木酚素系化合物或含有该化合物的肉豆蔻提取物或肉豆蔻假种皮提取物的新用途

摘要

本发明涉及木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物的新用途。具体而言，本发明涉及一种美白用组合物，其特征在于含有木酚素系化合物或者含该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物。选自化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物通过抑制黑色素生成和酪氨酸酶活性从而具有卓越的美白效果，因此可用作美白用化妆品组合物、食品组合物或者药物组合物的有效成分。

说明书

技术领域

本申请要求以2007年10月17日提交的第2007-0104783号韩国专利申请作为优先权基础，前述说明书全文为本发明的参考文献。

本发明涉及木酚素系化合物或含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物的新用途。具体而言，本发明涉及一种美白组合物，其特征在于含有木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物。

背景技术

虽然人的肤色由产生黑色素的黑色素细胞的活性、血管分布、皮肤的厚度以及是否含有类胡萝卜素、胆红素等人体内外的色素等多种因素所决定，但是其中由黑色素细胞中的酪氨酸酶等多种酶作用生成的被称为黑色素的黑色色素最为重要。

前述黑色素的形成受到遗传因素、激素分泌、应激等相关生理因素以及紫外线照射等此类环境因素的影响。已知黑色素存在于作为皮肤外层的表皮层，其在保护真皮以下的皮肤器官防止紫外线的同时，还起到捕捉在生物体的皮肤内生成的自由基等的作用，因而具有保护皮肤内蛋白质和基因等重要作用，但是由于黑色素过度产生，不仅会形成黄褐斑、雀斑等，还会促进皮肤老化，并且在皮肤癌的诱发中也起着重要的作用。

为了治疗或者减轻前述黄褐斑、雀斑、色素沉积等皮肤色素异常沉积症状和因暴露于紫外线而产生的过度黑色素沉积，过去曾在化妆品或药物中配合使用抗坏血酸、曲酸、熊果苷、氢醌、谷胱甘肽、或者它们的衍生物、具有酪氨酸酶抑制活性的化合物，但是由于这些物质没有充分的美白效果，存在对皮肤的安全性问题，并且在与化妆品配合使用时会出现剂型和稳定性问题，因此其使用受到了局限。因此，针对安全性出色并且美白活性出色的天然物质来源的物质进行了研究。

另一方面，肉豆蔻(nutmeg)是在热带地区栽培的多年生植物肉豆蔻(Myristica fragrans)的果实，自古以来就用作香料。

此外，肉豆蔻假种皮表示前述肉豆蔻植物的果实的表皮部分，并且已知其具有抑制幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)生长的活性(InVivo.，17；541-4，2003)、可活化肝脏的解毒机制(Food Chem.Toxicol.，31；517-21.1993)、皮肤疣的化学预防作用(Cancer Lett.，56：59-63，1991)、抗癌活性(Jpn.J.Pharmacol.，49；155-63，1999)。但是，对于肉豆蔻或者肉豆蔻假种皮是否具有美白活性全然不知。

尤其是有报道称，从前述自肉豆蔻或者肉豆蔻假种皮提取的肉豆蔻木酚素是代表性木酚素系化合物(Phytochemistry，59：169-173，2002)，具有增进诱导凋亡(apoptosis)的胱冬蛋白酶(caspase)-3活性的作用(Biol.Pharm.Bull.，27：1305-1307，2004)，对口腔微生物的抗菌活性(韩国专利公开专利公报10-691792号)、抗炎症作用(韩国专利公开专利公报10-0579752号)、抗痤疮机能(韩国专利公开专利公报10-0567431号)、抑制脑细胞的脂质过氧化和活性氧生成的作用(Biochem.Biophys.Res.Commu.，331：1264-1269)等。但是，却并不知晓包括肉豆蔻木酚素在内的从前述肉豆蔻或者肉豆蔻假种皮提取的奥斯贝木酚素7或者里卡灵E是否具有美白活性。

发明内容

技术问题

因此，本发明人针对天然物质来源的具有美白活性的物质进行了反复的研究，从中发现木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物具有出色的美白活性，藉此完成了本发明。

因此，本发明的目的是提供一种美白用化妆品组合物，其特征在于含有选自下述化学式1至3的木酚素系化合物或者含该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物。

<化学式1>                  <化学式2>                    <化学式3>

本发明的另一目的是提供一种美白用食品组合物，其特征在于含有选自前述化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物。

本发明的又一目的是提供一种美白用药物组合物，其特征在于含有选自前述化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物。

本发明的又一目的是提供选自前述化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物在制备化妆品组合物中的用途。

本发明的又一目的是提供选自前述化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物在制备食品组合物中的用途。

本发明的又一目的是提供选自前述化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物在制备药物组合物中的用途。

本发明的又一目的是提供一种选自前述化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物抑制黑色素生成的方法。

本发明的又一目的是提供一种选自前述化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物抑制酪氨酸酶活性的方法。

技术方案

为了实现上述目的，本发明提供了一种美白用化妆品组合物，其特征在于含有选自下述化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物

<化学式1>                        <化学式2>             <化学式3>

本发明提供一种美白用食品组合物，其特征在于含有选自前述化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物。

本发明提供一种美白用药物组合物，其特征在于含有选自前述化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物。

