连接有柠檬酸的PEG/mPEG多羧基的化学修饰剂、制备方法,及其修饰二苯乙烯类化合物的用途

摘要

本发明公开了一种连接有柠檬酸的PEG/mPEG多羧基的化学修饰剂、制备方法及其修饰二苯乙烯类化合物的用途。本发明以PEG/mPEG-丁二酰基/乙酰基-柠檬酸作为修饰剂，与二苯乙烯类化合物相连接制备二苯乙烯类化合物前药，所涉及的二苯乙烯类化合物包括苯烯莫德、氧化白藜芦醇、紫檀茋、白皮杉醇、白藜芦醇，制得的前药为含有多个羧基的分支型聚乙二醇衍生物，能够与多个化合物相连接，在很大程度上提高了载药量。另外，该前药制备方法简单，能够改善二苯乙烯类化合物的水溶性及稳定性，提高其生物活性，使其应用范围较单纯的二苯乙烯类化合物更加广泛。

说明书

技术领域

本发明属于化合物制备领域，具体地说涉及一种连接有柠檬酸的PEG/mPEG多羧基的化学修饰剂、其制备方法，及其修饰二苯乙烯类化合物用于制备相应前药的用途。

 背景技术

二苯乙烯类化合物如3,5-二羟基-4-异丙基二苯乙烯（药物名称：苯烯莫德）、白藜芦醇、紫檀茋、氧化白藜芦醇、白皮杉醇等属于活性多酚类物质，普遍存在于植物或微生物的代谢物中，它们具有抗炎、抗氧化、抗菌、抑制肿瘤、抗自由基以及抑制血小板聚集、抗血栓、抗高血脂的作用，可用于真菌、湿疹、动脉硬化、冠心病、病毒性肝炎、艾滋病、癌症等疾病的预防和治疗，目前多数作为保健品使用。由于上述几种化合物的水溶性及稳定性差，导致生物利用度不高，影响其疗效发挥。

中国发明专利申请2009100710372公开了一种“亲水性聚合物——白藜芦醇结合物及制备方法”，是利用单甲氧基聚乙二醇（即mPEG）、单甲氧基聚丙二醇依次经羧基化反应、酰氯化反应，再与白藜芦醇反应制备亲水性白藜芦醇结合物，这种产物与原有白藜芦醇相比只是水溶性、稳定性增加，生物活性提高。

本申请人的申请号为201010199655.8的中国发明专利申请，公开了一种“PEG、mPEG化学修饰剂及其制备白藜芦醇前药的方法”，它是以PEG、mPEG的羧酸衍生物与氨基酸连接制备PEG、mPEG化学修饰剂，再与白藜芦醇连接得到前药，该专利申请与前述专利申请相比，在PEG、mPEG的修饰剂中增加了氨基酸分子，实现了在给人体补充二苯乙烯类化合物的同时补充了氨基酸的目的。但是由此制备的PEG修饰剂，只有两端的两个羧基参与后面制备前药的反应(而mPEG中只有一端的一个羧基参与)，因此载药量有限，所以其应用会受到一部分限制。

中国发明专利CN101569748A公开了一种“水溶性的紫杉醇的前药及其制备方法和化学修饰剂”，是以聚乙二醇为载体，以乙酰基(由溴乙酸叔丁酯制得)、柠檬酸为连接臂，与紫杉醇连接制备前药的方法。此发明中仅以乙酰基作为连接臂制备PEG或mPEG化学修饰剂，没有涉及其他的连接臂，如丁二酸酐等。另外，此修饰剂仅应用于修饰紫杉醇这一种化合物，对于能否用于其他有机小分子化合物的修饰没有研究。

发明内容

本发明要解决的技术问题，旨在提供一种连接有柠檬酸的PEG/mPEG多羧基的化学修饰剂、制备方法及其修饰二苯乙烯类化合物的用途。该化学修饰剂不仅采用了乙酰基连接，而且使用了丁二酰基进行连接，使得PEG或mPEG与连接臂的连接为酯键，进入体内后更容易脱除释放。另外，利用柠檬酸含有的多个羧基，赋予了修饰剂更多的活性羧基，使其在修饰二苯乙烯类化合物如苯烯莫德、氧化白藜芦醇、紫檀茋、白皮杉醇、白藜芦醇时，能够明显提高载药量。

