WHsAg单克隆抗体作为免疫组织化学检测试剂的应用

摘要

本发明涉及WHsAg单克隆抗体作为免疫组织化学检测试剂的应用，主要为保藏号为CCTCC‑C2019318的WHsAg单克隆抗体T1C3C9作为免疫组织化学检测试剂的应用；所述应用为作为旱獭肝组织WHsAg免疫组织化学检测试剂的应用；应用方法具体步骤为：组织切片；一抗孵育，加入WHsAg单克隆抗体T1C3C9，抗体原液稀释浓度梯度为1/20000～1/5000；二抗孵育；显色；复染；封片；有益效果是：首次建立旱獭/土拨鼠肝组织WHsAg检测方法，为乙肝动物模型‑WHV感染的旱獭/土拨鼠模型应用提供重要技术支撑。

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种能运用于WHsAg免疫组织化学检测的单克隆抗体及其最佳浓度。

背景技术

目前慢性乙型肝炎的治疗尚有许多问题有待解决，其相关研究离不开合适的动物模型。土拨鼠肝炎病毒(woodchuck hepatitis virus,WHV)在病毒形态、基因组结构、复制周期等方面与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)类似，WHV可以自然感染旱獭，且感染后的自然经过与HBV感染类似,因此旱獭是研究HBV较为理想的动物模型。

嗜肝DNA病毒表面抗原(HBsAg、WHsAg)是嗜肝DNA病毒的外壳蛋白，是嗜肝DNA病毒现症感染的标志。目前检测HBsAg的免疫组织化学试剂已经商品化，包括用于人、大鼠、小鼠、猪、豚鼠等的免疫组织化学试剂，但尚无WHsAg免疫组织化学检测试剂，其检测方法及所需试剂只能自己摸索和制备。

发明内容

针对上述问题，本发明提供WHsAg单克隆抗体T1C3C9作为免疫组织化学检测试剂的应用及其应用方法，主要解决了土拨鼠/旱獭肝组织WHsAg检测所需的免疫组织化学试剂等问题。

为了解决上述问题，本发明采用如下技术方案：

保藏号为CCTCC-C2019318的WHsAg单克隆抗体T1C3C9作为免疫组织化学检测试剂的应用。

其中，所述应用为作为旱獭肝组织WHsAg免疫组织化学检测试剂的应用。

保藏号为CCTCC-C2019318的WHsAg单克隆抗体T1C3C9作为免疫组织化学检测试剂的应用方法，其中，具体步骤为：

组织切片；

一抗孵育，加入WHsAg单克隆抗体T1C3C9，抗体原液稀释浓度梯度为1/20000～1/5000；

二抗孵育；

显色；

复染；

封片。

保藏号为CCTCC-C2019318的WHsAg单克隆抗体T1C3C9作为免疫组织化学检测试剂的应用方法，其中，

组织切片和一抗孵育还包括如下步骤：

双氧水浸泡，

抗原修复，

封闭。

一种方式，其中，

二抗孵育和显色之间有清洗步骤，

清洗步骤为，磷酸缓冲盐溶液清洗。

一种方式，其中，

所述WHsAg单克隆抗体T1C3C9，抗体原液稀释浓度梯度为1：5000、1：8000、1：10000、1：15000、1：20000中任一。

一种方式，其中，

组织切片后用3％过氧化氢溶液浸泡，所述3％过氧化氢溶液由30％过氧化氢和PBS溶液按体积3：97配比而成。

本发明的有益效果是：

为免疫组织化学提供了新的检测试剂，尤其是旱獭肝组织WHsAg免疫组织化学检测试剂，完善了WHV感染旱獭模型的基础研究工具。

附图说明

图1为实施例1检测结果示意图，

图2为实施例2检测结果示意图，

图3为实施例3检测结果示意图，

图4为实施例4检测结果示意图，

图5为实施例5检测结果示意图。

具体实施方式

保藏号为CCTCC-C2019318的WHsAg单克隆抗体T1C3C9作为免疫组织化学检测试剂的应用.