本发明提供选自前述化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物在制备化妆品组合物中的用途。

本发明提供选自前述化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物在制备食品组合物中的用途。

本发明提供选自前述化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物在制备药物组合物中的用途。

本发明提供一种选自前述化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物抑制黑色素生成的方法。

本发明提供一种选自前述化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物抑制酪氨酸酶活性的方法。

下面将更详细地说明本发明的内容。

本发明中的“肉豆蔻”是指热带地区栽培的多年生植物肉豆蔻(Myristica fragrans)的果实，“肉豆蔻假种皮”是指前述肉豆蔻植物的果实的表皮部分。

本文中的“肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物”是指来自于肉豆蔻或者肉豆蔻假种皮的含有下述木酚素系化合物的提取物。只要可以含有前述木酚素系化合物，就对前述肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物的制备方法没有限制，但是优选地，利用选自水、C1-C6有机溶剂以及亚临界或超临界流体中的一种以上溶剂从肉豆蔻或者肉豆蔻假种皮提取来制备。此外，必要时，可额外包括利用本领域公知方法的过滤和浓缩步骤来制备。

前述C1-C6有机溶剂优选地选自C1-C6醇、丙酮、醚、苯、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、己烷、环己烷、石油醚，但不限于此。

另外，前述“超临界流体”是指在一般条件下为气态、而在临界温度和临界压力以上时为流体的物质。前述亚临界流体包括亚临界液体和气体，具体而言，亚临界液体是指温度比超临界温度和饱和温度更低的状态的流体，亚临界气体是指温度比饱和温度更高、压力比超临界压力更低的状态的流体。前述超临界流体和亚临界流体在药品产业、食品产业、化妆品/香料产业、化学产业、能源产业以及其他诸多领域中应用。可在本发明中使用的超临界流体和亚临界流体没有特别的限制，可以利用例如二氧化碳、氮气、氧化亚氮、甲烷、乙烯、丙烷、丙烯、石油醚、乙醚和环己烷等。具体而言，由于二氧化碳可以大量购买，比较便宜，没有爆炸性，并且具有在用于加工时十分稳定的优点，因此特别优选。前述二氧化碳的临界温度为31.1℃，临界压力为73.8个大气压。

在本发明的一个实施例中，将干燥的肉豆蔻或者肉豆蔻假种皮粉碎，然后利用乙醇、己烷或氯仿溶剂对其进行提取，并进行过滤和浓缩步骤，从而制备肉豆蔻或者肉豆蔻假种皮的乙醇、己烷或者氯仿提取物。此外，向将二氧化碳(CO₂)用作超临界流体的超临界流体提取机中加入肉豆蔻，从而制备肉豆蔻的超临界提取物(参照<实施例1>)。

本发明中的“木酚素系化合物”是指选自下述化学式1至3的化合物。具体而言，化学式1表示的化合物为肉豆蔻木酚素(macelignan，4-((2S，3R)-4-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基-2，3-二甲基-丁基)-2-甲氧基苯酚)，化学式2表示的化合物为奥斯贝木酚素7(austobailignan 7，4-(1-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基-2-甲基-丁氧基甲基)-2-甲氧基苯酚)，化学式3表示的化合物为里卡灵E(licarin E，5-(7-甲氧基-3-甲基-5-丙烯基-2，3-二氢-苯并呋喃-2-基)-苯并[1，3]二氧杂环戊烯)。

<化学式1>                      <化学式2>                <化学式3>

前述木酚素系化合物可利用公知的合成方法制备，可通过从前述肉豆蔻或者肉豆蔻假种皮提取并分离纯化来获得。对于从前述肉豆蔻或者肉豆蔻假种皮提取物分离和纯化木酚素系化合物，优选地，可以单独或者结合使用填充有硅胶(silica gel)或者活性氧化铝(alumina)等各种合成树脂的柱色谱法(column chromatography)和高效液相色谱法(HPLC)等，但不限于此。但是，木酚素系化合物的提取、分离和纯化方法不必拘泥于前述方法。

在本发明的一个实施例中，利用公知的硅胶柱色谱法从干燥的肉豆蔻或者肉豆蔻假种皮提取物分离前述肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7或者里卡灵E(参照<实施例2>)。

选自前述化学式1至化学式3的木酚素系化合物、或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物具有出色的美白活性。

具体而言，将前述木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物加入黑色素细胞Melan-a细胞中，结果发现黑色素生成被显著抑制(参照<实验例1>)，与黑色素生成有关的酶酪氨酸酶(tyrosinase)的活性受到抑制(参照<实验例2>)，并且前述酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白质(TRP-1、TRP-2)的表达均受到抑制(参照<实验例3>)。

因此，由于前述木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物具有出色的美白活性，因此可用作化妆品组合物、食品组合物或者药物组合物的有效成分。

前述本发明的化妆品组合物含有作为有效成分的选自前述化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物，并可与皮肤学许可的赋形剂一起制备成基础化妆品组合物(化妆水、润肤霜、精华、洁面泡沫和洁面水等洁面剂、面膜、身体护理油)、彩色化妆品组合物(粉底、唇膏、睫毛膏、妆底)、头发护理组合物(洗发水、润丝、护发素、发膏)和肥皂等形式。

前述赋形剂包括例如皮肤软化剂、皮肤渗透增强剂、着色剂、芳香剂、乳化剂、稠化剂和溶剂，但不限于此。还可另外包括香料、色素、杀菌剂、防氧化剂、防腐剂和保湿剂等，并且可包括以改善物理性质为目的的增稠剂、无机盐、合成聚合物等。例如，在将本发明的化妆品组合物制备成洁面剂和肥皂时，通过向普通的洗面剂和肥皂基质中添加前述木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物可以很容易制得。制备乳液时，可通过向普通的水包油型(O/W)乳液基质中加入前述木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物，或者向其中加入盐制得。另外，可以另外向其中添加香料、螯合剂、色素、防氧化剂、防腐剂等和以改善物理性质为目的的蛋白质、矿物质、维生素等合成或天然材料。

