分析和放射性自显影分析对动物进行诊断，例如动物疾病(例如通过样品的离体分析)。

如本文所使用的术语基于液体闪烁，包括例如通过使用样品与液体闪烁体混合的技术以能够计算辐射(例如由此产生的光子发射)的样品测量。例如，其目的是通过放射性同位素与闪烁体的直接接触增强样品的信号。

基于闪烁或基于放射性自显影的分析法意味着包括依赖于闪烁或放射性自显影的原理的任何闪烁分析或放射性自显影分析。

在另一个实施例中，与NMDA受体相关的疾病或病症选自由以下组成的组：神经退行性疾病或病症、阿尔茨海默症、抑郁症、帕金森氏病、创伤性脑损伤、卒中、偏头痛、酒精戒断(alcohol withdrawal)以及慢性和神经疼痛。

在另一方面，本发明涉及用于评估推定的NMDA受体拮抗剂的方法，包括以下步骤：

(a)提供本发明所使用的化合物，其中该化合物包括氚或

(b)执行选自由以下组成的组的步骤：

(i)在基于液体闪烁检测的分析法中，测定推定的NMDA受体拮抗剂和步骤(a)的化合物的竞争性结合亲和力；以及

(ii)执行体外或离体的放射性自显影分析，其中推定的NMDA受体拮抗剂用于阻断或取代步骤(a)的化合物；

(c)基于(i)步骤(a)的化合物是否被推定的NMDA受体拮抗剂取代，确定推定的NMDA受体拮抗剂是否为NMDA受体拮抗剂。

推定的NMDA受体拮抗剂可以是任何化学分子，包括例如小的化学实体和多肽，其已知或可以认为是NMDA受体拮抗剂。技术人员可以用本方法评估任何化学分子并且基于NMDA受体拮抗剂是否取代本发明所使用的化合物或被本发明所使用的化合物取代，确定该化学分子是否为NMDA受体拮抗剂。

在人体内的NMDA受体的PET或SPECT扫描，尤其是活人的大脑，在医学和诊断领域中是现代的但已经标准化的程序。普通技术人员可以常规地选择有效剂量、有效配方、给药途径和部位、以及为哺乳动物组织中的各个正电子发射示踪化合物提供有意义的PET或SPECT扫描所必需的所有其他参数。针对一般的PET成像(尤其是NMDA相关的疾病或病症的PET成像)的综述，参考以下文章：Sobrio et al.,Mini-reviews in MedicinalChemistry,10,870-886,2010；Asselin et al.,NeuroImage,22,T131,2004；Bressan etal.,Biol Psychiatry,58,41-46,2005；和Hartwig et al.,Clin Pharmacol.Ther,58,165-178,1995。

针对本发明的化合物的诊断用途，其可以通过常规方式以常规的剂型给药。给药途径包括口服、静脉注射、肌肉注射和皮下注射。优选的给药方式是静脉注射。

针对基于液体基于闪烁的分析，氚和

该化合物可以单独或与药学上可接受的赋形剂(例如提高化合物稳定性的赋形剂、促进含有该赋形剂的药物或诊断组合物的给药的赋形剂、提供增加的溶解度或分散度的赋形剂)、稀释剂、缓冲液、粘度改性剂等，包括其他活性成分联合施用。有利地，这种联合组合物(combination composition)使用常规诊断的较低剂量，因此避免了当那些药物作为单质使用时可能产生的毒性和不良副作用。上述的化合物可以物理地与常规诊断或其他赋形剂结合制成单一的药物。在这方面可以参考Cappola等：美国专利申请no.09/902,822，PCT/US 01/21860和美国临时申请no.60/313,527，各自通过引用整体并入本文。有利地，本发明的化合物可以单独或与其他生物活性化合物组合以单剂或多剂的形式施用。本发明的化合物在用于PET/SPECT扫描剂量中的最佳百分比(w/w)可以改变，并且这在本领域技术人员的能力范围内。或者，用于PET/SPECT扫描的化合物可以以多种剂量施用。

如上所述，本文所述的化合物的剂型包括本领域普通技术人员已知的药学上可接受的赋形剂。用于制备这种剂型的方法是已知的(参见，例如，H.C.Ansel andN.G.Popovish,Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,5

在下文中，将通过特定示例来说明本发明，这些示例均不应被解释为限制所附权利要求的范围。

附图说明

图1示出了

图2示出了[

图3示出了[

图4示出了苯并氮杂卓-1-醇的合成的一般方法。

图5示出了在大鼠和小鼠的大脑中[

图6示出了在大鼠和小鼠的大脑中[

图7示出了在大鼠和小鼠的大脑中[

图8示出了(R)-[

图9示出了在大鼠的大脑中[

图10示出了在大鼠的大脑中[

图11示出了在大鼠的大脑中使用不同剂量的实验性GluN2B拮抗剂CP-101,606的(R)-[

具体实施方式

实施例1-化学

合成苯并氮杂卓-1-醇的一般方法在本领域是已知的，例如，来自Tewes et al.,ChemMedChem 2010,5,687-695。图4示出了用于生产本发明所使用的标记化合物的代表性合成路径。图4的合成路径可以通过公知的方法进行调整以递送苯并氮杂卓-1-醇的衍生物以及用于本发明中的基本所有化合物。技术人员将常规地对合成路径进行调整以适用于合成本发明的任何PET配体。

实施例2-F-18放射性标记

产生了[

实施例3-放射性自显影技术

将啮齿动物的脑组织嵌入到Tissue-

实施例4-大鼠脑部的PET扫描和时间-活性曲线和受体占有率

将Wistar大鼠用异氟醚进行麻醉，并且在PET/CT扫描仪(Super Argus，赛德科，马德里，西班牙(Super Argus,Sedecal,Madrid,Spain))中，通过尾-静脉注射15-38MBq，0.6-1.7nmol/kg(大鼠)的甲基化的和去甲基化的放射性标记的配体进行为期90分钟的扫描。对于解剖学方向，进行PET扫描然后进行计算机断层扫描。在示踪剂给药不久之前，通过尾-静脉注射不同剂量(3、10和15mg/kg)的CP101,606(GluN2B拮抗剂，西格玛-奥德里奇，布克斯，瑞士(Sigma-Aldrich,Bu chs,Switzerland))进行Wistar大鼠的剂量反应和受体占有。如我们小组先前所述(Haider et al.,Eur.J.Med.Chem.2018)，在用户定义的时间帧内对获得的数据进行重建，体素为0.3875×0.3875×0.775mm

实施例5-体外结合亲和力

从当前的技术水平已经知道针对GluN2B进行结合竞争测定(Szermerski et al,ChemMedChem,2018)和对σ1受体(σ1R)进行测定(Chu et al,Current Protocols inPharmacology,2015)是已知的。在测定(由Bradford方法确定)中使用了约1mg蛋白/mL(用于确定GluN2B亚基IC

表1.苯二氮卓-1-醇的衍生物的GluN2B亚基和σ1R Ki值

实施例6-体外结合亲和力

向Wistar大鼠注射242-704MBq(14.8-27.5nmol/kg)(R)-[

实施例7-氚标记

对于甲基化的配体，图2示出了一种典型的氚标记方法。向(R)-NB1(0.5mg，1.6μmol)在无水DMF(0.2mL)中的搅拌溶液中添加碳酸铯(2.5mg，7.7μmol)，并且将所得的悬浮液在室温下搅拌5分钟。逐滴加入[