应用为作为旱獭肝组织WHsAg免疫组织化学检测试剂的应用。

实施例1

保藏号为CCTCC-C2019318的WHsAg单克隆抗体T1C3C9作为免疫组织化学检测试剂的应用方法，其中，具体步骤为：

组织切片；

3％双氧水浸泡，阻断内源性过氧化物酶；

抗原修复；

用山羊血清封闭；

一抗孵育，加入WHsAg单克隆抗体T1C3C9，抗体原液稀释浓度梯度为1：5000，原始浓度1mg/ml；

二抗孵育，加入DAB试剂盒内的A液：100ul/份，置湿盒内，37℃温箱孵育30min，磷酸缓冲盐溶液清洗5min×3；

显色，DAB试剂盒内的C液用B液稀释(1：50稀释)，100ul/份，显色15min左右，显微镜下控制→水洗5min；

复染；

封片。

检测结果如图1中所示。

其中DAB试剂盒具体信息：Dako REAL

实施例2

保藏号为CCTCC-C2019318的WHsAg单克隆抗体T1C3C9作为免疫组织化学检测试剂的应用方法，其中，具体步骤为：

组织切片；

3％双氧水浸泡，阻断内源性过氧化物酶；

抗原修复；

用山羊血清封闭；

一抗孵育，加入WHsAg单克隆抗体T1C3C9，抗体原液稀释浓度梯度为1：8000；

二抗孵育，加入DAB试剂盒内的A液：100ul/份，置湿盒内，37℃温箱孵育30min，磷酸缓冲盐溶液清洗5min×3；

显色，DAB试剂盒内的C液用B液稀释(1：50稀释)，100ul/份，显色15min左右，显微镜下控制→水洗5min；

复染；

封片。

检测结果如图2中所示。

实施例3

保藏号为CCTCC-C2019318的WHsAg单克隆抗体T1C3C9作为免疫组织化学检测试剂的应用方法，其中，具体步骤为：

组织切片；

3％双氧水浸泡，阻断内源性过氧化物酶；

抗原修复；

用山羊血清封闭；

一抗孵育，加入WHsAg单克隆抗体T1C3C9，抗体原液稀释浓度梯度为1：10000；

二抗孵育，加入DAB试剂盒内的A液：100ul/份，置湿盒内，37℃温箱孵育30min，磷酸缓冲盐溶液清洗5min×3；

显色，DAB试剂盒内的C液用B液稀释(1：50稀释)，100ul/份，显色15min左右，显微镜下控制→水洗5min；

复染；

封片。

检测结果如图3中所示。

实施例4

保藏号为CCTCC-C2019318的WHsAg单克隆抗体T1C3C9作为免疫组织化学检测试剂的应用方法，其中，具体步骤为：

组织切片；

3％双氧水浸泡，阻断内源性过氧化物酶；

抗原修复；

用山羊血清封闭；

一抗孵育，加入WHsAg单克隆抗体T1C3C9，抗体原液稀释浓度梯度为1：15000；

二抗孵育，加入DAB试剂盒内的A液：100ul/份，置湿盒内，37℃温箱孵育30min，磷酸缓冲盐溶液清洗5min×3；

显色，DAB试剂盒内的C液用B液稀释(1：50稀释)，100ul/份，显色15min左右，显微镜下控制→水洗5min；

复染；

封片。

检测结果如图4中所示。

实施例5

保藏号为CCTCC-C2019318的WHsAg单克隆抗体T1C3C9作为免疫组织化学检测试剂的应用方法，其中，具体步骤为：

组织切片；

3％双氧水浸泡，阻断内源性过氧化物酶；

抗原修复；

用山羊血清封闭；

一抗孵育，加入WHsAg单克隆抗体T1C3C9，抗体原液稀释浓度梯度为1：20000；

二抗孵育，加入DAB试剂盒内的A液：100ul/份，置湿盒内，37℃温箱孵育30min，磷酸缓冲盐溶液清洗5min×3；

显色，DAB试剂盒内的C液用B液稀释(1：50稀释)，100ul/份，显色15min左右，显微镜下控制→水洗5min；

复染；

封片。

检测结果如图5中所示。

本领域的技术人员可以明确，在不脱离本发明的总体精神以及构思的情形下，可以做出对于以上实施例的各种变型。其均落入本发明的保护范围之内。本发明的保护方案以本发明所附的权利要求书为准。