本发明的化妆品组合物中所含有的前述木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物的含量优选为全部组合物总重量的0.001至10重量％，更优选0.01至5重量％，但不限于此。前述含量不足0.001重量％，则无法具有所需的美白效果，超过10重量％，则可能在安全性或者剂型的制备方面存在困难。

另一方面，本发明的食品组合物包括功能性食品(functional food)、营养辅助剂(nutritional supplement)、健康食品(health food)和食品添加剂(food additives)等全部形式。

前述类型的食品组合物可通过本领域公知的常规方法制备成多种形式。例如，对于健康食品，可将前述木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物自身制备成茶、果汁和饮料形式以供饮用，也可将其进行液化、颗粒化、胶囊化和粉化以供摄食。还可以将前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物与已知具有美白效果的公知活性成分混合在一起制备成组合物的形式。此外，对于功能性食品，可以通过向饮料(包括酒精性饮料)、水果及其加工食品(例如罐装水果、瓶装水果、果酱、橘子果酱等)、鱼类、肉类及其加工食品(例如火腿肠、香肠、腌牛肉等)、面包类和面条类(例如乌冬面、荞麦面条、拉面、意大利面条、通心面等)、果汁、各种饮料、饼干、糖果、乳制品(例如黄油、奶酪等)、食用食物油、人造奶油、植物蛋白、杀菌袋装食品、冷冻食品、各种调味料(例如味精、酱油、沙司等)等(但不限于此)中添加前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物制得。为了将前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物以食品添加剂的形式使用，还可以将其制备成粉末或者浓缩液形式。

对于本发明食品组合物内的前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物的优选含量优选为在最终制成的食品中占0.01至50重量％，但是不限于此。更优选地，对于本发明食品组合物，可通过专门与已知具有美白效果的活性成分混合在一起制成健康食品的形式。

另一方面，前述本发明药物组合物可以仅含有前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物，或者可以另外含有一种以上可药用载体、赋形剂或稀释剂。

可药用载体可包括例如口服用载体或者非口服用载体。口服用载体可包括乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等。另外，非口服用载体可包括水、适合的油、盐水、葡萄糖水溶液和乙二醇等。可另外包括稳定剂和防腐剂。合适的稳定剂有亚硫酸氢钠、亚硫酸钠或抗坏血酸等抗氧化剂。合适的防腐剂有氯化苯甲烃铵、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和氯丁醇。其他可药用载体可参考以下文献中的记载内容(Remington′s Pharmaceutical Sciences，19th ed.，Mack Publishing Company，Easton，PA，1995)。

本发明的药物组合物可以任何方法给予诸如人的哺乳动物。例如，可口服或者非口服给药。非口服给药方法可有但不限于静脉内给药、肌内给药、动脉内给药、骨髓内给药、隔膜内给药、心内给药、经皮给药、皮下给药、腹腔内给药、鼻孔内给药、肠道给药、局部给药、舌下给药或者直肠内给药。可依据如上所述的给药途径，将本发明的药物组合物制备成口服或者非口服制剂。对于口服制剂，可利用本领域公知的方法将本发明的组合物制备成粉末、颗粒、片剂、丸剂、糖衣片剂、胶囊剂、液剂、凝胶剂、糖浆剂、浆体剂、悬液等。例如，对于口服制剂，可将活性成分与固体赋形剂混合，再将其粉碎，加入合适的辅助剂，然后通过加工成颗粒混合物，可获得片剂或者糖衣片剂。合适的赋形剂的实例可包括：包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、赤藓醇和麦芽糖醇等的糖类，包括玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉和马铃薯淀粉等的淀粉类，包括纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和羟丙基甲基纤维素等的纤维素类，明胶、聚乙烯基吡咯烷酮等此类填充剂。还可根据情况加入交联的聚乙烯基吡咯烷酮、琼脂、海藻酸或者海藻酸钠等作为崩解剂。另外，本发明的药物组合物还可含有抗凝剂、润滑剂、湿润剂、香料、乳化剂和防腐剂等。对于非经口服制剂，可通过本领域公知的方法制备成注射剂、膏剂、洗剂、外用软膏剂、油膏剂、保湿剂、凝胶剂、气雾剂和鼻孔吸入剂的形式。这些剂型记载于在整个制药化学中普遍公知的处方书文献中(Remington′s Pharmaceutical Sciences，15th Edition，1975.MackPublishing Company，Easton，Pennsylvania 18042，Chapter87：Blaug，Seymour)。

本发明药物组合物的总有效量可以以单次剂量(single dose)给予患者，也可以通过长时间给药的分割治疗方法(fractionated treatmentprotocol)以多个剂量给药。本发明药物组合物的有效成分的含量可随疾病程度而异。在非口服给药时，以前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物为基准，优选每1日1kg体重给予0.01至50mg、更优选0.1至30mg的量，而在口服给药时，以前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物为基准，优选以每1日1kg体重给予0.01至100mg、更优选0.1至50mg的量分一次至多次给药。但是，前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物的用量不仅要考虑到药物组合物的给药途径和治疗次数，还要考虑到患者的年龄、体重、健康状态、性别、疾病严重程度、饮食和排泄率等多种因素，从而决定给予患者的有效量，因此在考虑到这些方面时，本领域普通技术人员可以决定与美白的特定用途相适的前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物的合适有效给药量。只要本发明的药物组合物表现出本发明的效果，就对其剂型、给药途径和给药方法没有特别的限制。

此外，选自前述化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物由于美白效果出色，因此可用于制备美白用化妆品组合物、食品组合物或者药物组合物。

