人类G蛋白偶联受体和用于治疗细胞死亡相关病症的其调节物

摘要

本发明涉及鉴定候选化合物是否为G蛋白偶联受体(GPCR)的调节物的方法。在某些实施例中，所述GPCR是人类的。在某些实施例中，所述GPCR是由神经细胞或者肌细胞内源性表达。在某些实施例中，所述GPCR具有神经保护性或者肌保护性。在某些实施例中，所述GPCR是一种护脑素(Humanin)受体。本发明同时涉及使用所述GPCR的调节物的方法。一种优选的调节物是激动剂。本发明的激动剂一般用作治疗剂以预防或者治疗神经退化性疾病，所述疾病包括阿尔兹海默氏病(Alzheimer′s disease)、帕金森氏病(Parkinson′s disease)、朊毒体相关疾病、中风和运动神经元疾病，特别是周围神经病、脑淀粉样β－蛋白血管病和缺血性心脏病，包括心肌梗塞和充血性心力衰竭。

说明书

此申请案要求下列在指定日期通过美国特快专递向美国专利和商标局申请的临时申请案的优先权：2003年3月17日申请的美国临时申请案第60/455316号和2003年12月22日申请的美国临时申请案第60/532001号。上述申请案的揭示内容是以全文引用的方式并入本文中。

技术领域

本发明涉及鉴定一种候选化合物是否为G蛋白偶联受体(GPCR)的调节物的方法。在某些实施例中，该GPCR是人类的。在某些实施例中，该GPCR是由神经细胞或者肌细胞内源性表达。在某些实施例中，该GPCR具有神经保护性或者肌保护性。在某些实施例中，该GPCR是一种护脑素受体。本发明同时涉及使用所述GPCR的调节物的方法。一种优选的调节物是激动剂。本发明的激动剂一般用作治疗剂以预防或者治疗神经退化性疾病，该疾病包括阿尔兹海默氏病、帕金森氏病、朊毒体相关疾病、中风和运动神经元疾病，特别是周围神经病、脑淀粉样β-蛋白血管病和缺血性心脏病，包括心肌梗塞和充血性心力衰竭。

背景技术

A.细胞死亡相关病症

下列讨论是用以方便对本发明的理解，而非倾向于或者承认本发明的先前技术。

非正常细胞死亡是许多病理的组分，包括神经退化性疾病、脑淀粉样β-蛋白血管病(CAA)和一些心肌病。所述非正常细胞死亡可包含细胞凋亡。细胞死亡保护性药剂具有用于预防或治疗所述病理的功效。特别是，神经保护性或者肌保护性药剂具有用于预防或者治疗所述神经退化性疾病或者所述肌病的功效。

阿尔兹海默氏病是一种进行性神经退化性疾病，其特征在于一个以上认知区域的功能显著丧失，并且经常伴以行为或个性的改变(阿尔兹海默氏病；决策资源公司(Decision Resources，Inc.)；2001年11月)。三种不同基因的突变可以引起早发性家族阿尔兹海默氏病(FAD)：淀粉样前体蛋白(APP)、早老素1(PS1)和早老素2(PS2)。然而，早发性家族阿尔兹海默氏病仅占所有阿尔兹海默氏病病例的不足5％。更典型地，阿尔兹海默氏病常见于65岁或者更老的人。阿尔兹海默氏病是痴呆的最常见原因，全世界约有2千万人患有此病。人们认为淀粉样β-肽(Aβ)在阿尔兹海默氏病的病理中起主要作用。

轻度认知障碍(MCI)是认知障碍的一种病状，通常仅仅是记忆障碍，并未严重到足以显著影响职业或社会功能。然而，许多患有MCI的人已逐渐发展为阿尔兹海默氏病，其是以每年10-15％的速率发展并且在五年内增至60％。增长的证据显示，阿尔兹海默氏病病理的开始远早于严重到足以准许阿尔兹海默氏标准诊断的症状的出现。2001年，美国神经学会(AAN)出版了用于MCI检测的临床实践参数，其将增加对MCI和阿尔兹海默氏病轻度形式的认识、诊断和治疗。

帕金森氏病是一种慢性进行性神经退化性病症，在美国、日本和西欧，超过两百七十万人患有此病。帕金森病的特征在于诸如震颤、运动徐缓、肌强直、步伐紊乱和姿态不稳的运动症状。虽然研究人员已经确定黑质中的多巴胺能神经元退化是最初的病理生理学机制，但他们认为其它神经递质系统-诸如5-羟色胺能和谷氨酸能系统-也不同程度地卷入此疾病进程中。

朊毒体相关疾病包括(但不限于)牛海绵状脑病、克雅氏病(Creutzfeldt-Jakob disease)、库鲁病(kuru)、GSS综合症(Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome)和致死性家族性失眠症[Collins等人，《柳叶刀》(Lancet)(2004)3：51-61]。

中风是一种在脑中由于血管阻塞或者出血而引起的急性血流中断。几乎所有中风的90％是局部缺血的；也就是说，其是由于脑循环降到临界极限以下。在工业化国家，中风占医学相关死亡的10-12％，并且在世界范围内是第三号死因。在美国，每年中风人数的全面估计范围为500000到700000人。

运动神经元疾病的特征在于脊髓、脑干或者运动皮层的运动神经元的选择性退化。临床亚型是由主要退化位点来区别。在肌萎缩性脊髓侧索硬化症中，涉及上运动神经元、下运动神经元和脑干运动神经元。在进行性脊髓性肌萎缩症和相关综合症中，脊髓中的运动神经元首先受到影响。在进行性延髓麻痹中，最初的退化出现在脑干。在原发性侧索硬化症中，皮层神经元在隔离时受到影响。

周围神经病是一个用来描述多种病症的广义术语，通常表现为四肢疼痛或不适感觉，并且神经病是其病因。人们认为神经退化在周围神经病中起作用。这种病状常见于末期肾病和糖尿病患者。远端对称性多发性神经病(DSP)(一种影响身体两侧并且侵害末梢感觉神经的神经病)是糖尿病性神经病的最常见临床表现，并且大约占所有在糖尿病患者中观察到的神经病的80-85％。DSP影响30-40％的糖尿病1型和2型患者。糖尿病性神经病一般可损害许多不同的神经，包括坐骨神经。

脑淀粉样β-蛋白(Aβ)血管病(CAA)是阿尔兹海默氏病和相关病症的关键特征。CAA是一种脑中小血管疾病，其中淀粉样蛋白在血管壁中的沉积物可导致中风、脑出血或者痴呆。血管淀粉样沉淀导致此血管壁退化和动脉瘤形成，并且可能是10-15％的老年出血性中风的病因。

心肌梗塞是由于心肌区域的氧气供应不足而导致该区域受损或者死亡。心肌梗塞通常是由阻断冠状动脉之一(将血液和氧气携带至心肌的血管)的凝块引起。该凝块阻止血液和氧气到达此心脏区域，导致此区域中的心肌细胞死亡。

充血性心力衰竭影响将近5百万美国人，并且每年诊断出超过500000个新病例。缺血性心脏病是充血性心力衰竭的最常见原因，占所有病例的60-70％。在定义上，充血性心力衰竭是一种临床综合症，其中心脏病会减少心输出量、增加静脉压力并伴以分子异常，其引起患病心脏的进行性恶化以及未成熟心肌细胞(cardiomyocyte，cardiac muscle cell)死亡。任何未考虑会加速心肌死亡的分子进程的心力衰竭定义都忽视了此综合症的一个主要临床特征。小鼠和大鼠中的证据证明，心肌细胞死亡途径的抑制剂明显地改善心脏功能和动物存活率[Laugwiz等人，《人类基因治疗》(Hum GeneTher)(2001)12：2051-63]。

B.护脑素

下列讨论是用以方便对本发明的理解，而非倾向于或承认本发明的先前技术。

护脑素多肽起初是通过其保护神经细胞不受阿尔兹海默氏病相关毒性影响的能力而得以鉴别[Hashimoto等人，Biochem Biophys Res Commun(2001)283：460-8]。护脑素具有以下氨基酸序列：Met-Ala-Pro-Arg-Gly-Phe-Ser-Cys-Leu-Leu-Leu-Leu-Thr-Ser-Glu-Ile-Asp-Leu-Pro-Val-Lys-Arg-Arg-Ala(基因序列数据库登记号AAK50430)。据报导，一种在氨基酸位置14由甘氨酸取代丝氨酸的护脑素类似物([Gly14]-护脑素)明显比护脑素更具活性[Niikura等人，《神经科学研究杂志》(JNeurosci Res)(2002)70：380-91]。已经在一名阿尔兹海默氏病患者脑中检测到护脑素免疫反应性，但是在正常人脑中很少发现[Tajima等人，《神经科学通信》(Neurosci Lett)(2002)324：227-31]。

我们已经发现护脑素会保护神经细胞免受许多毒性损伤。其包括由三种引起FAD的突变基因以及Aβ调节的神经毒性[Hashimoto等人，《美国国家科学院期刊》(Proc Natl Acad Sci USA)(2001)98：6336-41；Niikura等人，《神经科学研究杂志》(J Neurosci Res)(2002)70：380-91]。Aβ神经毒性涉及c-Jun N-末端激酶(JNK)途径，而且护脑素是作用于JNK下游的一点[Hashimoto等人，《神经化学杂志》(J Neurochem)(2003)84：864-77]。人们也已经报导护脑素对于抗血清缺失的神经元具有保护活性[Takahashi等人，《神经报告》(Neuroreport)(2002)13：903-7]。据报导，护脑素的大鼠直向同源物对于抗兴奋毒性死亡的神经元具有保护活性[Caricasole等人，《美国实验生物学协会联合会杂志》(FASEB J)(2002)16：1331-3]。

护脑素同样显示出可从朊毒体肽诱导的凋亡中挽救皮层神经元[Sponne等人，《分子细胞神经科学》(Mol Cell Neurosci)(2004)25：95-102]。

另外，人们也已经证明护脑素会改善小鼠的学习和记忆障碍，因而证明其作为有益于预防或者治疗所述学习或者记忆障碍的药剂的功效[Mamiya &Ukai，《英国药理学杂志》(Br J Pharmacol)(2001)134：1597-9]。

最近，护脑素已显示出肌细胞保护性。护脑素会从Aβ诱导的毒性中挽救人类脑血管平滑肌细胞。

总之，上述内容说明护脑素和证明护脑素活性的化合物具有细胞死亡保护性。所述细胞死亡可包含细胞凋亡。特别是，护脑素和证明护脑素活性的化合物会保护神经细胞和肌细胞免于细胞死亡，并且具有用于预防或者治疗神经退化性疾病、脑淀粉样血管病和一些心肌病的功效。

C.G蛋白偶联受体

下列讨论是用以方便对本发明的理解，而非倾向于或承认本发明的先前技术。

虽然人体内存在多种受体类别，但是此G蛋白偶联受体(GPCR)类别表现出最大的丰富性和治疗相关性。估计在人类基因组中存在约30000-40000种基因，且估计所述基因中之大约2％可编码GPCR。

对于医药产品开发来说，GPCR代表一个重要领域：已由已知的100种GPCR中的大约20种研制出所有处方药物的大约60％。例如，在1999年，前100种商标处方药物中的下列药物与GPCR相互作用(括号中说明药物相关性治疗的原发性疾病及/或病症)：

Claritin(过敏)  Prozac(抑郁症)  Vasotec(高血压)

Paxil(抑郁症)   Zoloft(抑郁症)  Zyprexa(精神病症)

Cozaar(高血压)  Imitrex(偏头痛)  Zantac(逆流性疾病)

Propulsid(逆流性疾病)  Risperdal(精神分裂症)  Serevent(哮喘)

Pepcid(逆流性疾病)  Gaster(溃疡)  Atrovent(支气管痉挛)

Effexor(抑郁症)  Depakote(癫痫)  Cardura(前列腺肥大)

Allegra(过敏)  Lupron(前列腺癌)  Zoladex(前列腺癌)

Diprivan(知觉丧失)  BuSpar(焦虑症)  Ventolin(支气管痉挛)

Hytrin(高血压)  Wellbutrin(抑郁症)  Zyrtec(鼻炎)

Plavix(MI/中风)  Toprol-XL(高血压)  Tenormin(心绞痛)

Xalatan(青光眼)  Singulair(哮喘)  Diovan(高血压)

Harnal(前列腺肥大)(医药广告新闻(Med Ad News)1999数据)。

GPCR共享一个通用结构基元，其具有七个含有22至24种疏水氨基酸的序列，所述序列形成七个α螺旋，每一个螺旋都跨膜(每一个区段是由数字标识，即跨膜区-1(TM-1)、跨膜区(TM-2)等)。这些跨膜螺旋是由细胞膜外部(或“胞外”侧)的跨膜区-2和跨膜区-3、跨膜区-4和跨膜区-5以及跨膜区-6和跨膜区-7之间(其分别称作“胞外”区域1、2和3(EC-1、EC-2和EC-3))的氨基酸链连接。这些跨膜螺旋也是由细胞膜内部(或者“胞内”侧)的跨膜区-1和跨膜区-2、跨膜区-3和跨膜区-4以及跨膜区-5和跨膜区-6之间(其分别称作“胞内”区域1、2和3(IC-1、IC-2和IC-3))的氨基酸链连接。受体的“羧基”(“C”)末端处于细胞内的胞内空间，并且该受体的“氨基”(“N”)末端处于细胞外部的胞外空间。

一般而言，当一个配体与受体结合时(通常称作受体“活化”)，受体构象发生改变以利于其胞内区域与胞内“G蛋白”之间的偶联。据报导，GPCR与G蛋白“杂交”，即一种GPCR可与一种以上的G蛋白相互作用。(见Kenakin，T.，43《生命科学》(Life Sciences)1095(1988))。尽管存在其它G蛋白，现在已经鉴定出的G蛋白为Gq、Gs、Gi、Gz和Go。与G蛋白偶联的配体活化GPCR起始一个信号级联过程(称作“信号转导”)。在一般条件下，信号转导最终导致细胞活化或者抑制作用。虽然不希望受理论限制，但是我们认为IC-3环和受体羧基末端都与G蛋白相互作用。

另外，也存在杂交G蛋白，其似乎与磷脂酶C途径中的多种类别GPCR偶联，诸如Gα15或者Gα16[Offermanns和Simon的《生物学化学杂志》(J Biol Chem)(1995)270：15175-80]；或者存在设计为与同一途径(例如磷脂酶C)中的大量不同GPCR偶联的嵌合G蛋白[Milligan和Rees的《医药科学进展》(Trends in Pharmaceutical Sciences)(1999)20：118-24]。

与Gi偶联的GPCR会降低胞内cAMP含量。Gi样G蛋白是同样导致胞内cAMP含量降低的G蛋白。按照此标准，Go和Gz都是Gi样G蛋白。黑素细胞技术(见下文)适于鉴定与Gi偶联的GPCR，并且同样适于鉴定所述Gi偶联GPCR的调节物。

在生理条件下，GPCR存在于细胞膜中，在两种不同构象之间达到平衡：“非活性”状态和“活性”状态。处于非活性状态的受体不能和胞内信号转导途径连接以起始会导致一种生物响应的信号转导。将受体构象改变为活性状态会允许其与信号转导途径相连(通过G蛋白)，并且产生一种生物响应。