本发明要解决上述的技术问题，所采用的技术方案是：

一种连接有柠檬酸的PEG/mPEG多羧基的化学修饰剂，其分子结构式如下：

或，

其中，PEG或mPEG的分子量为2000～75000。

 所述化学修饰剂的制备方法，是以水溶性的PEG或mPEG为载体，以丁二酰基/乙酰基、柠檬酸为连接臂制得，具体地说是PEG/mPEG先与丁二酸酐或溴乙酸乙酯、溴乙酸异丁酯、溴乙酸叔丁酯中的一种反应得PEG/mPEG的羧酸衍生物，再与SOCl₂反应得PEG-酰氯/mPEG-酰氯，最后与柠檬酸连接制备而成。

 上述PEG羧酸衍生物或mPEG羧酸衍生物的制备方法分为两类，其中：

一、PEG/mPEG的羧酸衍生物是由水溶性的PEG/mPEG为载体，与丁二酸酐反应制得，其制备方法按照以下步骤顺序进行：

①PEG/mPEG、丁二酸酐、氯仿与吡啶加热回流；

②减压蒸除氯仿，饱和NaHCO₃溶液调pH7，乙酸乙酯萃取，稀盐酸调pH2～3；

③二氯甲烷萃取，合并有机相，干燥，过滤，滤液减压浓缩，浓缩物用无水乙醚重结晶得PEG/mPEG的羧酸衍生物；

二、PEG/mPEG的羧酸衍生物是由水溶性的PEG/mPEG为载体，与溴乙酸乙酯、溴乙酸异丁酯或溴乙酸叔丁酯中的一种反应制得，其制备方法按照以下步骤顺序进行：

①室温将PEG或mPEG溶于无水甲苯中，加入叔丁醇钾的叔丁醇溶液；

②加入溴乙酸乙酯、溴乙酸异丁酯或溴乙酸叔丁酯中的一种，回流；

③反应结束后，过滤，滤液减压蒸除叔丁醇、甲苯及未反应完的原料，残余物用二氯甲烷溶解，无水乙醚重结晶得PEG羧酸酯或mPEG羧酸酯；

④将上述羧酸酯溶于蒸馏水中，NaOH溶液调pH10，搅拌30min；

⑤在冰水冷却下，用草酸溶液调体系pH2～3，室温搅拌20 min，二氯甲烷萃取，合并有机相，饱和食盐水洗涤至中性，无水硫酸钠干燥，减压蒸除二氯甲烷，残留物用无水乙醚重结晶得PEG或mPEG的羧酸衍生物。

所述化学修饰剂的制备方法中，PEG或mPEG的羧酸衍生物与柠檬酸间的连接按照以下步骤顺序进行：

①制备相应的PEG或mPEG-酰氯

将PEG/mPEG的羧酸衍生物溶于二氯甲烷中，0～5℃条件下加入Py和干燥的SOCl₂，低温反应，自然升至室温，再加热至回流，反应完毕，浓缩得PEG-酰氯或mPEG-酰氯；

②化学修饰剂的制备

常温下将柠檬酸溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，0～5 ℃滴加Py和PEG-酰氯/mPEG-酰氯的DMF溶液，低温反应一段时间后再自然升至室温反应，最后回流反应，反应完毕，减压脱除溶剂，无水乙醚重结晶，得连接有柠檬酸的PEG/mPEG多羧基的化学修饰剂。

 本发明还提供了上述连接有柠檬酸的PEG/mPEG多羧基的化学修饰剂的用途，即以其为修饰剂制备二苯乙烯类化合物前药，该前药为多羧基的分支型聚乙二醇或单甲氧基聚乙二醇衍生物。