利用前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物来制备化妆品组合物、食品组合物或者药物组合物的方法，以及前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物相对于前述组合物的含量如前所述。

另外，选自化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物可在抑制黑色素生成和抑制酪氨酸酶活性的方法中使用。

为了用于抑制黑色素生成和抑制酪氨酸酶活性的方法中(但不限于此)，可将有效量的前述木酚素系化合物或者肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物给予对其有需要的个体。

前述“有需要的个体”是指需要通过抑制黑色素生成和酪氨酸酶活性进行美白的哺乳动物，优选指人。另外，前述“有效量”是指使前述个体内的黑色素生成和酪氨酸酶活性被抑制从而表现出美白效果的量。以前述有效量给药的给药方法和给药量具体如前所述。

有益效果

由上文可知，选自前述化学式1至化学式3的木酚素系化合物或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物由于会抑制黑色素生成和酪氨酸酶活性，因而具有卓越的美白效果，因此可用作美白用化妆品组合物、食品组合物或者药物组合物的有效成分。

附图说明

图1为确认肉豆蔻乙醇提取物是否具有黑色素生成抑制活性的结果。

图2为确认肉豆蔻木酚素化合物是否具有黑色素生成抑制活性的结果。

图3为确认肉豆蔻乙醇提取物是否具有抑制黑色素生成相关酶酪氨酸酶的活性的结果。

图4为确认肉豆蔻木酚素化合物是否具有抑制黑色素生成相关酶酪氨酸酶的活性的结果。

图5为确认肉豆蔻乙醇提取物是否具有抑制酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白质(TRP-1、TRP-2)表达的活性的结果。

图6为确认肉豆蔻木酚素化合物是否具有抑制酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白质(TRP-1、TRP-2)表达的活性的结果。

具体实施方式

下面通过列出实施例来更具体地说明本发明的构成和效果。但是，这些实施例仅仅是为了促进对本发明的理解之例示目的而提出，本发明的范围不受下述实施例的限制。

<实施例1>

具有美白活性的肉豆蔻或者肉豆蔻假种皮提取物的制备

<1-1>肉豆蔻提取物的制备

首先，为制备肉豆蔻乙醇提取物，将干燥的肉豆蔻用混合机粉碎，再将100g粉碎的肉豆蔻样本加入1L乙醇中，并在常温下冷浸48小时进行提取。将提取的样本用Whatman No.2滤纸过滤，再将滤过的提取液通过真空回转浓缩机浓缩来除去溶剂成分，从而获得肉豆蔻乙醇提取物。

再使用甲醇、己烷或者氯仿替代前述乙醇作为提取溶剂并采用与前述相同的方法，获得了肉豆蔻的甲醇、己烷或者氯仿提取物。

还使用超临界流体提取机制备了肉豆蔻超临界提取物。具体而言，将二氧化碳用作超临界流体并将在提取温度为50℃、提取压力为200bar时提取得到的提取物除去溶剂来制得。

<1-2>肉豆蔻假种皮提取物的制备

将干燥的肉豆蔻假种皮用混合机粉碎，再将100g粉碎的肉豆蔻假种皮样本加入1L乙醇中，并在常温下冷浸48小时，并通过利用与前述<实施例1-1>相同的方法提取从而获得肉豆蔻假种皮乙醇提取物。

<实施例2>

从肉豆蔻或者肉豆蔻假种皮提取物分离具有美白活性的化合物

<2-1>肉豆蔻木酚素的分离

将前述<实施例1-1>中乙醇被浓缩的肉豆蔻乙醇提取物与乙酸乙酯混合，提取乙酸乙酯溶解性成分，再除去乙酸乙酯从而浓缩乙酸乙酯溶解性成分。在填充有硅胶的6x15cm柱中，用己烷和乙酸乙酯以比率10∶1(v/v)混合得到的溶剂体系除去非活性物质等，随后，用己烷和乙酸乙酯以比率20∶1(v/v)混合的溶剂得到各级分之后，利用Rp-18柱色谱法用80％甲醇洗脱，再进行浓缩液干燥，最后分离出纯的单一美白活性物质即下述化学式1的肉豆蔻木酚素(4-((2S，3R)-4-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基-2，3-二甲基-丁基)-2-甲氧基苯酚)。

<化学式1>

<2-2>奥斯贝木酚素7的分离

将前述实施例<1-2>得到的经浓缩的肉豆蔻假种皮乙醇提取物用乙酸乙酯、丁醇、水进行分级。利用硅胶柱色谱法、用氯仿和乙酸乙酯以比率9∶1(v/v)混合的溶剂洗脱乙酸乙酯级分(10.29g)，从而得到级分V(0.52g)和级分VI(0.19g)。用氯仿、乙酸乙酯和丙酮以比率30∶1∶2(v/v/v)混合的溶剂对分级分离物VI进行柱色谱法处理，从而得到分级分离物VI-B(0.52g)。之后，通过利用循环高效液相色谱法用100％乙醇洗脱级分VI-B，最终分离出0.011g纯的单一美白活性物质即下述化学式2的奥斯贝木酚素7(4-(1-苯并[1，3]二氧杂环戊烯-5-基-2-甲基-丁氧基甲基)-2-甲氧基苯酚)。