受体可以通过配体或者诸如药物的化合物而在活性状态下稳定。最近的发现(包括，但是并非排外性地限制于受体氨基酸序列的修饰)提供不同于配体或者药物的方法以增进并且稳定受体的活性状态构象。这些方法通过模拟与受体结合的配体的效应而有效地使该受体在活性状态下稳定。通过这些配体独立性方法达到的稳定称作“组成性受体活化”。

D.FPRL2

下列讨论是用以方便对本发明的理解，而非倾向于或承认本发明的先前技术。

FPRL2(基因序列数据库登记号L14061)是一种仍未证实内源性配体的GPCR。最近，合成肽WKYMVm已显示出在成熟人类树突细胞上与FPRL2结合，并且引起胞内Ca²⁺增加[Yang等人，《白血球生物学杂志》(J Leukoc Biol)(2002)72：598-607]。

FPRL2与GPCR FPRL1(基因序列数据库登记号AF054013)和FPR(基因序列数据库登记号M60627)最相似。最近，据报导护脑素使用FPRL1作为功能受体[Ying等人，《干扰素和细胞因子研究杂志》(Journal of Interferonand Cytokine Research)(2002)22(Supplement 1)：S180]。FPRL1或者FPR的内源性配体并未显示出同样是FPRL2的配体，并且实际上FPRL1或者FPR的许多内源性配体(例如脂氧素A4)已显示出并非FPRL2的配体。

发明内容

申请者出乎意料地鉴定出护脑素是FPRL2的一种选择性激动剂，并且因而提供护脑素作为FPRL2的第一种内源性配体。另外，申请者出乎意料地鉴定出FPRL2是一种护脑素选择性结合的受体。

本发明部分地涉及鉴定一种测试化合物是否为护脑素GPCR的调节物的方法，其中所述护脑素GPCR是FPRL2。本发明同样包含由所述方法鉴定的调节物以及将所述调节物用于预防或治疗细胞死亡相关病症的方法，尤其是与神经细胞或者肌细胞死亡相关的病症。

第一方面，本发明的特征在于鉴定一种候选化合物是否为护脑素GPCR的调节物的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中该受体与G蛋白偶联；该方法包含下列步骤：

(a)使该候选化合物与所述受体接触；

(b)确定受体功能性是否得到调节；

其中受体功能性的变化表示该候选化合物是护脑素GPCR的调节物。

在某些实施例中，所述GPCR是重组的。在某些实施例中，所述接触包含与宿主细胞或与表达GPCR的宿主细胞膜接触，其中所述宿主细胞包含表达载体，该载体包含编码受体的多核苷酸。

在一些实施例中，所述接触是在GPCR的已知配体存在下进行。在一些实施例中，所述的已知配体是GPCR的激动剂。在一些实施例中，所述激动剂是护脑素或者其肽类似物或衍生物。在一些实施例中，所述类似物是[Gly14]-护脑素。在某些实施例中，所述护脑素或者所述[Gly14]-护脑素的所述存在对于所述确定方法来说为约EC₅₀至约EC₇₅。举例说明且不加限制，对于[³⁵S]GTPγS结合分析中的护脑素来说，EC₅₀是约0.32μM，并且EC₇₅是约1.5μM。护脑素和[Gly14]-护脑素可在市场上购得(PeptidesInternational，Louisville，KY)。在一些实施例中，所述激动剂是化合物1(表1中的“Cmpd1”)。在某些实施例中，所述化合物1的所述存在对于所述确定方法来说为约EC₅₀至约EC₇₅。举例说明且不加限制，对于[³⁵S]GTPγS结合分析中的化合物1来说，EC₅₀是约2.8μM，并且EC₇₅是约15μM。

本发明同时涉及鉴定一种候选化合物是否为细胞死亡保护性GPCR的调节物的方法，其包含以下步骤：

(a)使该候选化合物与包含FPRL2氨基酸序列的GPCR接触，其中该受体与G蛋白偶联；和

(b)确定受体功能性是否得到调节；

其中受体功能性的变化表示该候选化合物为细胞死亡保护性GPCR的调节物。

在某些实施例中，所述GPCR是重组的。在某些实施例中，所述接触包含与宿主细胞或与表达GPCR的宿主细胞膜接触，其中所述宿主细胞包含表达载体，该载体包含编码受体的多核苷酸。

在某些实施例中，所述细胞是神经细胞并且所述GPCR具有神经保护性。在某些实施例中，所述细胞是肌细胞并且所述GPCR具有肌保护性。在一些实施例中，所述细胞不是神经细胞且不是肌细胞。在某些实施例中，所述细胞表达人类FPRL2。

在一些实施例中，所述细胞死亡包含细胞凋亡。在一些实施例中，所述细胞死亡包含Aβ诱导的细胞死亡。在一些实施例中，所述细胞死亡包含依赖INK活化的细胞死亡。在一些实施例中，所述细胞死亡包含由血清组分缺失所诱导的细胞死亡。在一些实施例中，所述细胞死亡包含兴奋毒性细胞死亡。

在一些实施例中，所述接触是在GPCR的已知配体存在下进行。在一些实施例中，所述的已知配体是GPCR的激动剂。在一些实施例中，所述激动剂是护脑素或者其肽类似物或衍生物。在一些实施例中，所述类似物是[Gly14]-护脑素。在某些实施例中，所述护脑素或者所述[Gly14]-护脑素的所述存在对于所述确定方法来说为约EC₅₀至约EC₇₅。举例说明且不加限制，对于[³⁵S]GTPγS结合分析中的护脑素来说，EC₅₀是约0.32μM，并且EC₇₅是约1.5μM。护脑素和[Gly14]-护脑素可在市场上购得(PeptidesInternational，Louisville，KY)。在一些实施例中，所述激动剂是化合物1。在某些实施例中，所述化合物1的所述存在对于所述确定方法来说为约EC₅₀至约EC₇₅。举例说明且不加限制，对于[³⁵S]GTPγS结合分析中的化合物1来说，EC₅₀是约2.8μM，并且EC₇₅是约15μM。

本发明同时涉及鉴定一种候选化合物是否为神经保护调节物的方法，其包含以下步骤：

(a)使该候选化合物与包含FPRL2氨基酸序列的GPCR接触，其中该受体与G蛋白偶联；和

(b)确定受体功能性是否得到调节；

其中受体功能性的变化表示该候选化合物为神经保护调节物。

在某些实施例中，所述GPCR是重组的。在某些实施例中，所述接触包含与宿主细胞或与表达GPCR的宿主细胞膜接触，其中所述宿主细胞包含表达载体，该载体包含编码受体的多核苷酸。

在某些实施例中，受体功能性的增加表示该候选化合物为神经保护性化合物。

在一些实施例中，所述接触是在GPCR的已知配体存在下进行。在一些实施例中，所述的已知配体是GPCR的激动剂。在一些实施例中，所述激动剂是护脑素或者其肽类似物或衍生物。在一些实施例中，所述类似物是[Gly14]-护脑素。在某些实施例中，所述护脑素或者所述[Gly14]-护脑素的所述存在对于所述确定方法来说为约EC₅₀至约EC₇₅。举例说明且不加限制，对于[³⁵S]GTPγS结合分析中的护脑素来说，EC₅₀是约0.32μM并且EC₇₅是约1.5μM。护脑素和[Gly14]-护脑素可在市场上购得(Peptides International，Louisville，KY)。在一些实施例中，所述激动剂是化合物1。在某些实施例中，所述化合物1的所述存在对于所述确定方法来说为约EC₅₀至约EC₇₅。举例说明且不加限制，对于[³⁵S]GTPγS结合分析中的化合物1来说，EC₅₀是约2.8μM并且EC₇₅是约15μM。

本发明同时涉及鉴定一种候选化合物是否为肌保护调节物的方法，其包含以下步骤：

(a)使该候选化合物与包含FPRL2氨基酸序列的GPCR接触，其中该受体与G蛋白偶联；和

(b)确定受体功能性是否得到调节；

其中受体功能性的变化表示该候选化合物为肌保护调节物。

在某些实施例中，所述GPCR是重组的。在某些实施例中，所述接触包含与宿主细胞或与表达GPCR的宿主细胞膜接触，其中所述宿主细胞表达载体，所述载体包含编码受体的多核苷酸。

在某些实施例中，受体功能性的增加表示该候选化合物为肌保护性化合物。

在一些实施例中，所述接触是在GPCR的已知配体存在下进行。在一些实施例中，所述的已知配体是GPCR的激动剂。在一些实施例中，所述激动剂是护脑素或者其肽类似物或衍生物。在一些实施例中，所述类似物是[Gly14]-护脑素。在某些实施例中，所述护脑素或者所述[Gly14]-护脑素的所述存在对于所述确定方法来说为约EC₅₀至约EC₇₅。举例说明且不加限制，对于[³⁵S]GTPγS结合分析中的护脑素来说，EC₅₀是约0.32μM并且EC₇₅是约1.5μM。护脑素和[Gly14]-护脑素可在市场上购得(Peptides International，Louisville，KY)。在一些实施例中，所述激动剂是化合物1。在某些实施例中，所述化合物1的所述存在对于所述确定方法来说为约EC₅₀至约EC₇₅。举例说明且不加限制，对于[³⁵S]GTPγS结合分析中的化合物1来说，EC₅₀是约2.8μM并且EC₇₅是约15μM。

本发明同时涉及鉴定一种候选化合物是否为护脑素GPCR的调节物的方法，其包含以下步骤：

(a)在允许表达重组护脑素GPCR的条件下培养表达护脑素GPCR的宿主细胞，所述宿主细胞已转染了包含编码所述重组护脑素GPCR的多核苷酸的表达载体，所述重组护脑素GPCR包含FPRL2氨基酸序列，其中该受体与G蛋白偶联；

(b)使步骤(a)中的表达护脑素GPCR的宿主细胞或者步骤(a)中的所述宿主细胞的膜与候选化合物接触；

(c)使对照宿主细胞或者所述对照宿主细胞的膜与步骤(b)中的候选化合物接触，其中所述对照宿主细胞不表达重组护脑素GPCR蛋白；

(d)测量与来自步骤(a)的宿主细胞和步骤(c)的对照宿主细胞的重组护脑素GPCR相互作用的候选化合物的调节效应；和

(e)比较测试化合物在宿主细胞和对照宿主细胞上的调节效应。

在某些实施例中，所述经转染宿主细胞是瞬时转染。在某些实施例中，所述宿主细胞是稳定转染。

本发明同时涉及鉴定一种候选化合物是否为护脑素GPCR的调节物的方法，其包含以下步骤：

(a)在允许表达重组护脑素GPCR的条件下培养表达护脑素GPCR的宿主细胞，所述宿主细胞已转染了包含编码所述重组护脑素GPCR的多核苷酸的表达载体，所述重组护脑素GPCR包含FPRL2氨基酸序列，其中该受体与G蛋白偶联；

(b)使步骤(a)中的表达护脑素GPCR的宿主细胞的第一个群体或者步骤(a)中的表达护脑素GPCR的细胞的所述第一个群体的膜与所述护脑素GPCR的已知配体接触；

(c)使步骤(a)中的表达护脑素GPCR的宿主细胞的第二个群体或者步骤(a)中的表达护脑素GPCR的细胞的所述第二个群体的膜与所述候选化合物和已知护脑素GPCR配体接触；

(d)使对照宿主细胞或者所述对照宿主细胞的膜与步骤(c)中的候选化合物接触，其中所述对照宿主细胞不表达重组护脑素GPCR蛋白；

(e)测量候选化合物的调节效应，所述候选化合物在来自步骤(b)、步骤(c)和步骤(d)的细胞的已知护脑素GPCR配体存在与不存在下都与重组护脑素GPCR相互作用；和

(f)比较由步骤(b)、步骤(c)和步骤(d)所确定的候选化合物的调节效应。

在一些实施例中，所述配体是该护脑素GPCR的激动剂。在一些实施例中，所述激动剂是护脑素或者其肽类似物或衍生物。在一些实施例中，所述类似物是[Gly14]-护脑素。在某些实施例中，所述护脑素或者所述[Gly14]-护脑素的所述存在为约0.1μM至1.5μM，更佳为约0.5μM至1μM。在某些实施例中，所述激动剂的所述存在对于所述确定方法来说为约EC₅₀至约EC₇₅。举例说明且不加限制，对于[³⁵S]GTPγS结合分析中的护脑素来说，EC₅₀是约0.3μM并且EC₇₅是约1.5μM。在一些实施例中，所述激动剂是化合物1。在某些实施例中，所述化合物1的所述存在对于所述确定方法来说为约EC₅₀至约EC₇₅。举例说明且不加限制，对于[³⁵S]GTPγS结合分析中的化合物1来说，EC₅₀是约2.8μM并且EC₇₅是约15μM。

在某些实施例中，所述经转染宿主细胞是瞬时转染。在某些实施例中，所述宿主细胞是稳定转染。

本发明同样涉及鉴定一种候选化合物是否为护脑素GPCR的调节物的方法，其包含以下步骤：

(a)在允许表达重组护脑素GPCR的条件下培养表达护脑素GPCR的宿主细胞，所述宿主细胞已转染了包含编码所述重组护脑素GPCR的多核苷酸的表达载体，所述重组护脑素GPCR包含FPRL2氨基酸序列，其中该受体与G蛋白偶联；

(b)使步骤(a)中的表达护脑素GPCR的宿主细胞的第一个群体或者步骤(a)中的表达护脑素GPCR的宿主细胞的所述第一个群体的膜与候选化合物接触；

(c)使步骤(a)中的表达护脑素GPCR的细胞的第二个群体或者步骤(a)中的表达护脑素GPCR的细胞的所述第二个群体的膜不与步骤(b)的候选化合物接触；

(d)使对照宿主细胞或者所述对照宿主细胞的膜与步骤(b)中的候选化合物接触，其中所述对照宿主细胞不表达重组护脑素GPCR蛋白；

(e)测量候选化合物的调节效应，所述化合物与来自步骤(b)和步骤(c)的细胞和来自步骤(d)的细胞的重组护脑素GPCR蛋白相互作用；和

(f)比较由步骤(b)和步骤(c)与由步骤(d)所确定的候选化合物的调节效应。

在某些实施例中，所述经转染宿主细胞是瞬时转染。在某些实施例中，所述经宿主细胞是稳定转染。

在一些实施例中，FPRL2氨基酸序列是SEQ ID NO：2的氨基酸序列。在一些实施例中，FPRL2氨基酸序列是SEQ ID NO：2氨基酸序列的变异体。在一些实施例中，SEQ ID NO：2氨基酸序列的所述变异体是所述氨基酸序列的等位基因变异体或者哺乳动物直向同源物。在一些实施例中，SEQ ID NO：2氨基酸序列的所述变异体是所述氨基酸序列或所述氨基酸序列的等位基因变异体或者哺乳动物直向同源物的非内源性、组成性活化突变体。在某些实施例中，所述非内源性、组成性活化突变体是SEQ ID NO：12的氨基酸序列。在某些实施例中，SEQ ID NO：2氨基酸序列的所述变异体是所述氨基酸序列或所述氨基酸序列的等位基因变异体或者哺乳动物直向同源物的生物活性片段。在某些实施例中，所述生物活性片段是SEQ ID NO：2氨基酸序列或者所述氨基酸序列的等位基因变异体或者哺乳动物直向同源物的氨基酸2-353。在某些实施例中，SEQ ID NO：2氨基酸序列的所述变异体与SEQ IDNO：2氨基酸序列具有至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或者至少约99％的一致性。在一些实施例中，SEQ ID NO：2氨基酸序列的所述变异体与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或者至少约99％的一致性。