所述的二苯乙烯类化合物为白藜芦醇、苯烯莫德、氧化白藜芦醇、紫檀茋、白皮杉醇中的一种，它们的结构式分别如式（I）～式（V）：

、、、、 

所述前药的制备方法按照如下步骤顺序进行：

①连接有柠檬酸的PEG/mPEG多羧基的化学修饰剂溶于二氯甲烷中；

②室温下加入DMAP、EDC.HCl和二苯乙烯类化合物的DMF溶液；

③减压浓缩溶剂，残余物异丙醇重结晶，得二苯乙烯类化合物前药。

 本发明将PEG或mPEG的分子量限定为2000～75000，表示低分子量聚合和高分子量聚合的连接有柠檬酸的PEG/mPEG多羧基的化学修饰剂都适合用于制备二苯乙烯类化合物前药。

由于采用了上述的技术方案，与现有技术相比，本发明所取得的技术进步是：

将聚乙二醇或单甲氧基聚乙二醇与柠檬酸连接，得到含有多个羧基的分枝型聚乙二醇衍生物，从而使聚乙二醇对小分子药物的载药量明显提高，明显提高了药物的水溶性，有利于提高和改善药物性能，明显提高了药物稳定性，延长了其半衰期，从而提高了其在体内的作用时间。本发明提供的化学修饰剂的制备方法简单，并且有由于柠檬酸的存在，柠檬酸含有多个羧基，从而使其应用于修饰二苯乙烯类化合物苯烯莫德、氧化白藜芦醇、紫檀茋、白皮杉醇、白藜芦醇时，所得前药的载药量明显增大。

具体实施方式

以下实施例只用于说明本发明，并非本发明的限定。

实施例1  PEG2000-丁二酰基-柠檬酸-紫檀茋的制备

 本实施例包括以下步骤：

①PEG2000羧酸衍生物的制备

反应式如下：

取干燥PEG40 g(20 mmol)，溶于160 mL氯仿中，加入丁二酸酐5.0 g(50 mmol)，搅拌均匀，加入3 mL吡啶(Py)，加热至回流，反应36 h，蒸除溶剂，残余物用80 mL饱和NaHCO₃溶液溶解，乙酸乙酯萃取(20 mL×3)，水相降温至0～5 ℃，用1 mol/L盐酸调pH2～3，搅拌20 min后二氯甲烷萃取(25 mL×4)，合并有机相，饱和食盐水洗涤中性，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，无水乙醚重结晶得白色固体PEG2000-丁二酸37.4 g，收率85.0%；

②PEG2000-酰氯的合成

反应式如下：

取5 g(2.27 mmol)PEG2000-丁二酸用10 mL二氯甲烷溶解，降温至0～5 ℃，通N₂保护，加入5.38 g(6.81 mmol)Py和2.97 g(24.97 mmol)干燥的SOCl₂，低温搅拌1 h，自然升至室温搅拌反应3 h，再回流反应6 h，反应完毕，浓缩得PEG2000-酰氯5.08 g，收率100%。

③连接有柠檬酸的PEG2000多羧基的化学修饰剂的合成

反应式如下：

常温下，将0.5 g(2.86 mmol)柠檬酸溶于3 mLDMF中，通N₂保护，0～5 ℃加入0.28 g(3.54 mmol)Py，同时加入PEG-酰氯的DMF溶液(3.04 gPEG-酰氯溶于5 mLDMF中制得)，反应1 h，自然升至室温反应3 h，50 ℃反应6 h，减压蒸除溶剂，无水乙醚重结晶，得连接有柠檬酸的PEG2000多羧基的化学修饰剂2.64 g，收率76%。

④PEG2000-丁二酰基-柠檬酸-紫檀茋前药的制备

反应式如下：

取0.5 g(0.20 mmol)连接有柠檬酸的PEG2000多羧基的化学修饰剂，溶于5 mL二氯甲烷中，加入紫檀茋的DMF溶液(0.36 g紫檀茋溶于6 mLDMF中制得)，搅拌30 min，加入EDC.HCl 0.27 g(1.42 mmol)、DMAP 1.73 g(1.42 mmol)，室温反应24 h，反应完毕，减压浓缩，异丙醇重结晶，得PEG2000-丁二酰基-柠檬酸-紫檀茋前药0.32 g，收率40.0%。