<化学式2>

<2-3>里卡灵E的分离

将从前述实施例<1-2>得到的经浓缩的肉豆蔻假种皮乙醇提取物用乙酸乙酯、丁醇、水进行分级。利用硅胶柱色谱法、用氯仿和乙酸乙酯以比率9∶1(v/v)混合的溶剂洗脱乙酸乙酯级分(18.44g)，从而得到级分II(3.04g)。用氯仿、己烷、乙酸乙酯和丙酮以比率15∶10∶0.1∶0.1(v/v/v/v)混合的溶剂对级分II进行柱色谱法处理，从而得到级分II-B(0.4g)。之后，通过利用循环高效液相色谱法用100％甲醇洗脱级分II-B，最终分离出0.016g纯的单一美白活性物质即下述化学式3的里卡灵E(5-(7-甲氧基-3-甲基-5-丙烯基-2，3-二氢-苯并呋喃-2-基)-苯并[1，3]二氧杂环戊烯)。

<化学式3>

<实验例1>

黑色素生成抑制活性

<1-1>肉豆蔻或者肉豆蔻假种皮提取物的黑色素生成抑制

首先，确认前述<实施例1-1>制备的肉豆蔻乙醇提取物是否具有黑色素生成抑制活性。

具体而言，以2×10⁵细胞/ml将Melan-a细胞加入6孔板中(黑色素定量)(最终体积为3ml)，用含有10％FBS和2μM TPA(12-豆蔻酸-13-乙酸-佛波醇酯(phorbol 12-myristate 13-acetate))的RPMI1640在10％CO₂培养箱(MCO-20AIC，Sanyo)中于37℃培养24小时。除去前述培养后的培养基，并将前述<实施例1-1>制备的肉豆蔻乙醇提取物加入RPMI 1640培养基，每天处理，为期三天。除去5日后6孔板中培养的培养基，并用0.25％胰蛋白酶-EDTA(SigmaChemical Co.)溶液处理从而回收细胞沉淀(pellet)，并转移至1.5ml试管中，以10,000rpm离心10分钟，除去上清液。将所获得的沉淀在60℃干燥，并加入100μl1N NaOH来溶解细胞内的黑色素。将该溶液用PBS稀释，然后用ELISA读板器在475nm测定吸光度，并通过下述数学式1计算出黑色素的含量，该结果记载于图1。此时，将没有添加肉豆蔻乙醇提取物的组作为对照组。

【数学式1】

由图1记载可知，肉豆蔻乙醇提取物具有出色的黑色素生成抑制活性，因此具有卓越的美白效果(^＊＊：P＜0.01)。

此外，分别用40μg/ml前述实施例<1-1>制备的肉豆蔻己烷提取物、氯仿提取物、超临界提取物和前述实施例<1-2>制备的肉豆蔻假种皮乙醇提取物处理Melan-a细胞，并用同前述相同的方法测定黑色素生成程度，结果发现肉豆蔻己烷提取物的黑色素生成抑制程度为约53.74％，肉豆蔻氯仿提取物的为约66.93％，肉豆蔻超临界提取物的为约73.80％，肉豆蔻假种皮乙醇提取物的为约70.50％(结果未图示)。

因此，由于肉豆蔻或者肉豆蔻假种皮提取物的黑色素生成抑制活性出色，因此可考虑用作美白用组合物的有效成分。

<1-2>肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7和里卡灵E的黑色素生成抑制

用前述<实施例2-1>中分离的肉豆蔻木酚素处理Melan-a细胞，并以同前述<实验例1-1>相同的方法测定黑色素生成，其结果示于图2。

由图2所示可知，肉豆蔻木酚素的黑色素生成抑制活性出色，因此美白效果卓越(^＊＊：P＜0.01)。

再用前述<实施例2>中分离的奥斯贝木酚素7(750μM)和里卡灵E(50μM)分别处理Melan-a细胞，并以同前述<实验例1-1>相同的方法测定黑色素生成程度，结果发现，奥斯贝木酚素7的黑色素生成抑制程度为约53.89％，里卡灵E的为约58.44％(结果未图示)。

因此，由于肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7和里卡灵E的黑色素生成抑制活性出色，因此可考虑用作美白用组合物的有效成分。

<实验例2>

酪氨酸酶活性抑制

<2-1>肉豆蔻或者肉豆蔻假种皮提取物的酪氨酸酶活性抑制

首先，确认前述实施例<1-1>中制备的肉豆蔻乙醇提取物是否会抑制黑色素生成相关酶酪氨酸酶的活性。

如前述<实验例1-1>那样，将经培养的Melan-a细胞用前述<实施例1-1>中制备的肉豆蔻乙醇提取物处理3天，并在5天后除去在6孔板内培养的培养基，用0.25％胰蛋白酶-EDTA(Sigma ChemicalCo.)溶液处理并回收细胞沉淀。将回收得到的沉淀转移至1.5ml试管内，加入200μl磷酸盐缓冲液(pH 6.8)，以10,000rpm离心10分钟后收集分离得到的上清液，并将其中的150μl加入96孔微量板内，再加入50μl儿茶酚(catechol)。在添加完上述物质后，于37℃培养30分钟，然后利用微量板读板器测定490nm的吸光度从而确定多巴色素(dopa chrome)的量，其结果示于图3。

由图3所记载可知，在用前述<实施例1-1>中制备的肉豆蔻乙醇提取物进行处理时，所生成的多巴色素的量显著减少。因此，考虑到酪氨酸酶是多巴色素生成相关酶，则可知前述<实施例1-1>中制备的肉豆蔻乙醇提取物可以通过抑制酪氨酸酶活性来抑制黑色素生成(^＊＊：P＜0.01)。

还分别用40μg/ml的前述<实施例1-1>中制备的肉豆蔻己烷提取物、氯仿提取物、超临界提取物和前述<实施例1-2>中制备的肉豆蔻假种皮乙醇提取物处理Melan-a细胞，并采用与前述相同的方法来测定多巴色素生成程度，结果发现，肉豆蔻己烷提取物的多巴色素生成抑制程度为约54.92％，肉豆蔻氯仿提取物的为约62.89％，肉豆蔻超临界提取物的为约68.34％，肉豆蔻假种皮乙醇提取物的为约72.75％(结果未图示)。