在某些实施例中，包含FPRL2氨基酸序列的所述GPCR是包含一种或一种以上抗原决定部位标记物的融合蛋白。在某些实施例中，包含一种或一种以上抗原决定部位标记物的所述融合蛋白是SEQ ID NO：6的氨基酸序列。

在某些实施例中，所述G蛋白对百日咳毒素敏感。在某些实施例中，所述G蛋白是Gi或者Go。在某些实施例中，所述G蛋白是Gi。在某些实施例中，所述G蛋白是Go。

在某些实施例中，所述G蛋白是Gα15或者Gα16。在某些实施例中，所述G蛋白是Gα15。在某些实施例中，所述G蛋白是Gα16。

在某些实施例中，所述G蛋白是Gq。

在另外某些实施例中，所述确定或者所述比较是通过使用黑素细胞分析来进行。

在某些实施例中，所述确定或者所述比较是通过测量选自由环AMP(cAMP)、环GMP(cGMP)、肌醇三磷酸(IP₃)、二酰基甘油(DAG)和Ca²⁺组成的群组的第二信使含量来进行。在其他优选实施例中，所述第二信使是cAMP。在某些实施例中，cAMP含量有所降低。在一些实施例中，cAMP的所述测量是在包含所述GPCR的膜中完成。

在某些实施例中，所述确定或所述比较是通过CRE-报告基因分析来进行。在某些实施例中，所述报告基因是荧光素酶。在一些实施例中，所述报告基因是β-半乳糖苷酶。

在某些实施例中，所述确定或所述比较是通过测量胞内Ca²⁺来进行。在某些实施例中，胞内Ca²⁺含量有所增加。在某些实施例中，所述Ca²⁺测量是由FLIPR完成。

在某些实施例中，所述宿主细胞包含Gα15或Gα16或嵌合Gq(del)/Giα亚单位，并且所述确定或所述比较是通过测量胞内Ca²⁺来进行。在某些实施例中，所述宿主细胞包含Gα15，并且所述确定或所述比较是通过测量胞内Ca²⁺来进行。在某些实施例中，所述宿主细胞包含Gα16，并且所述确定或所述比较是通过测量胞内Ca²⁺来进行。在某些实施例中，所述宿主细胞包含嵌合Gq(del)/Giα亚单位，并且所述确定或所述比较是通过测量胞内Ca²⁺来进行。

在某些实施例中，所述确定或所述比较是通过测量胞内IP₃来进行。在某些实施例中，胞内IP₃含量有所增加。

在某些实施例中，所述宿主细胞包含Gα15或Gα16或嵌合Gq(del)/Giα亚单位，并且所述确定或所述比较是通过测量胞内IP3来进行。在某些实施例中，所述宿主细胞包含Gα15，并且所述确定或所述比较是通过测量胞内IP₃来进行。在某些实施例中，所述宿主细胞包含Gα16，并且所述确定或所述比较是通过测量胞内IP₃来进行。在某些实施例中，所述宿主细胞包含嵌合Gq(del)/Giα亚单位，并且所述确定或所述比较是通过测量胞内IP₃来进行。

在某些实施例中，所述确定或所述比较是通过测量与包含所述GPCR的膜结合的GTPγS来进行。在某些实施例中，所述GTPγS是以[³⁵S]标记。

在某些实施例中，所述方法另外包含下列步骤，即比较由该候选化合物引起的受体调节与通过使受体与该受体的已知调节物接触所引起的第二受体调节。在某些实施例中，所述的已知调节物是激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是护脑素或者其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，护脑素的所述类似物是[Gly14]-护脑素。在某些实施例中，所述激动剂是化合物1。

在第二方面，本发明的特征在于一种化合物，其中所述化合物是式(I)的二甲基八氢菲羧酸酰胺衍生物：

其中：

R₁-R₄是各自独立地选自由H、C_1-5酰基、C_1-5酰氧基、C_2-6烯基、C_1-4烷氧基、C_1-6烷基、C_1-4烷基甲酰胺、C_2-6炔基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷基磺酰胺、C_1-4烷基亚磺酰基、C_1-4烷基磺酰基、C_1-4烷硫基、C_1-4烷基脲基、氨基、C_1-6-烷氧基羰基、甲酰胺、羧基、氰基、C_3-6环烷基、C_2-6二烷基氨基、C_2-6二烷基甲酰胺、卤素、C_1-4卤代烷氧基、C_1-4卤代烷基、C_1-4卤代烷基亚磺酰基、C_1-4卤代烷基磺酰基、C_1-4卤代烷硫基、羟基、硝基和硫醇组成的群组；或其医药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。

在某些实施例中，至少一个R₁-R₄基团不是H。

在某些实施例中，当R₁、R₃和R₄都是H时，R₂不是-OAc或-OCH₃。

在某些实施例中，当R₁和R₄都是H并且R₃是-CH₃时，R₂不是-OH。

在某些实施例中，当R₁和R₄都是H并且R₂是H或Br时，R₃不是-CH(CH₃)₂。

在某些实施例中，当R₁、R₂和R₃都是H时，R₄不是-OAc。

在某些实施例中，R₁是H或卤素。在某些实施例中，R₁是H并且可由下文所示的式(Ib)代表：

其中式(Ib)中的各变量具有与本文(上文和下文)所述内容相同的含义。

在某些实施例中，R₄是H或者卤素。在某些实施例中，R₄是H并且可由下文所示的式(Id)代表：

其中式(Id)中的各变量具有与本文(上文和下文)所述内容相同的含义。在某些实施例中，本发明的化合物是式(Id)，其中R₁是H；这些化合物可由下文所示的式(If)代表：

其中式(Id)中的各变量具有与本文(上文和下文)所述内容相同的含义。

在某些实施例中，R₂是选自由H、C_1-5酰基、C_1-5酰氧基、C_2-6烯基、C_1-4烷氧基、C_1-6烷基、C_1-4烷基甲酰胺、C_1-4烷基磺酰胺、C_1-4烷基亚磺酰基、C_1-4烷基磺酰基、C_1-4烷硫基、C_2-6二烷基氨基、卤素、羟基、硝基和硫醇组成的群组。

在某些实施例中，R₂是选自由H、C_2-6炔基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷基脲基、氨基、C_1-6-烷氧基羰基、甲酰胺、羧基、氰基、C_3-6环烷基、C_2-6二烷基甲酰胺、C_1-4卤代烷氧基、C_1-4卤代烷基、C_1-4卤代烷基亚磺酰基、C_1-4卤代烷基磺酰基和C_1-4卤代烷硫基组成的群组。

在某些实施例中，R₂是H或者卤素。在一些实施例中，R₂是H。

在某些实施例中，R₃是选自由H、C_1-5酰基、C_1-5酰氧基、C_2-6烯基、C_1-4烷氧基、C_1-6烷基、C_1-4烷基甲酰胺、C_1-4烷基磺酰胺、C_1-4烷基亚磺酰基、C_1-4烷基磺酰基、C_1-4烷硫基、C_2-6二烷基氨基、卤素、羟基、硝基和硫醇组成的群组。在某些实施例中，R₃是C_1-6烷基。在某些实施例中，R₃是选自由H、C_2-6炔基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷基脲基、氨基、C_1-6-烷氧基羰基、甲酰胺、羧基、氰基、C_3-6环烷基、C_2-6二烷基甲酰胺、C_1-4卤代烷氧基、C_1-4卤代烷基、C_1-4卤代烷基亚磺酰基、C_1-4卤代烷基磺酰基和C_1-4卤代烷硫基组成的群组。

在第三方面，本发明的特征在于一种式(I)化合物：

其中：

R₁-R₄是各自独立地选自由H、C_1-5酰基、C_1-5酰氧基、C_2-6烯基、C_1-4烷氧基、C_1-6烷基、C_1-4烷基甲酰胺、C_2-6炔基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷基磺酰胺、C_1-4烷基亚磺酰基、C_1-4烷基磺酰基、C_1-4烷硫基、C_1-4烷基脲基、氨基、C_1-6-烷氧基羰基、甲酰胺、羧基、氰基、C_3-6环烷基、C_2-6二烷基氨基、C_2-6二烷基甲酰胺、卤素、C_1-4卤代烷氧基、C_1-4卤代烷基、C_1-4卤代烷基亚磺酰基、C_1-4卤代烷基磺酰基、C_1-4卤代烷硫基、羟基、硝基和硫醇组成的群组；或其医药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。

在第四方面，本发明的特征在于根据第一方面的方法所鉴定的GPCR调节物，但是该调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。本发明的特征也在于根据第一方面的方法所鉴定的GPCR调节物，但是该调节物不是肽。

本发明的特征也在于可根据第一方面的方法鉴定的GPCR调节物，但是该调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。本发明的特征也在于可根据第一方面的方法鉴定的GPCR调节物，但是该调节物不是肽。

在某些实施例中，所述调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些实施例中，所述调节物是激动剂。在某些实施例中，所述调节物是部分激动剂。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。

在某些实施例中，所述调节物优选是激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述激动剂是根据第三方面的化合物。

在一些实施例中，所述调节物是EC₅₀小于100μM、小于10μM或者小于1μM的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值的激动剂。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是一种激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM 到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是一种激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在一些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在一些实施例中，所述调节物可调节护脑素GPCR。

在一些实施例中，所述调节物具有细胞死亡保护性。

在一些实施例中，所述调节物具有神经保护性。

在一些实施例中，所述调节物具有肌保护性。

在一些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在一些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在第五方面，本发明的特征在于一种制备医药学或生理学上可接受的组合物的方法，其包含将载剂与护脑素GPCR的调节物混合，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，该调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，该调节物不是肽。在某些实施例中，该调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些实施例中，该调节物是激动剂。在某些实施例中，该调节物是部分激动剂。在某些实施例中，该调节物是反向激动剂。在某些实施例中，该调节物是拮抗剂。在某些实施例中，该调节物优选激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述激动剂是根据第三方面的化合物。

本发明的特征也在于一种制备医药学或生理学上可接受的组合物的方法，其包含：鉴定护脑素GPCR的调节物，其中所述受体包含FPRL2氨基酸序列；并且随后将载剂与该调节物混合，其中该调节物可由根据第一方面的方法来鉴定。在某些实施例中，由根据第一方面的方法来鉴定该调节物。在某些实施例中，该调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，该调节物不是肽。在某些实施例中，该调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些实施例中，该调节物是激动剂。在某些实施例中，该调节物是部分激动剂。在某些实施例中，该调节物是反向激动剂。在某些实施例中，该调节物是拮抗剂。在某些实施例中，该调节物优选是激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述激动剂是根据第三方面的化合物。

在某些实施例中，所述组合物是药物。在某些实施例中，所述组合物是生理学上可接受的组合物。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在一些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在一些实施例中，所述调节物可调节护脑素GPCR。

在一些实施例中，所述调节物具有细胞死亡保护性。

在一些实施例中，所述调节物具有神经保护性。

在一些实施例中，所述调节物具有肌保护性。

在一些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在一些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在第六方面，本发明的特征在于一种调节护脑素GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，该方法包含使该受体与该受体的调节物接触。在某些实施例中，该调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，该调节物不是肽。在某些实施例中，该调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些实施例中，该调节物是激动剂。在某些实施例中，该调节物是部分激动剂。在某些实施例中，该调节物是反向激动剂。在某些实施例中，该调节物是拮抗剂。在某些实施例中，该调节物优选是激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述激动剂是根据第三方面的化合物。

本发明的特征也在于一种调节护脑素GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，该方法包含使该受体与该受体的调节物接触，其中该调节物可由第一方面的方法来鉴定。在某些实施例中，该调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，该调节物不是肽。在某些实施例中，该调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些实施例中，该调节物是激动剂。在某些实施例中，该调节物是部分激动剂。在某些实施例中，该调节物是反向激动剂。在某些实施例中，该调节物是拮抗剂。在某些实施例中，该调节物优选激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述激动剂是根据第三方面的化合物。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在一些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在一些实施例中，所述调节物可调节护脑素GPCR。

在一些实施例中，所述调节物具有细胞死亡保护性。

在一些实施例中，所述调节物具有神经保护性。

在一些实施例中，所述调节物具有肌保护性。

在一些实施例中，所述调节物保护细胞免于死亡。

在一些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在一些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述接触包含将调节物投用到包含受体的膜。

在某些实施例中，所述接触包含将调节物投用到包含受体的细胞。

在某些实施例中，所述接触包含将调节物投用到包含受体的组织。

在某些实施例中，所述接触包含将调节物投用到包含受体的个体。在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔、小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。最佳是人类。

在某些实施例中，个体的所述投药方式是口服。

在某些实施例中，所述调节物是激动剂且所述个体需要预防或治疗细胞死亡，其中所述细胞不是神经细胞且不是肌细胞。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂且所述个体需要预防或治疗细胞死亡相关病症，其中所述细胞不是神经细胞且不是肌细胞。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂且所述个体需要保护细胞免于死亡，其中所述细胞不是神经细胞且不是肌细胞。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂且所述个体需要预防或治疗细胞增生病症，其中所述细胞不是神经细胞且不是肌细胞。

在某些实施例中，所述调节物是激动剂且所述个体需要减少神经细胞死亡。

在某些实施例中，所述调节物是激动剂且所述个体需要预防或治疗神经细胞死亡相关病症。在某些实施例中，所述神经细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)阿尔兹海默氏病；

(b)帕金森氏病；

(c)中风；

(d)运动神经元疾病；

(e)学习或记忆障碍；

(f)创伤性脑损伤；

(g)脊髓损伤；

(h)周围神经病；和

(i)朊毒体相关疾病。

在一些实施例中，阿尔兹海默氏病包含轻度认知障碍(MCI)。

运动神经元疾病包括(但不限于)肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性脊髓性肌萎缩症、进行性延髓麻痹和原发性侧索硬化症。周围神经病包括(但不限于)糖尿病性神经病和涉及坐骨神经的神经病。糖尿病性神经病包括(但不限于)远端对称性多发性神经病(DSP)。

在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是阿尔兹海默氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是帕金森氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是中风。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是运动神经元疾病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是学习或记忆障碍。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是创伤性脑损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是脊髓损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是周围神经病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是朊毒体相关疾病。

在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂且所述个体需要保护神经细胞免于死亡。

在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂且所述个体需要预防或治疗神经细胞增生病症。在某些实施例中，所述神经细胞增生病症是神经母细胞瘤。在其它实施例中，所述神经细胞增生病症是髓母细胞瘤。

在某些实施例中，所述调节物是激动剂且所述个体需要减少肌细胞死亡。

在某些实施例中，所述调节物是激动剂且所述个体需要预防或治疗肌细胞死亡相关病症。在某些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)脑淀粉样β蛋白血管病；

(b)心肌梗塞；和

(c)充血性心力衰竭。

在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是脑淀粉样β-蛋白血管病。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是心急梗塞。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是充血性心力衰竭。

在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂且所述个体需要保护肌细胞免于死亡。

在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂且所述个体需要预防或治疗肌细胞增生病症。在某些实施例中，所述肌细胞增生病症是选自由动脉粥样硬化、再狭窄和肿瘤支持性血管生成组成的群组。