 由于PEG/mPEG作为药物载体时最常用的分子量为2000—75000，本实施例还将前述所用的PEG2000以分子量为2000—75000范围的PEG/mPEG替代来制备紫檀茋的前药，这种改变对制备方法与过程无影响，只是载体的分子量发生变化时需要改变其投料量（如果是相同的摩尔量，分子量大的重量就大），也同样实现了发明目的。

 实施例2  PEG2000-丁二酰基-柠檬酸-氧化白藜芦醇的制备

本实施例按照以下步骤顺序进行：

①PEG2000羧酸衍生物的制备、PEG2000-酰氯的制备、连接有柠檬酸的PEG2000化学修饰剂的制备，方法分别与实施例1中步骤①～③相同；

②PEG2000-丁二酰基-柠檬酸-氧化白藜芦醇前药的制备

反应式如下：

取0.5 g(0.20 mmol)连接有柠檬酸的PEG2000多羧基的化学修饰剂，溶于5 mL二氯甲烷中，加入氧化白藜芦醇的DMF溶液(0.35 g氧化白藜芦醇溶于6 mLDMF中制得)，搅拌30 min，加入EDC.HCl 0.27 g(1.42 mmol)、DMAP 1.73 g(1.42 mmol)，室温反应24 h，反应完毕，减压浓缩，异丙醇重结晶得PEG2000-丁二酰基-柠檬酸-氧化白藜芦醇前药0.30 g，收率38.0%。

 由于PEG/mPEG作为药物载体时最常用的分子量为2000—75000，本实施例还将前述所用的PEG2000以分子量为2000—75000范围的PEG/mPEG替代来制备氧化白藜芦醇的前药，这种改变对制备方法与过程无影响，只是载体的分子量发生变化时需要改变其投料量，同样实现了发明目的。

 实施例3  PEG2000-丁二酰基-柠檬酸-白皮杉醇的制备

本实施例按照以下步骤顺序进行：

①PEG2000羧酸衍生物的制备、PEG2000-酰氯的制备、连接有柠檬酸的PEG2000多羧基的化学修饰剂的制备，方法分别与实施例1中的步骤①～③相同；

②PEG2000-丁二酰基-柠檬酸-白皮杉醇的制备

反应式如下：

取0.5 g(0.20 mmol) 连接有柠檬酸的PEG2000多羧基的化学修饰剂，溶于5 mL二氯甲烷中，加入白皮杉醇的DMF溶液(0.35 g白皮杉醇溶于6 mLDMF中制得)，搅拌30 min，加入EDC.HCl 0.27 g(1.42 mmol)、DMAP 1.73 g(1.42 mmol)，室温反应24 h，反应完毕，减压浓缩，异丙醇重结晶，得PEG2000-丁二酰基-柠檬酸-白皮杉醇前药0.27 g，收率34.0%。

由于PEG/mPEG作为药物载体时最常用的分子量为2000—75000，本实施例还将前述所用的PEG2000以分子量为2000—75000范围的PEG/mPEG替代来制备白皮杉醇的前药，这种改变对制备方法与过程无影响，只是载体的分子量发生变化时需要改变其投料量，同样实现了发明目的。

 实施例4  PEG2000-丁二酰基-柠檬酸-白藜芦醇的制备

本实施例包括以下步骤：

①PEG2000羧酸衍生物的制备、PEG2000-酰氯的制备、连接有柠檬酸的PEG2000化学修饰剂的制备，方法分别与实施例1中的步骤①～③相同；

②PEG2000-丁二酰基-柠檬酸-白藜芦醇的制备

反应式如下：

取0.5 g(0.20 mmol) 连接有柠檬酸的PEG2000多羧基的化学修饰剂，溶于5 mL二氯甲烷中，加入白藜芦醇的DMF溶液(0.32 g白藜芦醇溶于6 mLDMF中制得)，搅拌30 min，加入EDC.HCl 0.27 g(1.42 mmol)、DMAP 1.73 g(1.42 mmol)，室温反应24 h，反应完毕，减压浓缩，异丙醇重结晶，得PEG2000-丁二酰基-柠檬酸-白藜芦醇前药0.27 g，收率36.0%。