<2-2>肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7和里卡灵E对酪氨酸酶活性的抑制

用前述<实施例2-1>中分离的肉豆蔻木酚素处理Melan-a细胞，并用与前述<实验例2-1>相同的方法测定多巴色素生成程度，其结果示于图4。

从图4可知，肉豆蔻木酚素的多巴色素生成抑制活性出色，因此可以抑制酪氨酸酶的活性(^＊＊：P＜0.01)。

还分别用前述<实施例2>中分离的奥斯贝木酚素7和里卡灵E处理Melan-a细胞，并用与前述<实验例1-1>相同的方法测定多巴色素生成程度，结果发现奥斯贝木酚素7的多巴色素生成抑制程度为约54.87％，里卡灵E的为约60.04％(结果未图示)。

因此，考虑到酪氨酸酶是多巴色素生成相关酶，则可知肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7和里卡灵E可以通过抑制酪氨酸酶的活性来抑制黑色素生成。

<实验例3>

酪氨酸酶和酪氨酸酶相关蛋白质(TRP-1、TRP-2)表达的抑制

<3-1>肉豆蔻提取物对酪氨酸酶、TRP-1和TRP-2表达的抑制

为了确认前述<实施例1-1>中制备的肉豆蔻乙醇提取物是否会抑制酪氨酸酶、酪氨酸酶相关蛋白质1(tyrosinase related protein-1，TRP-1)和酪氨酸酶相关蛋白质2(tyrosinase related protein-2，TRP-2)的表达，利用蛋白质印迹进行分析并利用Bradford法对蛋白质进行定量。

具体而言，将从用前述<实验例1-1>中的肉豆蔻乙醇提取物处理过的细胞提取的蛋白质进行10％SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，并将凝胶上的蛋白质转移至硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrance)。用5％脱脂奶粉在常温下处理1小时，加入用5％脱脂奶粉以1∶1000的比率稀释的酪氨酸酶、TRP-1和TRP-2的一次抗体，并使之在常温下反应2小时。与一次抗体反应后，在振荡的同时，用TBST(Tris-buffer Saline Tween 20)洗涤两次，每次10分钟。加入用5％脱脂奶粉以1∶1000稀释的识别各自的一次抗体的二次抗体并使之在常温下反应1小时，并同一次抗体时一样，在振荡的同时，用TBST洗涤3次，每次10分钟。用下述化学发光法(chemiluminescence)显像，其结果示于图5。

从图5记载可知，前述肉豆蔻乙醇提取物可以通过抑制酪氨酸酶、TRP-1和TRP-2的表达来抑制黑色素生成(^＊＊：P＜0.01)。

<3-2>肉豆蔻木酚素对酪氨酸酶、TRP-1和TRP-2表达的抑制

用前述<实施例2-1>中分离的肉豆蔻木酚素处理Melan-a细胞，并通过与前述<实验例3-1>相同的方法确定是否会抑制酪氨酸酶、TRP-1和TRP-2的表达，其结果示于图6。

从图6记载可知，前述肉豆蔻木酚素可通过抑制酪氨酸酶、TRP-1和TRP-2的表达来抑制黑色素生成(^＊＊：P＜01)。

<剂型例1-化妆品>

<1-1至1-3>营养化妆水(乳液)

通过常规方法，按照下表1的营养化妆水剂型比率，将前述<实施例1>中制备的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假种皮提取物或者前述<实施例2>中分离的化合物(肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7和里卡灵E)制备成营养化妆水。

【表1】

营养化妆水

  混合成分  剂型例1  (重量％)  剂型例2  (重量％)  剂型例3  (重量％)  <实施例2>中分离的化合物  2.0  -  -  肉豆蔻乙醇提取物  -  2.0  -  肉豆蔻假种皮乙醇提取物  -  -  2.0  角鲨烯  5.0  5.0  5.0  蜂蜡  4.0  4.0  4.0  聚山梨酸酯60  1.5  1.5  1.5  失水山梨糖醇倍半油酸酯  1.5  1.5  1.5  液体石蜡  0.5  0.5  0.5  辛酸/癸酸甘油三酯  5.0  5.0  5.0  甘油  3.0  3.0  3.0  丁二醇  3.0  3.0  3.0  丙二醇  3.0  3.0  3.0  羧基乙烯基聚合物  0.1  0.1  0.1  三乙醇胺  0.2  0.2  0.2  防腐剂、色素、香料  适量  适量  适量  纯化水  至100  至100  至100

<1-4至1-6>软化化妆水(润肤液)

通过常规方法，按照下表2的软化化妆水剂型比例，将前述<实施例1>中制备的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假种皮提取物或者前述<实施例2>中分离的化合物(肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7和里卡灵E)制备成软化化妆水。

【表2】

软化化妆水

  合成成分  剂型例4  (重量％)  剂型例5  (重量％)  剂型例6  (重量％)  <实施例2>中分离的化合物  2.0  -  -  肉豆蔻乙醇提取物  -  2.0  -  肉豆蔻假种皮乙醇提取物  -  -  2.0  甘油  3.0  3.0  3.0  丁二醇  2.0  2.0  2.0  丙二醇  2.0  2.0  2.0  羧基乙烯基聚合物  0.1  0.1  0.1  PEG 12壬基苯基醚  0.2  0.2  0.2  聚山梨酸酯80  0.4  0.4  0.4  乙醇  10.0  10.0  10.0  三乙醇胺  0.1  0.1  0.1  防腐剂、色素、香料  适量  适量  适量  纯化水  至100  至100  至100