在第七方面，本发明的特征在于第六方面的方法，其中体外细胞培养物包含一种或一种以上包含所述护脑素GPCR的细胞，并且其中所述细胞培养需要预防或治疗细胞死亡。

在某些实施例中，所述方法包含将有效剂量的调节物投用到包含受体的细胞。

在某些实施例中，所述调节物是激动剂。

在某些实施例中，所述一种或一种以上细胞包含一种或一种以上神经细胞。

在某些实施例中，所述一种或一种以上细胞包含一种或一种以上肌细胞。

在一些实施例中，所述一种或一种以上细胞包含一种或一种以上非神经细胞和非肌细胞。

在某些实施例中，在所述细胞培养中使用的培养基包含所述调节物。

在某些实施例中，所述调节物是作为细胞培养基的补充物来提供。

在某些实施例中，所述调节物是根据第一方面的方法来鉴定。

在某些实施例中，所述调节物是根据第二方面的化合物。

在某些实施例中，所述调节物是根据第三方面的化合物。

在某些实施例中，所述调节物是化合物1。

在某些实施例中，所述调节物是化合物1并且化合物1的所述有效剂量为约0.5μM、约1.0μM、约2.0μM、约3.0μM、约4.0μM、约5.0μM、约6.0μM、约7.0μM、约8.0μM、约9.0μM、约10.0μM、约20.0μM、约30.0μM、约40.0μM或约50μM。

在第八方面，本发明的特征在于一种调节护脑素GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中减少神经细胞死亡，该方法包含使所述受体与治疗有效剂量的受体调节物接触。

本发明的特征也在于一种调节护脑素GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中预防或治疗神经细胞死亡相关病症，该方法包含使所述受体与治疗有效剂量的受体调节物接触。在某些实施例中，所述神经细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)阿尔兹海默氏病；

(b)帕金森氏病；

(c)中风；

(d)运动神经元疾病；

(e)学习或记忆障碍；

(f)创伤性脑损伤；

(g)脊髓损伤；

(h)周围神经病；和

(i)朊毒体相关疾病。

在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是阿尔兹海默氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是帕金森氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是中风。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是运动神经元疾病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是学习或记忆障碍。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是创伤性脑损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是脊髓损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是周围神经病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是朊毒体相关疾病。

在某些实施例中，该调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，该调节物不是肽。在某些实施例中，该调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，该调节物是激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述激动剂是根据第三方面的化合物。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在一些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有神经保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在某些实施例中，所述接触将所述调节物口服投用到所述个体。

在一些实施例中，阿尔兹海默氏病包含轻度认知障碍(MCI)。

运动神经元疾病包括(但不限于)肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性脊髓性肌萎缩症、进行性延髓麻痹和原发性侧索硬化症。周围神经病包括(但不限于)糖尿病性神经病和涉及坐骨神经的神经病。糖尿病性神经病包括(但不限于)远端对称性多发性神经病(DSP)。

本发明也涉及一种调节护脑素GPCR的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中预防或治疗神经细胞增生病症，所述方法包含使治疗有效剂量的所述受体的调节物与所述受体接触。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在某些实施例中，所述神经细胞-增生病症是神经母细胞瘤。在其它实施例中，所述神经细胞增生病症是髓母细胞瘤。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔、小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。最优选人类。

在第九方面，本发明的特征在于一种调节护脑素GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中减少肌细胞死亡，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的受体调节物接触。

本发明的特征也在于一种调节护脑素GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中预防或治疗肌细胞死亡相关病症，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的受体调节物接触。在某些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)脑淀粉样β蛋白血管病；

(b)心肌梗塞；和

(c)充血性心力衰竭。

在一些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是脑淀粉样β蛋白血管病。在一些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是心肌梗塞。在一些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是充血性心力衰竭。

在某些实施例中，该调节物不是护脑素或等位基因变异体、同源物、直向同源物或其肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，该调节物不是肽。在某些实施例中，该调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，该调节物是激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述激动剂是根据第三方面的化合物。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有肌保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在某些实施例中，所述接触包含将所述调节物口服投用到所述个体。

本发明也涉及一种调节护脑素GPCR的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中预防或治疗肌细胞增生病症，所述方法包含使治疗有效剂量的该受体的调节物与所述受体接触。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在某些实施例中，所述肌细胞增生病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)动脉粥样硬化；

(b)再狭窄；和

(c)肿瘤支持性血管生成。

在一些实施例中，该肌细胞增生病症是动脉粥样硬化。在一些实施例中，该肌细胞增生病症是再狭窄。在一些实施例中，该肌细胞增生病症是肿瘤支持性血管生成。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔、小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。最优选人类。

在第十方面，本发明的特征在于一种调节护脑素GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中减少细胞死亡，其中所述细胞不是神经细胞且不是肌细胞，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的受体调节物接触。

本发明的特征也在于一种调节护脑素GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中预防或治疗细胞死亡相关病症，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的受体调节物接触。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心脏、肺、胰腺、骨和卵巢组成的群组。

在某些实施例中，该调节物不是护脑素或等位基因变异体、同源物、直向同源物或其肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，该调节物不是肽。在某些实施例中，该调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，该调节物是激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述激动剂是根据第三方面的化合物。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有细胞死亡保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在某些实施例中，所述接触包含将所述调节物口服投用到所述个体。

本发明也涉及一种调节护脑素GPCR的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中预防或治疗细胞增生病症，所述方法包含使治疗有效剂量的该受体的调节物与所述受体接触。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔、小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。最优选人类。

在第十一方面，本发明的特征在于一种减少个体中的神经细胞死亡的方法，所述个体需要所述减少，所述方法包含使治疗有效剂量的护脑素GPCR调节物与所述受体接触，所述GPCR包含FPRL2氨基酸序列。

本发明的特征也在于一种预防或治疗个体中的神经细胞死亡相关病症的方法，所述个体需要所述预防或治疗，所述方法包含使治疗有效剂量的护脑素GPCR调节物与所述受体接触，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述神经细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)阿尔兹海默氏病；

(b)帕金森氏病；

(c)中风；

(d)运动神经元疾病；

(e)学习或记忆障碍；

(f)创伤性脑损伤；

(g)脊髓损伤；

(h)周围神经病；和

(i)朊毒体相关疾病。

在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是阿尔兹海默氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是帕金森氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是中风。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是运动神经元疾病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是学习或记忆障碍。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是创伤性脑损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是脊髓损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是周围神经病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是朊毒体相关疾病。

在某些实施例中，该调节物不是护脑素或等位基因变异体、同源物、直向同源物或其肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，该调节物不是肽。在某些实施例中，该调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，该调节物是激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述激动剂是根据第三方面的化合物。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有神经保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在某些实施例中，所述接触包含将所述调节物口服投用到所述个体。

在一些实施例中，阿尔兹海默氏病包含轻度认知障碍(MCI)。

运动神经元疾病包括(但不限于)肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性脊髓性肌萎缩症、进行性延髓麻痹和原发性侧索硬化症。周围神经病包括(但不限于)糖尿病性神经病和涉及坐骨神经的神经病。糖尿病性神经病包括(但不限于)远端对称性多发性神经病(DSP)。

本发明的特征也在于一种预防或治疗个体中的神经细胞增生病症的方法，所述个体需要所述预防或治疗，所述方法包含使治疗有效剂量的护脑素GPCR调节物与所述受体接触，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在某些实施例中，所述神经细胞增生病症是神经母细胞瘤。在其它实施例中，所述神经细胞增生病症是髓母细胞瘤。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔、小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。最优选人类。

在第十二方面，本发明的特征在于一种减少个体中的肌细胞死亡的方法，所述个体需要所述减少，所述方法包含使治疗有效剂量的护脑素GPCR调节物与所述受体接触，所述GPCR包含FPRL2氨基酸序列。

本发明的特征也在于一种预防或治疗个体中的肌细胞死亡相关病症的方法，所述个体需要所述预防或治疗，所述方法包含使治疗有效剂量的护脑素GPCR调节物与所述受体接触，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)脑淀粉样β蛋白血管病；

(b)心肌梗塞；和

(c)充血性心力衰竭。

在某些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是脑淀粉样β蛋白血管病。在某些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是心肌梗塞。在某些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是充血性心力衰竭。

在某些实施例中，该调节物不是护脑素或等位基因变异体、同源物、直向同源物或其肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，该调节物不是肽。在某些实施例中，该调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，该调节物是激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述激动剂是根据第三方面的化合物。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有肌保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在某些实施例中，所述接触包含将所述调节物口服投用到所述个体。

本发明也涉及一种预防或治疗个体中的肌细胞增生病症的方法，所述个体需要所述预防或治疗，所述方法包含使治疗有效剂量的护脑素GPCR调节物与受体接触，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在某些实施例中，所述细胞增生病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)动脉粥样硬化；

(b)再狭窄；和

(c)肿瘤支持性血管生成。

在一些实施例中，该肌细胞增生病症是动脉粥样硬化。在一些实施例中，该肌细胞增生病症是再狭窄。在一些实施例中，该肌细胞增生病症是肿瘤支持性血管生成。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔、小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。最优选人类。

在第十三方面，本发明的特征在于一种减少个体中的细胞死亡的方法，所述个体需要所述减少，所述方法包含使治疗有效剂量的护脑素GPCR调节物与所述受体接触，所述GPCR包含FPRL2氨基酸序列。

本发明的特征也在于一种预防或治疗个体中的细胞死亡相关病症的方法，所述个体需要所述预防或治疗，所述方法包含使治疗有效剂量的护脑素GPCR调节物与所述受体接触，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心脏、肺、胰腺、骨和卵巢组成的群组。

在某些实施例中，该调节物不是护脑素或等位基因变异体、同源物、直向同源物或其肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，该调节物不是肽。在某些实施例中，该调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，该调节物是激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述激动剂是根据第三方面的化合物。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有细胞死亡保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在某些实施例中，所述接触包含将所述调节物口服投用到所述个体。

本发明也涉及一种预防或治疗个体中的细胞增生病症的方法，所述个体需要所述预防或治疗，所述方法包含使治疗有效剂量的护脑素GPCR调节物与受体接触，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔、小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。最优选人类。

在第十四方面，本发明的特征在于一种医药学或生理学上可接受的组合物，其包含护脑素GPCR调节物、基本上由所述调节物组成或由所述调节物组成，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或等位基因变异体、同源物、直向同源物或其肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，该调节物不是肽。在某些实施例中，该调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，该调节物是激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述激动剂是根据第三方面的化合物。

在某些实施例中，所述组合物是药物。在某些实施例中，所述组合物是生理上可接受的组合物。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有细胞死亡保护性。

在某些实施例中，所述调节物具有神经保护性。

在某些实施例中，所述调节物具有肌保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在第十五方面，本发明的特征在于一种减少神经细胞死亡的方法，其包含将所述第十四方面的医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到需要所述减少的个体。

本发明的特征也在于一种预防或治疗神经细胞死亡相关病症的方法，其包含将所述第十四方面的医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到需要所述预防或治疗的个体。在某些实施例中，所述神经细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)阿尔兹海默氏病；

(b)帕金森氏病；

(c)中风；

(d)运动神经元疾病；

(e)学习或记忆障碍；

(f)创伤性脑损伤；

(g)脊髓损伤；

(h)周围神经病；和

(i)朊毒体相关疾病。

在一些实施例中，阿尔兹海默氏病包含轻度认知障碍(MCI)。

运动神经元疾病包括(但不限于)肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性脊髓性肌萎缩症、进行性延髓麻痹和原发性侧索硬化症。周围神经病包括(但不限于)糖尿病性神经病和涉及坐骨神经的神经病。糖尿病性神经病包括(但不限于)远端对称性多发性神经病(DSP)。

在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是阿尔兹海默氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是帕金森氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是中风。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是运动神经元疾病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是学习或记忆障碍。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是创伤性脑损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是脊髓损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是周围神经病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是朊毒体相关疾病。

在某些实施例中，所述调节物是激动剂。

在某些实施例中，将治疗有效剂量的所述医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到所述个体。

在某些实施例中，所述医药学或生理学上可接受的组合物的所述提供或投用方式是口服。

本发明也涉及一种预防或治疗神经细胞增生病症的方法，其包含将所述第十四方面的医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到需要所述预防或治疗的个体。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在某些实施例中，所述神经细胞增生病症是神经母细胞瘤。在其它实施例中，所述神经细胞增生病症是髓母细胞瘤。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔、小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。最优选人类。

在第十六方面，本发明的特征在于一种减少肌细胞死亡的方法，其包含将所述第十四方面的医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到需要所述减少的个体。

本发明的特征也在于一种预防或治疗肌细胞死亡相关病症的方法，其包含所述第十四方面的医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到需要所述预防或治疗的个体。在某些实施例中，所述细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)脑淀粉样β蛋白血管病；

(b)心肌梗塞；和

(c)充血性心力衰竭。

在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是脑淀粉样β蛋白血管病。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是心肌梗塞。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是充血性心力衰竭。

在某些实施例中，所述调节物是激动剂。

在某些实施例中，将治疗有效剂量的所述医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到所述个体。

在某些实施例中，所述医药学或生理学上可接受的组合物的所述提供或投用方式是口服。

本发明也涉及一种预防或治疗肌细胞增生病症的方法，其包含将所述第十四方面的医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到需要所述预防或治疗的个体。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在某些实施例中，所述肌细胞增生病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)动脉粥样硬化；

(b)再狭窄；和

(c)肿瘤支持性血管生成。

在某些实施例中，该肌细胞增生病症是动脉粥样硬化。在某些实施例中，该肌细胞增生病症是再狭窄。在某些实施例中，该肌细胞增生病症是肿瘤支持性血管生成。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔、小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。最优选人类。

在第十七方面，本发明的特征在于一种减少细胞死亡的方法，其包含将所述第十四方面的医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到需要所述减少的个体。

本发明的特征也在于一种预防或治疗细胞死亡相关病症的方法，其包含将所述第十四方面的医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到需要所述预防或治疗的个体。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达人类FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心脏、肺、胰腺、骨和卵巢组成的群组。

在某些实施例中，将治疗有效剂量的所述医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到所述个体。

在某些实施例中，所述医药学或生理学上可接受的组合物的所述提供或投用方式是口服。

本发明也涉及一种预防或治疗细胞增生病症的方法，其包含将所述第十四方面的医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到需要所述预防或治疗的个体。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔、小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。最优选人类。

在第十八方面，本发明的特征在于一种用于通过疗法来治疗人类动物体的方法中的护脑素GPCR调节物，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或等位基因变异体、同源物、直向同源物或其肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，该调节物不是肽。在某些实施例中，该调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，该调节物是激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述激动剂是根据第三方面的化合物。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在某些实施例中，所述动物是哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔、小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。在人类或动物中，更佳是人类。

在第十九方面，本发明的特征在于一种用于通过疗法来减少人类动物体内的神经细胞死亡的方法中的护脑素GPCR调节物，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。

本发明的特征也在于一种用于通过疗法来预防或治疗人体或动物体内的神经细胞死亡相关病症的方法中的护脑素GPCR调节物，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述神经细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)阿尔兹海默氏病；

(b)帕金森氏病；

(c)中风；

(d)运动神经元疾病；

(e)学习或记忆障碍；

(f)创伤性脑损伤；

(g)脊髓损伤；

(h)周围神经病；和

(i)朊毒体相关疾病。

在一些实施例中，阿尔兹海默氏病包含轻度认知障碍(MCI)。

运动神经元疾病包括(但不限于)肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性脊髓性肌萎缩症、进行性延髓麻痹和原发性侧索硬化症。周围神经病包括(但不限于)糖尿病性神经病和涉及坐骨神经的神经病。糖尿病性神经病包括(但不限于)远端对称性多发性神经病(DSP)。