另外，由于PEG/mPEG作为药物载体时最常用的分子量为2000—75000，本实施例还将前述所用的PEG2000以分子量为2000—75000范围的PEG/mPEG替代来制备白藜芦醇的前药，这种改变对制备方法与过程无影响，只是载体的分子量发生变化时需要改变其投料量，同样实现了发明目的。

实施例5  PEG2000-丁二酰基-柠檬酸-苯烯莫德的制备

本实施例按照以下步骤顺序进行：

①PEG2000羧酸衍生物的制备、PEG2000-酰氯的制备、连接有柠檬酸的PEG2000多羧基的化学修饰剂的制备，方法分别与实施例1中的步骤①～③相同；

②PEG2000-丁二酰基-柠檬酸-苯烯莫德的制备

反应式如下：

取0.5 g(0.20 mmol)连接有柠檬酸的PEG2000多羧基的化学修饰剂，溶于5 mL二氯甲烷中，加入苯烯莫德的DMF溶液(0.38 g苯烯莫德溶于8 mLDMF中制得)，搅拌30 min，加入EDC.HCl 0.27 g(1.42 mmol)、DMAP 1.73 g(1.42 mmol)，室温反应24 h，反应完毕，减压浓缩，异丙醇重结晶，得PEG2000-丁二酰基-柠檬酸-苯烯莫德前药0.33 g，收率41.0%。

 另外，由于PEG/mPEG作为药物载体时最常用的分子量为2000—75000，本实施例还将前述所用的PEG2000以分子量为2000—75000范围的PEG/mPEG替代来制备苯烯莫德的前药，这种改变对制备方法与过程无影响，只是载体的分子量发生变化时需要改变其投料量，同样实现了发明目的。

 实施例6  PEG2000-乙酰基-柠檬酸-紫檀茋的制备

①PEG2000羧酸衍生物的制备

反应式如下：

取30 g(0.15 mol)干燥PEG2000溶于300 mL甲苯中，蒸除60 mL甲苯，自然降至室温后，加入叔丁醇钾的叔丁醇溶液(5.21 g叔丁醇钾溶于30 mL叔丁醇中制得)，搅拌1 h，加入27.05 g溴乙酸乙酯，回流反应24 h，反应结束后，过滤，滤液减压蒸除叔丁醇、甲苯及未反应完的原料，残余物用二氯甲烷溶解，无水乙醚重结晶，得PEG2000-乙酸乙酯30.46 g，收率93.5%；

将上述PEG2000-乙酸乙酯用50 mL蒸馏水溶解，0.1 mol/LNaOH溶液调pH10，在冰水冷却下，用1%的草酸溶液调体系pH2～3，室温搅拌20 min，二氯甲烷萃取(20 mL×3)，合并有机相，饱和食盐水洗涤至中性，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用无水乙醚重结晶得PEG2000-乙酸26.91 g，收率90.7%。

本实施例的该步骤，还将溴乙酸乙酯分别以溴乙酸异丁酯、溴乙酸叔丁酯替代，以相同的方法制得了PEG2000羧酸衍生物。

②PEG2000-酰氯的制备

取5 g(2.36 mmol)PEG2000羧酸用20 mL二氯甲烷溶解，降温至0～5 ℃,通N₂保护，加入0.56 g(7.08 mmol)Py和3.09 g(25.96 mmol)干燥的SOCl₂，反应1 h，自然升至室温反应3 h，回流反应6 h，反应完毕，浓缩得PEG2000-酰氯5.08 g，收率100%。

③PEG2000-乙酰基-柠檬酸的制备

反应式如下：

常温下，将0.5 g(2.86 mmol)柠檬酸溶于3 mLDMF中，通N₂保护，0～5℃加入0.28 g(3.54 mmol)Py和PEG2000-酰氯的DMF溶液(2.93 gPEG2000-酰氯溶于5 mLDMF中)，搅拌1 h，自然升至室温反应3 h，50 ℃反应6 h，减压蒸除溶剂，无水乙醚重结晶，得连接有柠檬酸的PEG2000多羧基的化学修饰剂，5.43 g，收率77%。