<1-7至1-9>营养润肤霜

通过常规方法，按照下表3的营养润肤霜剂型比例，将前述<实施例1>中制备的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假种皮提取物或者前述<实施例2>中分离的化合物(肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7和里卡灵E)制备成营养润肤霜。

【表3】

营养润肤霜

  混合成分  剂型例7  (重量％)  剂型例8  (重量％)  剂型例9  (重量％)  <实施例2>中分离的化合物  2.0  -  -  肉豆蔻乙醇提取物  -  2.0  -  肉豆蔻假种皮乙醇提取物  -  -  2.0  聚山梨酸酯60  1.5  1.5  1.5  失水山梨糖醇倍半油酸酯  0.5  0.5  0.5  PEG60硬化蓖麻油  2.0  2.0  2.0  液体石蜡  10  10  10  角鲨烯  5.0  5.0  5.0  辛酸/癸酸甘油三酯  5.0  5.0  5.0  甘油  5.0  5.0  5.0  丁二醇  3.0  3.0  3.0  丙二醇  3.0  3.0  3.0  三乙醇胺  0.2  0.2  0.2  防腐剂  适量  适量  适量  色素  适量  适量  适量  香料  适量  适量  适量  纯化水  至100  至100  至100

<1-10至1-12>按摩膏

通过常规方法，按照下表4的按摩膏剂型比例，将前述<实施例1>中制备的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假种皮提取物或者前述<实施例2>中分离的化合物(肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7和里卡灵E)制备为按摩膏。

【表4】

按摩膏

  混合成分  剂型例10  (重量％)  剂型例11  (重量％)  剂型例12  (重量％)  <实施例2>中分离的化合物  1.0  -  -  肉豆蔻乙醇提取物  -  1.0  -  肉豆蔻假种皮乙醇提取物  -  -  1.0  蜂蜡  10.0  10.0  10.0  聚山梨酸酯60  1.5  1.5  1.5  PEG60硬化蓖麻油  2.0  2.0  2.0  失水山梨糖醇倍半油酸酯  0.8  0.8  0.8  液体石蜡  40.0  40.0  40.0  角鲨烯  5.0  5.0  5.0  辛酸/癸酸甘油三酯  4.0  4.0  4.0  甘油  5.0  5.0  5.0  丁二醇  3.0  3.0  3.0  丙二醇  3.0  3.0  3.0  三乙醇胺  0.2  0.2  0.2  防腐剂、色素、香料  适量  适量  适量  纯化水  至100  至100  至100

<1-13至1-15>面膜

通过常规方法，按照下表5的面膜剂型比例，将前述<实施例1>中制备的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假种皮提取物或者前述<实施例2>中分离的化合物(肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7和里卡灵E)制备成面膜。

【表5】

面膜

  混合成分  剂型例13  (重量％)  剂型例14  (重量％)  剂型例15  (重量％)  <实施例2>中分离的化合物  1.0  -  -  肉豆蔻乙醇提取物  -  1.0  -  肉豆蔻假种皮乙醇提取物  -  -  1.0  聚乙烯醇  13.0  13.0  13.0  羧基甲基纤维素钠  0.2  0.2  0.2  甘油  5.0  5.0  5.0  尿囊素  0.1  0.1  0.1  乙醇  6.0  6.0  6.0  PEG 12壬基苯基醚  0.3  0.3  0.3  聚山梨酸酯60  0.3  0.3  0.3  防腐剂、色素、香料  适量  适量  适量  纯化水  至100  至100  至100

<1-16至1-18>凝露

通过常规方法，按照下表6的凝露剂型比例，将前述<实施例1>中制备的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假种皮提取物或者前述<实施例2>中分离的化合物(肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7和里卡灵E)制备成凝露。

【表6】

凝露

  混合成分  剂型例16  (重量％)  剂型例17  (重量％)  剂型例18  (重量％)  <实施例2>中分离的化合物  0.5  -  -  肉豆蔻乙醇提取物  -  0.5  -

  混合成分  剂型例16  (重量％)  剂型例17  (重量％)  剂型例18  (重量％)  肉豆蔻假种皮乙醇提取物  -  -  0.5  乙二胺乙酸钠  0.05  0.05  0.05  甘油  5.0  5.0  5.0  羧基乙烯基聚合物  0.3  0.3  0.3  乙醇  5.0  5.0  5.0  PEG 60硬化蓖麻油  0.5  0.5  0.5  三乙醇胺  0.3  0.3  0.3  防腐剂、色素、香料  适量  适量  适量  纯化水  至100  至100  至100

<剂型例2-食品>

<2-1>健康食品的制备

可将以下物质混合在一起进行制备：1000mg前述<实施例1>中制备的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假种皮提取物或者前述<实施例2>中分离的化合物(肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7和里卡灵E)、70μg维生素A醋酸酯、1.0mg维生素E、0.13mg维生素B1、0.15mg维生素B2、0.5mg维生素B6、0.2mg维生素B12、10mg维生素C、10μg生物素、1.7mg烟酰胺、50μg叶酸、0.5mg泛酸钙、1.75mg硫酸亚铁、0.82mg氧化锌、25.3mg碳酸镁、15mg磷酸二氢钾、55mg磷酸氢钾、90mg柠檬酸钾、100mg碳酸钙、24.8mg氯化镁，也可以任意地改变其混合比进行实施，通过常规健康食品制备方法，在将前述成分混合之后，将其制备成颗粒，并通过常规方法用于健康食品组合物的制备中。