在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是阿尔兹海默氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是帕金森氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是中风。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是运动神经元疾病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是学习或记忆障碍。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是创伤性脑损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是脊髓损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是周围神经病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是朊毒体相关疾病。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或等位基因变异体、同源物、直向同源物或其肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，该调节物不是肽。在某些实施例中，该调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，该调节物是激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述激动剂是根据第三方面的化合物。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在一些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有神经保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

本发明也涉及一种用于通过疗法来预防或治疗人体或动物体内的神经细胞增生病症的方法中的护脑素GPCR调节物，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在某些实施例中，所述神经细胞增生病症是神经母细胞瘤。在某些实施例中，所述神经细胞增生病症是髓母细胞瘤。

在某些实施例中，所述动物是哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔、小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。在人类或动物中，优选人类。

在第二十方面，本发明的特征在于一种用于通过疗法来减少人类动物体内的肌细胞死亡的方法中的护脑素GPCR调节物，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。

本发明的特征也在于一种用于通过疗法来预防或治疗人体或动物体内的肌细胞死亡相关病症的方法中的护脑素GPCR调节物，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)脑淀粉样β蛋白血管病；

(b)心肌梗塞；和

(c)充血性心力衰竭。

在一些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是脑淀粉样β蛋白血管病。在一些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是心肌梗塞。在一些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是充血性心力衰竭。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或等位基因变异体、同源物、直向同源物或其肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，该调节物不是肽。在某些实施例中，该调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，该调节物是激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述激动剂是根据第三方面的化合物。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有肌保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100V的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

本发明也涉及一种用于通过疗法来预防或治疗人体或动物体内的肌细胞增生病症的方法中的护脑素GPCR调节物，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在某些实施例中，所述肌细胞增生病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)动脉粥样硬化；

(b)再狭窄；和

(c)肿瘤支持性血管生成。

在一些实施例中，所述肌细胞增生病症是动脉粥样硬化。在一些实施例中，所述肌细胞增生病症是再狭窄。在一些实施例中，所述肌细胞增生病症是肿瘤支持性血管生成。

在某些实施例中，所述动物是哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔、小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。在人类或动物中，更佳是人类。

在第二十一方面，本发明的特征在于一种用于通过疗法来减少人类动物体内的细胞死亡的方法中的护脑素GPCR调节物，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。

本发明的特征也在于一种用于通过疗法来预防或减少人体或动物体内的细胞死亡相关病症的方法中的护脑素GPCR调节物，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达人类FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心脏、肺、胰腺、骨和卵巢组成的群组。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或等位基因变异体、同源物、直向同源物或其肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，该调节物不是肽。在某些实施例中，该调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，该调节物是激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述激动剂是根据第三方面的化合物。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有细胞死亡保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

本发明也涉及一种用于通过疗法来预防或治疗人体或动物体内的细胞增生病症的方法中的护脑素GPCR调节物，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。

在某些实施例中，所述动物是哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔、小鼠、大鼠、非人类灵长类动物或人类。在人类或动物中，更佳是人类。

在第二十二方面，本发明的特征在于一种使用护脑素GPCR调节物来制备用于减少神经细胞死亡的医药品的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。

本发明的特征也在于一种使用护脑素GPCR调节物来制备用于预防或治疗神经细胞死亡相关病症的医药品的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述神经细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)阿尔兹海默氏病；

(b)帕金森氏病；

(c)中风；

(d)运动神经元疾病；

(e)学习或记忆障碍；

(f)创伤性脑损伤；

(g)脊髓损伤；

(h)周围神经病；和

(i)朊毒体相关疾病。

在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是阿尔兹海默氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是帕金森氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是中风。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是运动神经元疾病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是学习或记忆障碍。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是创伤性脑损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是脊髓损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是周围神经病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是朊毒体相关疾病。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或等位基因变异体、同源物、直向同源物或其肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，该调节物不是肽。在某些实施例中，该调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，该调节物是激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述激动剂是根据第三方面的化合物。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有神经保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在一些实施例中，阿尔兹海默氏病包含轻度认知障碍(MCI)。

运动神经元疾病包括(但不限于)肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性脊髓性肌萎缩症、进行性延髓麻痹和原发性侧索硬化症。周围神经病包括(但不限于)糖尿病性神经病和涉及坐骨神经的神经病。糖尿病性神经病包括(但不限于)远端对称性多发性神经病(DSP)。

本发明的特征也在于一种使用护脑素GPCR调节物来制备用于预防或治疗神经细胞增生病症的医药品的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在某些实施例中，所述神经细胞增生病症是神经母细胞瘤。在某些实施例中，所述神经细胞增生病症是髓母细胞瘤。

在第二十三方面，本发明的特征在于一种使用护脑素GPCR调节物来制备用于减少肌细胞死亡的医药品的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。

本发明的特征也在于一种使用护脑素GPCR调节物来制备用于预防或治疗肌细胞死亡相关病症的医药品的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)脑淀粉样β蛋白血管病；

(b)心肌梗塞；和

(c)充血性心力衰竭。

在一些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是脑淀粉样β蛋白血管病。在一些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是心肌梗塞。在一些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是充血性心力衰竭。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或等位基因变异体、同源物、直向同源物或其肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，该调节物不是肽。在某些实施例中，该调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，该调节物是激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述激动剂是根据第三方面的化合物。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在一些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有肌保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

本发明也涉及一种使用护脑素GPCR调节物来制备用于预防或治疗肌细胞增生病症的医药品的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在某些实施例中，所述肌细胞增生病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)动脉粥样硬化；

(b)再狭窄；和

(c)肿瘤支持性血管生成。

在一些实施例中，所述肌细胞增生病症是动脉粥样硬化。在一些实施例中，所述肌细胞增生病症是再狭窄。在一些实施例中，所述肌细胞增生病症是肿瘤支持性血管生成。

在第二十四方面，本发明的特征在于一种使用护脑素GPCR调节物来制备用于减少细胞死亡的医药品的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。

本发明的特征也在于一种使用护脑素GPCR调节物来制备用于预防或治疗细胞死亡相关病症的医药品的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达人类FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心脏、肺、胰腺、骨和卵巢组成的群组。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或等位基因变异体、同源物、直向同源物或其肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，该调节物不是肽。在某些实施例中，该调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，该调节物是激动剂。在某些实施例中，所述激动剂是根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述激动剂是根据第三方面的化合物。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有细胞死亡保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

本发明也涉及一种使用护脑素GPCR调节物来制备用于预防或治疗细胞增生病症的医药品的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。

在第二十五方面，本发明的特征在于一种调节人类GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中减少神经细胞死亡，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的受体调节物接触。在某些实施例中，所述方法包含执行根据第一方面的方法以由此鉴定调节物。

本发明的特征也在于一种调节护脑素GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中预防或治疗神经细胞死亡相关病症，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的受体调节物接触。在某些实施例中，所述方法包含执行根据第一方面的方法以由此鉴定调节物。在某些实施例中，所述神经细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)阿尔兹海默氏病；

(b)帕金森氏病；

(c)中风；

(d)运动神经元疾病；

(e)学习或记忆障碍；

(f)创伤性脑损伤；

(g)脊髓损伤；

(h)周围神经病；和

(i)朊毒体相关疾病。

在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是阿尔兹海默氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是帕金森氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是中风。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是运动神经元疾病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是学习或记忆障碍。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是创伤性脑损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是脊髓损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是周围神经病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是朊毒体相关疾病。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，所述调节物不是肽。在某些实施例中，所述调节物是根据第四方面。在某些实施例中，所述调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，所述调节物是激动剂。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有神经保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在某些实施例中，所述接触包含将所述调节物口服投用到所述个体。

在一些实施例中，阿尔兹海默氏病包含轻度认知障碍(MCI)。

运动神经元疾病包括(但不限于)：肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性脊髓性肌萎缩症、进行性延髓麻痹和原发性侧索硬化症。周围神经病包括(但不限于)：糖尿病性神经病和涉及坐骨神经的神经病。糖尿病性神经病包括(但不限于)：远端对称性多发性神经病(DSP)。

本发明同样涉及一种调节护脑素GPCR的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中预防或治疗神经细胞增生病症，所述方法包含使治疗有效剂量的所述受体的调节物与所述受体接触。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在某些实施例中，所述神经细胞增生病症是神经母细胞瘤。在其它实施例中，所述神经细胞增生病症是髓母细胞瘤。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第二十六方面，本发明的特征在于一种调节护脑素GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中减少肌细胞死亡，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的受体调节物接触。在某些实施例中，所述方法包含执行根据第一方面的方法以由此鉴定调节物。

本发明的特征也在于一种调节护脑素GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中预防或治疗肌细胞死亡相关病症，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的受体调节物接触。在某些实施例中，所述方法包含执行根据第一方面的方法以由此鉴定调节物。在某些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)淀粉样β-蛋白血管病；

(b)心肌梗塞；和

(c)充血性心力衰竭。

在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是淀粉样β-蛋白血管病。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是心肌梗塞。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是充血性心力衰竭。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，所述调节物不是肽。在某些实施例中，所述调节物是根据第四方面。在某些实施例中，所述调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，所述调节物是激动剂。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有肌保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在某些实施例中，所述接触包含将所述调节物口服投用到所述个体。

本发明同样涉及一种调节护脑素GPCR的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中预防或治疗肌细胞增生病症，所述方法包含使治疗有效剂量的所述受体的调节物与所述受体接触。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在某些实施例中，该肌细胞增生病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)动脉粥样硬化；

(b)再狭窄；和

(c)肿瘤支持性血管生成。

在一些实施例中，该肌细胞增生病症是动脉粥样硬化。在一些实施例中，该肌细胞增生病症是再狭窄。在一些实施例中，该肌细胞增生病症是肿瘤支持性血管生成。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第二十七方面，本发明的特征在于一种调节护脑素GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中减少细胞死亡，其中所述细胞不是神经细胞且不是肌细胞，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的受体调节物接触。在某些实施例中，所述方法包含执行根据第一方面的方法以由此鉴定调节物。

本发明的特征也在于一种调节护脑素GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中预防或治疗细胞死亡相关病症，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的受体调节物接触。在某些实施例中，所述方法包含执行根据第一方面的方法以由此鉴定调节物。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达人类FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由下列各物组成的群组：坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心、肺、胰脏、骨和卵巢。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，所述调节物不是肽。在某些实施例中，所述调节物是根据第四方面。在某些实施例中，所述调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，所述调节物是激动剂。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有细胞死亡保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在某些实施例中，所述接触包含将所述调节物口服投用到所述个体。

本发明同样涉及一种调节护脑素GPCR的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中预防或治疗细胞增生病症，所述方法包含使治疗有效剂量的所述受体的调节物与所述受体接触。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第二十八方面，本发明的特征在于一种减少个体中的神经细胞死亡的方法，所述个体需要所述减少，所述方法包含使治疗有效剂量的护脑素GPCR调节物与所述受体接触，所述GPCR包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述方法包含执行根据第一方面的方法以由此鉴定调节物。

本发明的特征也在于一种预防或治疗个体中的神经细胞死亡相关病症的方法，所述个体需要所述预防或治疗，所述方法包含使治疗有效剂量的护脑素GPCR调节物与所述受体接触，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述方法包含执行根据第一方面的方法以由此鉴定调节物。在某些实施例中，所述神经细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)阿尔兹海默氏病；

(b)帕金森氏病；

(c)中风；

(d)运动神经元疾病；

(e)学习或记忆障碍；

(f)创伤性脑损伤；

(g)脊髓损伤；

(h)周围神经病；和

(i)朊毒体相关疾病。

在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是阿尔兹海默氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是帕金森氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是中风。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是运动神经元疾病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是学习或记忆障碍。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是创伤性脑损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是脊髓损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是周围神经病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是朊毒体相关疾病。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，所述调节物不是肽。在某些实施例中，所述调节物是根据第四方面。在某些实施例中，所述调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，所述调节物是激动剂。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有神经保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在某些实施例中，所述接触包含将所述调节物口服投用到所述个体。

在一些实施例中，阿尔兹海默氏病包含轻度认知障碍(MCI)。

运动神经元疾病包括(但不限于)：肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性脊髓性肌萎缩症、进行性延髓麻痹和原发性侧索硬化症。周围神经病包括(但不限于)：糖尿病性神经病和涉及坐骨神经的神经病。糖尿病性神经病包括(但不限于)：远端对称性多发性神经病(DSP)。

本发明的特征也在于一种预防或治疗个体中的神经细胞增生病症的方法，所述个体需要所述预防或治疗，所述方法包含使治疗有效剂量的护脑素GPCR调节物与所述受体接触，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在某些实施例中，所述神经细胞增生病症是神经母细胞瘤。在其它实施例中，所述神经细胞增生病症是髓母细胞瘤。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第二十九方面，本发明的特征在于一种减少个体中的肌细胞死亡的方法，所述个体需要所述减少，所述方法包含使治疗有效剂量的护脑素GPCR调节物与所述受体接触，所述GPCR包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述方法包含执行根据第一方面的方法以由此鉴定调节物。

本发明的特征也在于一种预防或治疗个体中的肌细胞死亡相关病症的方法，所述个体需要所述预防或治疗，所述方法包含使治疗有效剂量的护脑素GPCR调节物与所述受体接触，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述方法包含执行根据第一方面的方法以由此鉴定调节物。在某些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)脑淀粉样β-蛋白血管病；

(b)心肌梗塞；和

(c)充血性心力衰竭。

在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是脑淀粉样β-蛋白血管病。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是心肌梗塞。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是充血性心力衰竭。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，所述调节物不是肽。在某些实施例中，所述调节物是根据第四方面。在某些实施例中，所述调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，所述调节物是激动剂。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有肌保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在某些实施例中，所述接触包含将所述调节物口服投用到所述个体。

本发明同样涉及一种预防或治疗个体中的肌细胞增生病症的方法，所述个体需要所述预防或治疗，所述方法包含使治疗有效剂量的护脑素GPCR调节物与受体接触，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在一些实施例中，该肌细胞增生病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)动脉粥样硬化；

(b)再狭窄；和

(c)肿瘤支持性血管生成。

在一些实施例中，该肌细胞增生病症是动脉粥样硬化。在一些实施例中，该肌细胞增生病症是再狭窄。在一些实施例中，该肌细胞增生病症是肿瘤支持性血管生成。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第三十方面，本发明的特征在于一种减少个体中的细胞死亡的方法，所述个体需要所述减少，所述方法包含使治疗有效剂量的护脑素GPCR调节物与所述受体接触，所述GPCR包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述方法包含执行根据第一方面的方法以由此鉴定调节物。

本发明的特征也在于一种预防或治疗个体中的细胞死亡相关病症的方法，所述个体需要所述预防或治疗，所述方法包含使治疗有效剂量的护脑素GPCR调节物与所述受体接触，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述方法包含执行根据第一方面的方法以由此鉴定调节物。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达人类FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由下列各物组成的群组：坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心、肺、胰脏、骨和卵巢。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，所述调节物不是肽。在某些实施例中，所述调节物是根据第四方面。在某些实施例中，所述调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，所述调节物是激动剂。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有细胞死亡保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在某些实施例中，所述接触包含将所述调节物投用到所述个体。