④PEG2000-乙酰基-柠檬酸-紫檀茋前药的制备

取0.5 g(0.20 mmol)连接有，连接有柠檬酸的PEG2000多羧基的化学修饰剂，溶于5 mL二氯甲烷中，加入紫檀茋的DMF溶液(0.36 g紫檀茋溶于6 mLDMF中)，搅拌30 min，加入EDC.HCl 0.27 g(1.42 mmol)、DMAP 1.73 g(1.42 mmol),室温反应24 h，反应完毕，减压浓缩，异丙醇重结晶，得PEG2000-乙酰基-柠檬酸-紫檀茋前药0.29 g，收率37.0%。

 本实施例还将所用紫檀茋依次用白藜芦醇、白皮杉醇前药、苯烯莫德、氧化白藜芦醇代替，以类同的方法分别制得了PEG2000-乙酰基-柠檬酸-白藜芦醇前药、PEG2000-乙酰基-柠檬酸-白皮杉醇前药、PEG2000-乙酰基-柠檬酸-苯烯莫德前药、PEG2000-乙酰基-柠檬酸-氧化白藜芦醇前药。

另外，由于PEG/mPEG作为药物载体时最常用的分子量为2000—75000，本实施例还将前述所用的PEG2000以分子量为2000—75000范围的PEG/mPEG替代来制备上述化合物的前药，这种改变对制备方法与过程无影响，只是载体的分子量发生变化时需要改变其投料量，同样实现了发明目的。

 实施例7  PEG6000-丁二酰基-柠檬酸-白皮杉醇的制备

本实施例包括以下步骤：

①PEG6000羧酸衍生物的制备

取30 g(0.005 mol)干燥PEG6000，溶于100 mL氯仿中，加入丁二酸酐1.5 g(0.015mol)，搅拌均匀，加入2 mL吡啶(Py)，加热至回流，反应36 h，蒸除溶剂，残余物用80 mL饱和NaHCO₃溶液溶解，乙酸乙酯萃取(20 mL×3)，水相降温至0～5 ℃，用1 mol/L盐酸调pH2～3，搅拌20 min后二氯甲烷萃取(20 mL×4)，合并有机相，饱和食盐水水洗涤至中性，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，无水乙醚重结晶得白色固体PEG6000-丁二酸26.04 g，收率84.0%。

②PEG6000-酰氯的制备

取5 g(0.81 mmol)PEG6000羧酸用50 mL二氯甲烷溶解，降温至0～5 ℃，加入0.19 g(2.43 mmol)Py和1.06 g(8.91 mmol)干燥的SOCl₂，低温反应1 h，自然升至室温反应3 h，回流反应6 h，反应完毕，浓缩得PEG6000-酰氯，5.05 g，收率100%。

③PEG6000-丁二酰基-柠檬酸的制备

反应方程式如下：

常温下，将0.5 g(2.86 mmol)柠檬酸溶于DMF中，0～5 ℃加入0.28 g(3.54 mmol)Py和PEG6000-酰氯的DMF溶液(8.48 gPEG6000-酰氯溶于10 mL的DMF溶液中制得)，搅拌1 h，自然升至室温反应3 h，50 ℃反应6 h，减压蒸除溶剂，无水乙醚重结晶，得连接有柠檬酸的PEG6000化学修饰剂7.25 g，收率81%。

③PEG6000-丁二酰基-柠檬酸-白皮杉醇的制备

反应方程式如下：

取连接有柠檬酸的PEG6000化学修饰剂0.5 g(0.076 mmol)溶于5 mL二氯甲烷中，加入白皮杉醇的DMF溶液(0.13 g白皮杉醇溶于5 mLDMF溶液中)，搅拌30min，加入EDC.HCl 0.10 g(0.54 mmol)、DMAP 0.06g(0.54 mmol)，室温搅拌24 h，反应完毕，减压浓缩，用异丙醇重结晶，得白皮杉醇前药0.21 g，收率35%。