<2-2>健康饮料的制备

通过常规健康饮料制备方法，将1000mg前述<实施例1>中制备的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假种皮提取物或者前述<实施例2>中分离的化合物(肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7和里卡灵E)、1000mg柠檬酸、100g寡糖、2g梅果实浓缩液、1g牛磺酸加入纯化水中，总共为900ml，再将所述成分进行混合，然后将在85℃搅拌加热大约1小时得到的溶液过滤，并收集到经灭菌的2L容器中，密封、灭菌、冷藏保管，从而可用于健康饮料组合物制备中。

<2-3>口香糖

将20重量％胶基、76.9重量％砂糖、1重量％香料和2重量％水与0.1重量％前述<实施例1>中制备的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假种皮提取物或者前述<实施例2>中分离的化合物(肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7和里卡灵E)混合，并通过常规方法制备口香糖。

<2-4>糖果

将60重量％砂糖、39.8重量％淀粉糖浆和0.1重量％香料与0.1重量％前述<实施例1>中制备的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假种皮提取物或者前述<实施例2>中分离的化合物(肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7和里卡灵E)混合，并通过常规方法制备糖果。

<2-5>饼干

将25.59重量％硬麦面粉、22.22重量％中力小麦粉、4.80重量％精白糖、0.73重量％食盐、0.78重量％葡萄糖、11.78重量％棕榈油(palm shortening)、1.54重量％铵、0.17重量％小苏打、0.16重量％亚硫酸氢钠、1.45重量％米粉、0.0001重量％维生素B1、0.0001重量％维生素B2、0.04重量％牛奶香精、20.6998重量％水、1.16重量％全脂奶粉、0.29重量％代用奶粉、0.03重量％磷酸二氢钙、0.29重量％散布盐和7.27重量％喷雾乳与1重量％前述<实施例1>中制备的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假种皮提取物或者前述<实施例2>中分离的化合物(肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7和里卡灵E)混合，并利用常规方法制备饼干。

<剂型例3-医药品>

<3-1>粉剂

将50mg前述<实施例1>中制备的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假种皮提取物或者前述<实施例2>中分离的化合物(肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7和里卡灵E)、2g结晶纤维素混合之后，通过常规粉剂制备方法填充至密封包中来制备粉剂。

<3-2>片剂

将50mg前述<实施例1>中制备的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假种皮提取物或者前述<实施例2>中分离的化合物(肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7和里卡灵E)、400mg结晶纤维素、5mg硬脂酸镁混合在一起之后，通过常规片剂制备方法压片从而制得片剂。

<3-3>胶囊剂

将30mg前述<实施例1>中制备的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假种皮提取物或者前述<实施例2>中分离的化合物(肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7和里卡灵E)、100mg乳清蛋白、400mg结晶纤维素、6mg硬脂酸镁混合之后，通过常规胶囊剂制备方法填充明胶胶囊从而制得胶囊剂。

<3-4>注射剂

通过常规注射剂制备方法，将活性成分溶解于注射用蒸馏水中，并将pH调整为约7.5，之后，将100mg前述<实施例1>中制备的肉豆蔻提取物、肉豆蔻假种皮提取物或者前述<实施例2>中分离的化合物(肉豆蔻木酚素、奥斯贝木酚素7和里卡灵E)、注射用蒸馏水、pH调节剂混合在一起，装入2ml容量的安瓿中并灭菌从而制备成注射剂。

<适用例>

按照以下方式检测通过前述<剂型例1-1>至<剂型例1-18>制备的营养化妆水、软化化妆水、营养润肤霜、按摩膏、面膜和凝露对色素沉积的抑制效果。

首先，选择20名健康的男性和女性，在其两臂的下臂部贴上在其上有排成两排、每排有六个直径为7mm的孔的铝箔，在距离手臂10cm的距离处用1000W ORIEL太阳模拟器照射60J/cm²的光量。在照射前用70％乙醇水溶液仔细洗涤照射部位。在照射后的照射部位涂抹含有美白成分的<剂型例1-1>至<剂型例1-18>，每日三次。涂抹三周后用肉眼判断色素沉积度，将前述剂型例与对照组相比，抑制色素沉积的程度以显著的效果、有效、无效三个等级评判，还对是否出现皮肤副作用进行了观察，在此之后将这些结果示于表7。

【表7】

本发明组合物的使用结果

  试验物质  显著的效果(名)  有效(名)  无效(名)  副作用  剂型例1  6  10  4  0  剂型例2  4  11  5  0  剂型例3  4  10  6  0  剂型例4  6  9  5  0  剂型例5  4  10  6  0  剂型例6  3  9  8  0  剂型例7  7  10  3  0  剂型例8  5  9  6  0  剂型例9  3  10  7  0  剂型例10  6  10  4  0  剂型例11  3  10  7  0  剂型例12  3  9  8  0  剂型例13  5  10  5  0  剂型例14  4  10  6  0  剂型例15  4  9  7  0  剂型例16  4  12  4  0  剂型例17  3  11  6  0  剂型例18  3  11  6  0

数字为人数。

正如由前述表7所记载的那样，含有本发明美白成分的皮肤美白用组合物在此20名试验者中对最少12名以上的试验者显示出美白效果。

产业上利用的可能性

选自前述化学式1至化学式3的木酚素系化合物、或者含有该化合物的肉豆蔻提取物或者肉豆蔻假种皮提取物通过抑制黑色素生成和酪氨酸酶活性从而具有卓越的美白效果，因而可用作美白用化妆品组合物、食品组合物或者药物组合物的有效成分。