本发明同样涉及一种预防或治疗个体中的细胞增生病症的方法，所述个体需要所述预防或治疗，所述方法包含使治疗有效剂量的护脑素GPCR调节物与受体接触，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第三十一方面，本发明的特征在于一种医药学或生理学上可接受的组合物，其包含护脑素GPCR调节物、基本上由所述调节物组成或由所述调节物组成，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物可通过执行根据第一方面的方法来鉴定。在某些实施例中，所述调节物是通过执行根据第一方面的方法来鉴定。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，所述调节物不是肽。在某些实施例中，所述调节物是根据第四方面。在某些实施例中，所述调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，所述调节物是激动剂。

在某些实施例中，所述组合物是药物。在某些实施例中，所述组合物是生理学上可接受的组合物。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有细胞死亡保护性。

在某些实施例中，所述调节物具有神经保护性。

在某些实施例中，所述调节物具有肌保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在第三十二方面，本发明的特征在于一种减少神经细胞死亡的方法，其包含将所述第三十一方面的医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到需要所述减少的个体。

本发明的特征也在于一种预防或治疗神经细胞死亡相关病症的方法，其包含将所述第三十一方面的医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到需要所述预防或治疗的个体。在某些实施例中，所述神经细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)阿尔兹海默氏病；

(b)帕金森氏病；

(c)中风；

(d)运动神经元疾病；

(e)学习或记忆障碍；

(f)创伤性脑损伤；

(g)脊髓损伤；

(h)周围神经病；和

(i)朊毒体相关疾病。

在一些实施例中，阿尔兹海默氏病包含轻度认知障碍(MCI)。

运动神经元疾病包括(但不限于)：肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性脊髓性肌萎缩症、进行性延髓麻痹和原发性侧索硬化症。周围神经病包括(但不限于)：糖尿病性神经病和涉及坐骨神经的神经病。糖尿病性神经病包括(但不限于)：远端对称性多发性神经病(DSP)。

在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是阿尔兹海默氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是帕金森氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是中风。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是运动神经元疾病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是学习或记忆障碍。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是创伤性脑损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是脊髓损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是周围神经病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是朊毒体相关疾病。

在某些实施例中，所述调节物是激动剂。

在某些实施例中，将治疗有效剂量的所述医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到所述个体。

在某些实施例中，所述医药学或生理学上可接受的组合物的所述提供或投药方式是口服。

本发明同样涉及一种预防或治疗神经细胞增生病症的方法，其包含将所述第三十一方面的医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到需要所述预防或治疗的个体。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在某些实施例中，所述神经细胞增生病症是神经母细胞瘤。在其它实施例中，所述神经细胞增生病症是髓母细胞瘤。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第三十三方面，本发明的特征在于一种减少肌细胞死亡的方法，其包含将所述第三十一方面的医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到需要所述减少的个体。

本发明的特征也在于一种预防或治疗肌细胞死亡相关病症的方法，其包含将所述第三十一方面的医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到需要所述预防或治疗的个体。在某些实施例中，所述细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)脑淀粉样β-蛋白血管病；

(b)心肌梗塞；和

(c)充血性心力衰竭。

在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是脑淀粉样β-蛋白血管病。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是心肌梗塞。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是充血性心力衰竭。

在某些实施例中，所述调节物是激动剂。

在某些实施例中，将治疗有效剂量的所述医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到所述个体。

在某些实施例中，所述医药学或生理学上可接受的组合物的所述提供或投药方式是口服。

本发明同样涉及一种预防或治疗肌细胞增生病症的方法，其包含将所述第三十一方面的医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到需要所述预防或治疗的个体。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在某些实施例中，该肌细胞增生病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)动脉粥样硬化；

(b)再狭窄；和

(c)肿瘤支持性血管生成。

在一些实施例中，该肌细胞增生病症是动脉粥样硬化。在一些实施例中，该肌细胞增生病症是再狭窄。在一些实施例中，该肌细胞增生病症是肿瘤支持性血管生成。在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第三十四方面，本发明的特征在于一种减少细胞死亡的方法，其包含将所述第三十一方面的医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到需要所述减少的个体。

本发明的特征也在于一种预防或治疗细胞死亡相关病症的方法，其包含将所述第三十一方面的医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到需要所述预防或治疗的个体。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达人类FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心脏、肺、胰腺、骨和卵巢组成的群组。

在某些实施例中，将治疗有效剂量的所述医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到所述个体。

在某些实施例中，所述医药学或生理学上可接受的组合物的所述提供或投药方式是口服。

本发明同样涉及一种预防或治疗细胞增生病症的方法，其包含将所述第三十一方面的医药学或生理学上可接受的组合物提供给或投用到需要所述预防或治疗的个体。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第三十五方面，本发明的特征在于一种用于通过疗法来治疗人体或动物体的方法中的护脑素GPCR调节物，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物可通过执行根据第一方面的方法来鉴定。在某些实施例中，所述调节物是通过执行根据第一方面的方法来鉴定。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，所述调节物不是肽。在某些实施例中，所述调节物是根据第四方面。在某些实施例中，所述调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，所述调节物是激动剂。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于100μM、小于10μM或小于1μM。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μMEC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在某些实施例中，所述动物是哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人类灵长目动物。在人类或动物中，更优选人类。

在第三十六方面，本发明的特征在于一种用于通过疗法来减少人体或动物体内的神经细胞死亡的方法中的护脑素GPCR调节物，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物可通过执行根据第一方面的方法来鉴定。在某些实施例中，所述调节物是通过执行根据第一方面的方法来鉴定。

本发明的特征也在于一种用于通过疗法来预防或治疗人体或动物体内的神经细胞死亡相关病症的方法中的护脑素GPCR调节物，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物可通过执行根据第一方面的方法来鉴定。在某些实施例中，所述调节物是通过执行根据第一方面的方法来鉴定。在某些实施例中，所述神经细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)阿尔兹海默氏病；

(b)帕金森氏病；

(c)中风；

(d)运动神经元疾病；

(e)学习或记忆障碍；

(f)创伤性脑损伤；

(g)脊髓损伤；

(h)周围神经病；和

(i)朊毒体相关疾病。

在一些实施例中，阿尔兹海默氏病包含轻度认知障碍(MCI)。

运动神经元疾病包括(但不限于)：肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性脊髓性肌萎缩症、进行性延髓麻痹和原发性侧索硬化症。周围神经病包括(但不限于)：糖尿病性神经病和涉及坐骨神经的神经病。糖尿病性神经病包括(但不限于)：远端对称性多发性神经病(DSP)。

在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是阿尔兹海默氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是帕金森氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是中风。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是运动神经元疾病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是学习或记忆障碍。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是创伤性脑损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是脊髓损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是周围神经病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是朊毒体相关疾病。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，所述调节物不是肽。在某些实施例中，所述调节物是根据第四方面。在某些实施例中，所述调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，所述调节物是激动剂。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有神经保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

本发明同样涉及一种用于通过疗法来预防或治疗人体或动物体内的神经细胞增生病症的方法中的护脑素GPCR调节物，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在某些实施例中，所述神经细胞增生病症是神经母细胞瘤。在其它实施例中，所述神经细胞增生病症是髓母细胞瘤。

在某些实施例中，所述动物是哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人类灵长目动物。在人类或动物中，更优选人类。

在第三十七方面，本发明的特征在于一种用于通过疗法来减少人体或动物体内的肌细胞死亡的方法中的护脑素GPCR调节物，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物可通过执行根据第一方面的方法来鉴定。在某些实施例中，所述调节物是通过执行根据第一方面的方法来鉴定。

本发明的特征也在于一种用于通过疗法来预防或治疗人体或动物体内的肌细胞死亡相关病症的方法中的护脑素GPCR调节物，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物可通过执行根据第一方面的方法来鉴定。在某些实施例中，所述调节物是通过执行根据第一方面的方法来鉴定。在某些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)淀粉样β-蛋白血管病；

(b)心肌梗塞；和

(c)充血性心力衰竭。

在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是脑淀粉样β-蛋白血管病。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是心肌梗塞。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是充血性心力衰竭。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，所述调节物不是肽。在某些实施例中，所述调节物是根据第四方面。在某些实施例中，所述调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，所述调节物是激动剂。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有肌保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

本发明同样涉及一种用于通过疗法来预防或治疗人体或动物体内的肌细胞增生病症的方法中的护脑素GPCR受体，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在某些实施例中，该肌细胞增生病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)动脉粥样硬化；

(b)再狭窄；和

(c)肿瘤支持性血管生成。

在一些实施例中，该肌细胞增生病症是动脉粥样硬化。在一些实施例中，该肌细胞增生病症是再狭窄。在一些实施例中，该肌细胞增生病症是肿瘤支持性血管生成。

在某些实施例中，所述动物是哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人类灵长目动物。在人类或动物中，更优选人类。

在第三十八方面，本发明的特征在于一种用于通过疗法来减少人体或动物体内的细胞死亡的方法中的护脑素GPCR调节物，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物可通过执行根据第一方面的方法来鉴定。在某些实施例中，所述调节物是通过执行根据第一方面的方法来鉴定。

本发明的特征也在于一种用于通过疗法来预防或治疗人体或动物体内的细胞死亡相关病症的方法中的护脑素GPCR调节物，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物可通过执行根据第一方面的方法来鉴定。在某些实施例中，所述调节物是通过执行根据第一方面的方法来鉴定。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达人类FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心脏、肺、胰腺、骨和卵巢组成的群组。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，所述调节物不是肽。在某些实施例中，所述调节物是根据第四方面。在某些实施例中，所述调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，所述调节物是激动剂。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有细胞死亡保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60M、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

本发明同样涉及一种用于通过疗法来预防或治疗人体或动物体内的细胞增生病症的方法中的护脑素GPCR调节物，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。

在某些实施例中，所述动物是哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人类灵长目动物。在人类或动物中，更优选人类。

在第三十九方面，本发明的特征在于一种使用护脑素GPCR调节物来制备用于减少神经细胞死亡的医药品的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述方法包含执行根据第一方面的方法以由此鉴定调节物。

本发明的特征也在于一种使用护脑素GPCR调节物来制备用于预防或治疗神经细胞死亡相关病症的医药品的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述方法包含执行根据第一方面的方法以由此鉴定调节物。在某些实施例中，所述神经细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)阿尔兹海默氏病；

(b)帕金森氏病；

(c)中风；

(d)运动神经元疾病；

(e)学习或记忆障碍；

(d)创伤性脑损伤；

(e)脊髓损伤；

(f)周围神经病；和

(g)朊毒体相关疾病。

在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是阿尔兹海默氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是帕金森氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是中风。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是运动神经元疾病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是学习或记忆障碍。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是创伤性脑损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是脊髓损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是周围神经病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是朊毒体相关疾病。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，所述调节物不是肽。在某些实施例中，所述调节物是根据第四方面。在某些实施例中，所述调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，所述调节物是激动剂。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有神经保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100M、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

在一些实施例中，阿尔兹海默氏病包含轻度认知障碍(MCI)。

运动神经元疾病包括(但不限于)：肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性脊髓性肌萎缩症、进行性延髓麻痹和原发性侧索硬化症。周围神经病包括(但不限于)：糖尿病性神经病和涉及坐骨神经的神经病。糖尿病性神经病包括(但不限于)：远端对称性多发性神经病(DSP)。

本发明的特征也在于一种使用护脑素GPCR调节物来制备用于预防或治疗神经细胞增生病症的医药品的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在某些实施例中，所述神经细胞增生病症是神经母细胞瘤。在其它实施例中，所述神经细胞增生病症是髓母细胞瘤。

在第四十方面，本发明的特征在于一种使用护脑素GPCR调节物来制备用于减少肌细胞死亡的医药品的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述方法包含执行根据第一方面的方法以由此鉴定调节物。

本发明的特征也在于一种使用护脑素GPCR调节物来制备用于预防或治疗肌细胞死亡相关病症的医药品的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述方法包含执行根据第一方面的方法以由此鉴定调节物。在某些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)脑淀粉样β-蛋白血管病；

(b)心肌梗塞；和

(c)充血性心力衰竭。

在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是脑淀粉样β-蛋白血管病。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是心肌梗塞。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是充血性心力衰竭。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，所述调节物不是肽。在某些实施例中，所述调节物是根据第四方面。在某些实施例中，所述调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，所述调节物是激动剂。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有肌保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

本发明同样涉及一种使用护脑素GPCR调节物来制备用于预防或治疗肌细胞增生病症的医药品的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。在某些实施例中，该肌细胞增生病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)动脉粥样硬化；

(b)再狭窄；和

(c)肿瘤支持性血管生成。

在一些实施例中，该肌细胞增生病症是动脉粥样硬化。在一些实施例中，该肌细胞增生病症是再狭窄。在一些实施例中，该肌细胞增生病症是肿瘤支持性血管生成。

在第四十一方面，本发明的特征在于一种使用护脑素GPCR调节物来制备用于减少细胞死亡的医药品的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述方法包含执行根据第一方面的方法以由此鉴定调节物。

本发明的特征也在于一种使用护脑素GPCR调节物来制备用于预防或治疗细胞死亡相关病症的医药品的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述方法包含执行根据第一方面的方法以由此鉴定调节物。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达人类FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心脏、肺、胰腺、骨和卵巢组成的群组。

在某些实施例中，所述调节物不是护脑素或其等位基因变异体、同源物、直向同源物或肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。在某些实施例中，所述调节物不是肽。在某些实施例中，所述调节物是根据第四方面。在某些实施例中，所述调节物是选自由下列各物组成的群组：激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂。在某些优选实施例中，所述调节物是激动剂。

在某些实施例中，所述调节物对GPCR具有选择性。

在某些实施例中，所述调节物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用调节物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述调节物具有细胞死亡保护性。

在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其具有小于100μM、小于10μM或小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到100μM区间的值。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其EC₅₀小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述EC₅₀是获自选自由下列各方法组成的群组的分析：由来自经转染CHO细胞的膜来执行的GTPγS结合分析，所述CHO细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；使用经转染黑素细胞来执行的黑素细胞分析，所述黑素细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽；和使用经转染HEK293细胞来执行的全细胞cAMP分析，所述HEK293细胞表达具有SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：6氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于100μM、小于10μM或者小于1μM的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于100μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于90μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于80μM的EC₅₀的反向激动剂或者拮抗剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于70μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于60μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于50μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于40μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于30μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于20μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于10μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于9μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于8μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于7μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于6μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于5μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于4μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于3μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于2μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是在所述分析中具有小于1μM的EC₅₀的激动剂。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的EC₅₀。在一些实施例中，所述调节物是激动剂，其在所述分析中具有小于选自1μM到10μM区间的值的EC₅₀。

在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其在选自由GTPγS结合分析、黑素细胞分析和全细胞cAMP分析组成的群组的分析中具有小于选自1μM到100μM区间的值的IC₅₀，其中所述分析是使用表达具有SEQ ID NO：12氨基酸序列的重组护脑素GPCR多肽的转染细胞来完成。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于100μM、小于90μM、小于80μM、小于70μM、小于60μM、小于50μM、小于40μM、小于30μM、小于20μM或小于10μM。在一些实施例中，所述调节物是反向激动剂或拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于选自1μM到10μM区间的值。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂或者拮抗剂，其IC₅₀在所述分析中小于10μM、小于9μM、小于8μM、小于7μM、小于6μM、小于5μM、小于4μM、小于3μM、小于2μM或小于1μM。

本发明同样涉及一种使用护脑素GPCR调节物来制备用于预防或治疗细胞增生病症的医药品的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述调节物是反向激动剂。在某些实施例中，所述调节物是拮抗剂。