 本实施例还将所用白皮杉依次用白藜芦醇、紫檀茋、苯烯莫德、氧化白藜芦醇代替，以同样的方法制得了PEG6000-丁二酰基-柠檬酸-白藜芦醇前药、PEG6000-丁二酰基-柠檬酸-紫檀茋前药、PEG6000-丁二酰基-柠檬酸-苯烯莫德前药、PEG6000-丁二酰基-柠檬酸-氧化白藜芦醇前药。

另外，由于PEG/mPEG作为药物载体时最常用的分子量为2000—75000，本实施例还将前述所用的PEG6000以分子量为2000—75000范围的PEG/mPEG替代来制备上述化合物的前药，这种改变对制备方法与过程无影响，只是载体的分子量发生变化时需要改变其投料量，同样实现了发明目的。

 实施例8    mPEG2000-丁二酰基-紫檀茋前药的制备方法

①mPEG2000羧酸衍生物的制备

反应式如下：

取20 g(10 mmol)干燥mPEG2000，溶于80 mL氯仿中，加入丁二酸酐1.5 g(15 mmol)，搅拌均匀，加入1 mL吡啶(Py)，加热至回流，反应36 h，蒸除溶剂，残余物用60 mL饱和NaHCO₃溶液溶解，乙酸乙酯萃取(20 mL×3)，水相降温至0～5 ℃，用1 mol/L盐酸调pH2～3，搅拌20 min后二氯甲烷萃取(20 mL×4)，合并有机相，饱和食盐水水洗涤中性，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，无水乙醚重结晶，得白色固体mPEG2000-丁二酸17.22 g，收率82.0%；

②mPEG2000-酰氯的制备

取5 g(2.38 mmol)PEG2000羧酸用40 mL二氯甲烷溶解，降温至0～5 ℃，加入0.56 g(7.14 mmol)Py和3.12 g(26.18 mmol)干燥的SOCl₂，反应1 h，自然升至室温反应3 h，回流反应6 h，反应完毕，浓缩得PEG2000-酰氯5.04 g，收率100%。

③mPEG2000-丁二酰基-柠檬酸的制备

常温下，将0.5 g(2.86 mmol)柠檬酸溶于5 mL DMF中，0～5 ℃加入0.28 g(3.54 mmol)Py和mPEG2000-酰氯的DMF溶液(2.88 g的mPEG2000-酰氯溶于8 mLDMF溶液中制得)，搅拌1 h，自然升至室温反应3 h，50 ℃反应6 h，减压蒸除溶剂，无水乙醚重结晶得连接有柠檬酸的mPEG2000化学修饰剂2.44 g，收率79.0%。

④mPEG2000-丁二酰基-柠檬酸-紫檀茋的制备

取0.5 g(0.22 mmol)连接有柠檬酸的mPEG2000化学修饰剂溶于5 mL二氯甲烷中，加入紫檀茋的DMF溶液(0.23 g紫檀茋溶于5 mLDMF中制得)，搅拌30 min，加入EDC.HCl 0.17 g(0.902 mmol)、DMAP 0.11 g(0.902 mmol)，室温反应24 h，反应完毕，减压浓缩，异丙醇重结晶，得mPEG2000-丁二酰基-柠檬酸-紫檀茋前药0.20 g，收率31.0%。

本实施例还将所用紫檀茋依次用白藜芦醇、白皮杉、苯烯莫德、氧化白藜芦醇代替，以类同的方法制得了mPEG2000-丁二酰基-柠檬酸-白藜芦醇前药、mPEG2000-丁二酰基-柠檬酸-白皮杉醇前药、mPEG2000-丁二酰基-柠檬酸-苯烯莫德前药、mPEG2000-丁二酰基-柠檬酸-氧化白藜芦醇前药。

本发明中，由于PEG/mPEG作为药物载体时最常用的分子量为2000—75000，本实施例还将前述所用的mPEG2000以分子量为2000—75000范围的PEG/mPEG替代来制备上述化合物的前药，这种改变对制备方法与过程无影响，只是载体的分子量发生变化时需要改变其投料量，同样实现了发明目的。