在四十二方面，本发明的特征在于一种制备医药学或生理学上可接受的组合物的方法，其包含将根据第二方面的化合物与载剂混合。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在第四十三方面，本发明的特征在于一种制备医药学或生理学上可接受的组合物的方法，其包含将根据第三方面的化合物与载剂混合。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在第四十四方面，本发明的特征在于一种医药学或生理学上可接受的组合物，其包含根据第二方面的化合物、基本上由该化合物组成或由该化合物组成。

在某些实施例中，所述组合物是药物。在某些实施例中，所述组合物是生理学上可接受的组合物。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在第四十五方面，本发明的特征在于一种医药学或生理学上可接受的组合物，其包含根据第三方面的化合物、基本上由该化合物组成或由该化合物组成。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在第四十六方面，本发明的特征在于一种调节护脑素GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中减少神经细胞死亡，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的根据第二或第三方面的化合物接触或与治疗有效剂量的根据第四十四或第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第二方面化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第三方面化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十四方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第四十七方面，本发明的特征在于一种调节护脑素GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中预防或治疗神经细胞死亡相关病症，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的根据第二或第三方面的化合物接触或与治疗有效剂量的根据第四十四或第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第二方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第三方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十四方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述神经细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)阿尔兹海默氏病；

(b)帕金森氏病；

(c)中风；

(d)运动神经元疾病；

(e)学习或记忆障碍；

(f)创伤性脑损伤；

(g)脊髓损伤；

(h)周围神经病；和

(i)朊毒体相关疾病。

在一些实施例中，阿尔兹海默氏病包含轻度认知障碍(MCI)。

运动神经元疾病包括(但不限于)：肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性脊髓性肌萎缩症、进行性延髓麻痹和原发性侧索硬化症。周围神经病包括(但不限于)：糖尿病性神经病和涉及坐骨神经的神经病。糖尿病性神经病包括(但不限于)：远端对称性多发性神经病(DSP)。

在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是阿尔兹海默氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是帕金森氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是中风。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是运动神经元疾病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是学习或记忆障碍。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是创伤性脑损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是脊髓损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是周围神经病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是朊毒体相关疾病。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在四十八方面，本发明的特征在于一种调节护脑素GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中减少肌细胞死亡，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的根据第二或第三方面的化合物接触或与治疗有效剂量的根据第四十四或第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第二方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第三方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十四方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第四十九方面，本发明的特征在于一种调节护脑素GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中预防或治疗肌细胞死亡相关病症，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的根据第二或第三方面的化合物接触或与治疗有效剂量的根据第四十四或第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第二方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第三方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十四方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)脑淀粉样β-蛋白血管病；

(b)心肌梗塞；和

(c)充血性心力衰竭。

在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是脑淀粉样β-蛋白血管病。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是心肌梗塞。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是充血性心力衰竭。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第五十方面，本发明的特征在于一种调节护脑素GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中减少细胞死亡，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的根据第二或第三方面的化合物接触或与治疗有效剂量的根据第四十四或第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第二方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第三方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十四方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达人类FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心脏、肺、胰腺、骨和卵巢组成的群组。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第五十一方面，本发明的特征在于一种调节护脑素GPCR活性的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，其中所述调节是用于在需要所述调节的个体中预防或治疗细胞死亡相关病症，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的根据第二或第三方面的化合物接触或与治疗有效剂量的根据第四十四或第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第二方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第三方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十四方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达人类FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心脏、肺、胰腺、骨和卵巢组成的群组。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第五十二方面，本发明的特征在于一种减少个体中的神经细胞死亡的方法，所述个体需要所述减少，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的根据第二或第三方面的化合物接触或与治疗有效剂量的根据第四十四或第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物(具有护脑素GPCR)接触，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第二方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第三方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十四方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第五十三方面，本发明的特征在于一种预防或治疗个体中的神经细胞死亡相关病症的方法，所述个体需要所述减少，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的根据第二或第三方面的化合物接触或与治疗有效剂量的根据第四十四或第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物(具有护脑素GPCR)接触，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第二方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第三方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十四方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述神经细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)阿尔兹海默氏病；

(b)帕金森氏病；

(c)中风；

(d)运动神经元疾病；

(e)学习或记忆障碍；

(f)创伤性脑损伤；

(g)脊髓损伤；

(h)周围神经病；和

(i)朊毒体相关疾病。

在一些实施例中，阿尔兹海默氏病包含轻度认知障碍(MCI)。

运动神经元疾病包括(但不限于)：肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性脊髓性肌萎缩症、进行性延髓麻痹和原发性侧索硬化症。周围神经病包括(但不限于)：糖尿病性神经病和涉及坐骨神经的神经病。糖尿病性神经病包括(但不限于)：远端对称性多发性神经病(DSP)。

在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是阿尔兹海默氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是帕金森氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是中风。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是运动神经元疾病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是学习或记忆障碍。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是创伤性脑损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是脊髓损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是周围神经病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是朊毒体相关疾病。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第五十四方面，本发明的特征在于一种减少个体中的肌细胞死亡的方法，所述个体需要所述减少，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的根据第二或第三方面的化合物接触或与治疗有效剂量的根据第四十四或第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物(具有护脑素GPCR)接触，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第二方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第三方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十四方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第五十五方面，本发明的特征在于一种预防或治疗个体中的肌细胞死亡相关病症的方法，所述个体需要所述减少，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的根据第二或第三方面的化合物接触或与治疗有效剂量的根据第四十四或第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物(具有护脑素GPCR)接触，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第二方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第三方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十四方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)脑淀粉样β-蛋白血管病；

(b)心肌梗塞；和

(c)充血性心力衰竭。

在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是脑淀粉样β-蛋白血管病。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是心肌梗塞。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是充血性心力衰竭。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第五十六方面，本发明的特征在于一种减少个体中的细胞死亡的方法，所述个体需要所述减少，所述方法包含使所述受体与治疗有效剂量的根据第二或第三方面的化合物接触或与治疗有效剂量的根据第四十四或第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物(具有护脑素GPCR)接触，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第二方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第三方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十四方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达人类FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心脏、肺、胰腺、骨和卵巢组成的群组。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第五十七方面，本发明的特征在于一种预防或治疗个体中的细胞死亡相关病症的方法，所述个体需要所述减少，所述方法包含所述受体与治疗有效剂量的根据第二或第三方面的化合物接触或与治疗有效剂量的根据第四十四或第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物(具有护脑素GPCR)接触，所述受体包含FPRL2氨基酸序列。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第二方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第三方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十四方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与治疗有效剂量的根据第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达人类FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心脏、肺、胰腺、骨和卵巢组成的群组。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第五十八方面，本发明的特征在于一种减少神经细胞死亡的方法，其包含将根据第二或第三方面的化合物或治疗有效剂量的根据第四十四或第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物提供给或投用到需要所述减少的个体。在某些实施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根据第三方面的化合物。在某些实施例中，所述提供或投用医药学或生理学上可接受的组合物是提供或投用根据第四十四方面的医药学或生理学上可接受组合物。在某些实施例中，所述提供或投用医药学或生理学上可接受的组合物是提供或投用根据第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第五十九方面，本发明的特征在于一种治疗神经细胞死亡相关病症的方法，其包含将根据第二或第三方面的化合物或治疗有效剂量的根据第四十四或第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物提供给或投用到需要所述治疗或预防的个体。在某些实施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根据第三方面的化合物。在某些实施例中，所述提供或投用医药学或生理学上可接受的组合物是提供或投用根据第四十四方面的医药学或生理学上可接受的组合物。在某些实施例中，所述提供或投用医药学或生理学上可接受的组合物是提供或投用根据第四十五方面的医药学或生理学上可接受的组合物。在某些实施例中，所述神经细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)阿尔兹海默氏病；

(b)帕金森氏病；

(c)中风；

(d)运动神经元疾病；

(e)学习或记忆障碍；

(f)创伤性脑损伤；

(g)脊髓损伤；

(h)周围神经病；和

(i)朊毒体相关疾病。

在一些实施例中，阿尔兹海默氏病包含轻度认知障碍(MCI)。

运动神经元疾病包括(但不限于)：肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性脊髓性肌萎缩症、进行性延髓麻痹和原发性侧索硬化症。周围神经病包括(但不限于)：糖尿病性神经病和涉及坐骨神经的神经病。糖尿病性神经病包括(但不限于)：远端对称性多发性神经病(DSP)。

在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是阿尔兹海默氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是帕金森氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是中风。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是运动神经元疾病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是学习或记忆障碍。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是创伤性脑损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是脊髓损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是周围神经病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是朊毒体相关疾病。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第六十方面，本发明的特征在于一种减少肌细胞死亡的方法，其包含将根据第二或第三方面的化合物或治疗有效剂量的根据第四十四或第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物提供给或投用到需要所述减少的个体。在某些实施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根据第三方面的化合物。在某些实施例中，所述提供或投用医药学或生理学上可接受的组合物是提供或投用根据第四十四方面的医药学或生理学上可接受的组合物。在某些实施例中，所述提供或投用医药学或生理学上可接受的组合物是提供或投用根据第四十五方面的医药学或生理学上可接受的组合物。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第六十一方面，本发明的特征在于一种治疗肌细胞死亡相关病症的方法，其包含将根据第二或第三方面的化合物或治疗有效剂量的根据第四十四或第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物提供给或投用到需要所述治疗或预防的个体。在某些实施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根据第三方面的化合物。在某些实施例中，所述提供或投用医药学或生理学上可接受的组合物是提供或投用根据第四十四方面的医药学或生理学上可接受的组合物。在某些实施例中，所述提供或投用医药学或生理学上可接受的组合物是提供或投用根据第四十五方面的医药学或生理学上可接受的组合物。在某些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)脑淀粉样β-蛋白血管病；

(b)心肌梗塞；和

(c)充血性心力衰竭。

在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是脑淀粉样β-蛋白血管病。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是心肌梗塞。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是充血性心力衰竭。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第六十二方面，本发明的特征在于一种减少细胞死亡的方法，其包含将根据第二或第三方面的化合物或治疗有效剂量的根据第四十四或第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物提供给或投用到需要所述减少的个体。在某些实施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根据第三方面的化合物。在某些实施例中，所述提供或投用医药学或生理学上可接受的组合物是提供或投用根据第四十四方面的医药学或生理学上可接受的组合物。在某些实施例中，所述提供或投用医药学或生理学上可接受的组合物是提供或投用根据第四十五方面的医药学或生理学上可接受的组合物。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达人类FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心脏、肺、胰腺、骨和卵巢组成的群组。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第六十三方面，本发明的特征在于一种治疗细胞死亡相关病症的方法，其包含将根据第二或第三方面的化合物或治疗有效剂量的根据第四十四或第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物提供给或投用到需要所述治疗或预防的个体。在某些实施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根据第二方面的化合物。在某些实施例中，所述提供或投用化合物是提供或投用根据第三方面的化合物。在某些实施例中，所述提供或投用医药学或生理学上可接受的组合物是提供或投用根据第四十四方面的医药学或生理学上可接受的组合物。在某些实施例中，所述提供或投用医药学或生理学上可接受的组合物是提供或投用根据第四十五方面的医药学或生理学上可接受的组合物。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达人类FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心脏、肺、胰腺、骨和卵巢组成的群组。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述个体是哺乳动物。在某些实施例中，所述个体是非人类哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。在某些实施例中，所述哺乳动物是小鼠、大鼠、非人类灵长目动物或人类。最优选人类。

在第六十四方面，本发明的特征在于一种根据第二或第三方面的化合物，其是用于通过疗法来治疗人体或动物体的方法中。在某些实施例中，所述化合物是根据第二方面。在某些实施例中，所述化合物是根据第三方面。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述动物是哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人类灵长目动物。在人类或动物中，更优选人类。

在第六十五方面，本发明的特征在于一种根据第二或第三方面的化合物，其是用于通过疗法来减少人体或动物体内的神经细胞死亡的方法中。在某些实施例中，所述化合物是根据第二方面。在某些实施例中，所述化合物是根据第三方面。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述动物是哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人类灵长目动物。在人类或动物中，更优选人类。

在第六十六方面，本发明的特征在于一种根据第二或第三方面的化合物，其是用于通过疗法来预防或治疗人体或动物体内的神经细胞死亡相关病症的方法中。在某些实施例中，所述化合物是根据第二方面。在某些实施例中，所述化合物是根据第三方面。在某些实施例中，所述神经细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)阿尔兹海默氏病；

(b)帕金森氏病；

(c)中风；

(d)运动神经元疾病；

(e)学习或记忆障碍；

(f)创伤性脑损伤；

(g)脊髓损伤；

(h)周围神经病；和

(i)朊毒体相关疾病。

在一些实施例中，阿尔兹海默氏病包含轻度认知障碍(MCI)。

运动神经元疾病包括(但不限于)：肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性脊髓性肌萎缩症、进行性延髓麻痹和原发性侧索硬化症。周围神经病包括(但不限于)：糖尿病性神经病和涉及坐骨神经的神经病。糖尿病性神经病包括(但不限于)：远端对称性多发性神经病(DSP)。

在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是阿尔兹海默氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是帕金森氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是中风。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是运动神经元疾病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是学习或记忆障碍。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是创伤性脑损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是脊髓损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是周围神经病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是朊毒体相关疾病。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述动物是哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人类灵长目动物。在人类或动物中，更优选人类。

在第六十七方面，本发明的特征在于一种根据第二或第三方面的化合物，其是用于通过疗法来预防或治疗人体或动物体内的肌细胞死亡的方法中。在某些实施例中，所述化合物是根据第二方面。在某些实施例中，所述化合物是根据第三方面。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述动物是哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人类灵长目动物。在人类或动物中，更优选人类。

在第六十八方面，本发明的特征在于一种根据第二或第三方面的化合物，其是用于通过疗法来预防或治疗人体或动物体内的肌细胞死亡相关病症的方法中。在某些实施例中，所述化合物是根据第二方面。在某些实施例中，所述化合物是根据第三方面。在某些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)脑淀粉样β-蛋白血管病；

(b)心肌梗塞；和

(c)充血性心力衰竭。

在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是脑淀粉样β-蛋白血管病。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是心肌梗塞。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是充血性心力衰竭。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述动物是哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人类灵长目动物。在人类或动物中，更优选人类。

在第六十九方面，本发明的特征在于一种根据第二或第三方面的化合物，其是用于通过疗法来预防或治疗人体或动物体内的细胞死亡的方法中。在某些实施例中，所述化合物是根据第二方面。在某些实施例中，所述化合物是根据第三方面。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达人类FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心脏、肺、胰腺、骨和卵巢组成的群组。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述动物是哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人类灵长目动物。在人类或动物中，更优选人类。

在第七十方面，本发明的特征在于一种根据第二或第三方面的化合物，其是用于通过疗法来预防或治疗人体或动物体内的细胞死亡相关病症的方法中。在某些实施例中，所述化合物是根据第二方面。在某些实施例中，所述化合物是根据第三方面。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达人类FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心脏、肺、胰腺、骨和卵巢组成的群组。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在某些实施例中，所述动物是哺乳动物。在某些实施例中，所述哺乳动物是马、牛、羊、猪、猫、狗、兔子、小鼠、大鼠或非人类灵长目动物。在人类或动物中，更优选人类。

在第七十一方面，本发明的特征在于一种使用根据第二或第三方面的化合物来制备用于减少神经细胞死亡的医药品的方法。在某些实施例中，所述化合物是根据第二方面。在某些实施例中，所述化合物是根据第三方面。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在第七十二方面，本发明的特征在于一种使用根据第二或第三方面的化合物来制备用于预防或治疗神经细胞死亡相关病症的医药品的方法。在某些实施例中，所述化合物是根据第二方面。在某些实施例中，所述化合物是根据第三方面。在某些实施例中，所述神经细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)阿尔兹海默氏病；

(b)帕金森氏病；

(c)中风；

(d)运动神经元疾病；

(e)学习或记忆障碍；

(f)创伤性脑损伤；

(g)脊髓损伤；

(h)周围神经病；和

(i)朊毒体相关疾病。

在一些实施例中，阿尔兹海默氏病包含轻度认知障碍(MCI)。

运动神经元疾病包括(但不限于)：肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性脊髓性肌萎缩症、进行性延髓麻痹和原发性侧索硬化症。周围神经病包括(但不限于)：糖尿病性神经病和涉及坐骨神经的神经病。糖尿病性神经病包括(但不限于)：远端对称性多发性神经病(DSP)。

在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是阿尔兹海默氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是帕金森氏病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是中风。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是运动神经元疾病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是学习或记忆障碍。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是创伤性脑损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是脊髓损伤。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是周围神经病。在一些实施例中，该神经细胞死亡相关病症是朊毒体相关疾病。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在第七十三方面，本发明的特征在于一种使用根据第二或第三方面的化合物来制备用于减少肌细胞死亡的医药品的方法。在某些实施例中，所述化合物是根据第二方面。在某些实施例中，所述化合物是根据第三方面。

某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在第七十四方面，本发明的特征在于一种使用根据第二或第三方面的化合物来制备用于预防或治疗肌细胞死亡相关病症的医药品的方法。在某些实施例中，所述化合物是根据第二方面。在某些实施例中，所述化合物是根据第三方面。在某些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：

(a)脑淀粉样β-蛋白血管病；

(b)心肌梗塞；和

(c)充血性心力衰竭。

在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是脑淀粉样β-蛋白血管病。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是心肌梗塞。在一些实施例中，该肌细胞死亡相关病症是充血性心力衰竭。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在第七十五方面，本发明的特征在于一种使用根据第二或第三方面的化合物来制备用于减少细胞死亡的医药品的方法。在某些实施例中，所述化合物是根据第二方面。在某些实施例中，所述化合物是根据第三方面。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达人类FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心脏、肺、胰腺、骨和卵巢组成的群组。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在第七十六方面，本发明的特征在于一种使用根据第二或第三方面的化合物来制备用于预防或治疗细胞死亡相关病症的医药品的方法。在某些实施例中，所述化合物是根据第二方面。在某些实施例中所述化合物是根据第三方面。在某些实施例中，所述细胞属于或起源于表达人类FPRL2的组织。在某些实施例中，所述表达人类FPRL2的组织是选自由坐骨神经、前海马回、全脑、海马回、黑质、脾、心脏、肺、胰腺、骨和卵巢组成的群组。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在第七十七方面，本发明的特征在于一种调节护脑素GPCR的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，所述方法包含使所述受体与根据第二或第三方面的化合物接触或与根据第四十四或第四十五方面的医药学或生理学上可接受组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与根据第二方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与根据第三方面的化合物接触。在某些实施例中，所述接触是与根据第四十四方面的医药学或生理学上可接受的组合物接触。在某些实施例中，所述接触是与根据第四十五方面的医药学或生理学上可接受的组合物接触。

在某些实施例中，所述化合物具有口服生物可利用性。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于腹膜内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少1％、至少5％、至少10％、至少15％、至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。在一些实施例中，所述口服生物利用度相对于静脉内投药为至少20％、至少25％、至少30％、至少35％、至少40％或至少45％。

在某些实施例中，所述口服生物可利用化合物另外能够通过血脑屏障。

在第七十八方面，本发明的特征在于一种鉴定候选化合物是否与护脑素GPCR结合的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，所述方法包含下列步骤：

(a)在该候选化合物存在或不存在下，使受体与可经检测标记的已知GPCR配体接触；

(b)确定所述经标记配体的结合在该候选化合物存在时是否受到抑制；

其中，所述抑制作用表示该候选化合物与护脑素GPCR结合。

在某些实施例中，该护脑素GPCR是重组的。在某些实施例中，所述接触包含与宿主细胞或与表达GPCR的宿主细胞膜接触，其中所述宿主细胞包含表达载体，该载体包含编码该受体的多核苷酸。

本发明同样涉及一种确定候选化合物是否与护脑素GPCR结合的方法，其包含下列步骤：

(a)在允许表达重组护脑素GPCR的条件下培养表达护脑素GPCR的宿主细胞，所述宿主细胞是经包含编码所述重组护脑素GPCR的多核苷酸的表达载体转染，该GPCR包含FPRL2氨基酸序列；

(b)将步骤(a)中表达护脑素GPCR的细胞的第一个群体暴露于所述护脑素GPCR的已知可检测标记配体中；

(c)将步骤(a)中表达护脑素GPCR的细胞的第二个群体暴露于该化合物和步骤(b)中的所述护脑素GPCR的已知可检测标记配体中；

(d)确定步骤(b)和步骤(c)中所述表达护脑素GPCR的细胞的已知经标记配体的结合；和

(e)将该已知经标记配体与所述护脑素GPCR的结合和其与步骤(b)和步骤(c)中表达护脑素GPCR的细胞的结合相比；

其中所述护脑素GPCR的已知经标记配体的结合在该化合物存在时受到抑制表示该化合物与护脑素GPCR结合。

本发明同样涉及一种确定候选化合物是否与护脑素GPCR结合的方法，其包含下列步骤：

(a)在允许表达重组护脑素GPCR的条件下培养表达护脑素GPCR的宿主细胞，所述宿主细胞是经包含编码所述重组护脑素GPCR的多核苷酸的表达载体转染，该GPCR包含FPRL2氨基酸序列；

(b)由步骤(a)中表达护脑素GPCR的细胞来制膜；

(c)将步骤(b)中的第一个膜制剂群体暴露于步骤(b)中所述护脑素GPCR的已知可检测标记配体中；

(d)将步骤(b)中的第二个膜制剂体暴露于该候选化合物和所述护脑素GPCR的已知经标记配体中；

(e)确定所述护脑素GPCR的已知经标记配体与步骤(c)和步骤(b)中的膜制剂的结合；和

(f)将所述护脑素GPCR的已知经标记配体的结合与步骤(c)和步骤(d)中的膜制剂的结合相比；

其中所述护脑素GPCR的已知经标记配体的结合在该化合物存在时受到抑制表示该化合物与护脑素GPCR结合。

在一些实施例中，该FPRL2氨基酸序列是SEQ ID NO：2氨基酸序列。在一些实施例中，该FPRL2氨基酸序列是SEQ ID NO：2氨基酸序列的变异体。在一些实施例中，该SEQ ID NO：2氨基酸序列的所述变异体是所述氨基酸序列的等位基因变异体或哺乳动物直向同源物。在一些实施例中，该SEQ ID NO：2氨基酸序列的所述变异体是所述氨基酸序列或所述氨基酸序列的等位基因变异体或哺乳动物直向同源物的非内源性、组成性活化突变体。在某些实施例中，所述非内源性、组成性活化突变体是SEQ ID NO：12氨基酸序列。在某些实施例中，SEQ ID NO：2氨基酸序列的所述变异体是所述氨基酸序列或所述氨基酸序列的等位基因变异体或哺乳动物直向同源物的生物活性片段。在某些实施例中，所述生物活性片段是SEQ ID NO：2氨基酸序列或所述氨基酸序列的等位基因变异体或哺乳动物直向同源物的氨基酸2-353。在某些实施例中，SEQ ID NO：2氨基酸序列的所述变异体与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的一致性。在某些实施例中，SEQ ID NO：2氨基酸序列的所述变异体与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的一致性。

在某些实施例中，所述膜制剂是通过用Brinkman Polytron使细胞匀化来制备。在某些实施例中，通过用每一个所述匀浆器(polytron)进行匀化来制备所述膜制剂，历经3个持续时间为10-20秒的脉冲。

在某些实施例中，所述候选化合物并非护脑素变异体或等位基因变异体、同系物、直系同源类似物或其肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。

在某些实施例中，所述候选化合物不是肽。

在某些实施例中，所述已知配体是护脑素。

在某些实施例中，所述已知配体是护脑素的肽类似物或衍生物。

在某些实施例中，所述已知配体是[Gly14]-护脑素。

在某些实施例中，所述已知配体是化合物1。

在某些实施例中，所述已知配体是根据第二方面的化合物。

在某些实施例中，所述已知配体是根据第三方面的化合物。

在某些实施例中，所述已知配体是根据第四方面的化合物。

在某些实施例中，所述已知配体是对GPCR具有特异性的抗体或该抗体的衍生物。在一些实施例中，所述抗体衍生物是抗体的抗原结合片段。

在某些实施例中，所述标记物是选自由下列各物组成的群组：

(a)放射性同位素；

(b)酶；和

(c)荧光团。

在某些实施例中，所述标记物是放射性同位素。在某些实施例中，所述标记物是选自由³H、¹⁴C、³⁵S和¹²⁵I组成的群组。

可使用此项技术中已知的技术来化学合成经放射性标记的护脑素或[Gly14]-护脑素[例如，见克雷顿(Creighton)，1983年，《(蛋白质》(Proteins).纽约，纽约：W.H.Freeman和公司；和Hunkapiller等人，《(自然》(Nature)(1984年)310：105-11]。通过经放射性标记的氨基酸来引入放射性同位素。在某些实施例中，所述经放射性标记的氨基酸是³H-精氨酸或¹⁴C-精氨酸。

在某些实施例中，所述经放射性标记的护脑素或[Gly14]-护脑素的所述存在为约0.1μM到约1.5μM。

可使用此项技术中已知的技术(下文)来放射性标记化合物1。在某些实施例中，使用³H或¹⁴C来放射性标记化合物1。

在某些实施例中，所述经放射性标记的化合物1的所述存在为约1μM到约15μM。

在其它实施例中，所述方法另外包含下列步骤：将候选化合物对第一种已知经标记配体的结合作用的抑制水平与已知结合到GPCR的第二种配体对所述第一种已知经标记配体的结合作用的第二个抑制水平相比。

在第七十九方面，本发明的特征在于一种检测与护脑素GPCR相结合的配体的方法，所述受体包含FPRL2氨基酸序列，所述方法包含下列步骤：

使测试配体与宿主细胞或与表达所述受体的宿主细胞膜在允许所述受体与所述测试配体之间存在相互作用的条件下接触；并检测与所述受体结合的配体。

在一些实施例中，该FPRL2氨基酸序列是SEQ ID NO：2氨基酸序列。在一些实施例中，该FPRL2氨基酸序列是SEQ ID NO：2氨基酸序列的变异体。在一些实施例中，该SEQ ID NO：2氨基酸序列的所述变异体是所述氨基酸序列的等位基因变异体或哺乳动物直向同源物。在一些实施例中，该SEQ ID NO：2氨基酸序列的所述变异体是所述氨基酸序列或所述氨基酸序列的等位基因变异体或哺乳动物直向同源物的非内源性、组成性活化突变体。在某些实施例中，所述非内源性、组成性活化突变体是SEQ ID NO：12氨基酸序列。在某些实施例中，SEQ ID NO：2氨基酸序列的所述变异体是所述氨基酸序列或所述氨基酸序列的等位基因变异体或哺乳动物直向同源物的生物活性片段。在某些实施例中，所述生物活性片段是SEQ ID NO：2氨基酸序列或所述氨基酸序列的等位基因变异体或哺乳动物直向同源物的氨基酸2-353。在某些实施例中，SEQ ID NO：2氨基酸序列的所述变异体与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的一致性。在某些实施例中，SEQ ID NO：2氨基酸序列的所述变异体与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的一致性。

在某些实施例中，该护脑素GPCR是重组的。在某些实施例中，所述接触包含与宿主细胞或与表达GPCR的宿主细胞膜接触，其中所述宿主细胞包含表达载体，该载体包含编码该受体的多核苷酸。

在某些实施例中，所述候选化合物并非护脑素变异体或等位基因变异体、同系物、直向同源物或其肽类似物或衍生物，或者不是肽WKYMVm或其肽类似物或衍生物。在某些实施例中，该调节物并非抗体或其衍生物。

在某些实施例中，所述测试配体不是肽。

在某些实施例中，所述膜制剂是通过用Brinkman Polytron使细胞匀化来制备。在某些实施例中，通过用每一个所述匀浆器进行匀化来制备所述膜制剂，历经3个持续时间为10-20秒的脉冲。

在某些实施例中，所述测试配体已经标记。在某些实施例中，所述标记物是放射性同位素。在某些实施例中，所述标记物是选自由³H、¹⁴C、³⁵S和¹²⁵I组成的群组。

申请者保留将任何一种或一种以上候选化合物排除在本发明任一实施例以外的权利。申请者同样保留将任何一种或一种以上调节物排除在本发明任一实施例以外的权利，所述调节物包括(但不限于)：护脑素或其任何肽类似物或衍生物。申请者另外保留将任何多核苷酸或多肽排除在本发明任一实施例以外的权利。此外，申请者保留将任何细胞死亡相关病症或任何神经细胞死亡或肌细胞死亡病症排除在本发明任一实施例以外的权利。

在本申请案全文中，列举各种公开案、专利和经公布专利申请案。在本申请案中引用的此等公开案、专利和经公布专利申请案的揭示内容是以全文引用的方式并入本揭示内容中。公开案、专利或经公布专利申请案的申请者在本文中所提供的引文并未被所述公开案、专利或经公布专利申请案的申请者视为现有技术。

在所属领域的技术人员的权限内对所揭示发明作出的修改和扩充涵盖在上述揭示内容和从属权利要求范围内。

附图说明

图1举例说明且不加限制，图1描述“目标受体”的候选化合物的初始筛选结果，该“目标受体”是内源性、组成性活性Gs偶联GPCR的Gsα融合蛋白构建物。“化合物A”的结果提供于孔A2中。“化合物B”的结果提供于孔G9中。(见实例7)

图2使用一种定制的高密度寡核苷酸微阵列在人类组织样品上进行微阵列分析，所述微阵列含有监控FPRL2表达的探针。该柱状图提供对每一种绘图的组织重复测量FPRL2所得到的相对表达水平(平均差)和标准误差。相对表达水平在纵轴上说明。组织身份显示在水平轴上并且是(从左到右)：脑桥，上部；脑下垂体，女性；坐骨神经；嗅球；脑下垂体，男性；胼胝体、前海马回、扣带回、腹侧被盖区(VTA)；神经祖细胞；脑桥，下部；脊髓；下丘脑，前；星形细胞，休眠；小脑；前脑皮层，上BM9；扁桃体；全脑；海马回；苍白球；延髓；黑质；背根神经节；丘脑；星形细胞，活化；胎儿脑；纹状体；单核细胞，附着；Jurkat；U87；脾；单核细胞，CD14+；胸腺，树突状细胞前体；嗜中性粒细胞；嗜曙红细胞；自然杀伤细胞；骨髓；血小板；红系祖细胞；淋巴结；T细胞，CD4+休眠；AC133+；T细胞，CD4+活化；T细胞，CD8+休眠；B细胞，CD19+；T细胞，CD8+活化；CD34+祖细胞；软骨；脂肪细胞，原代；脂肪；前成脂肪细胞，经培养；脂肪细胞，经培养；心包；主动脉内皮细胞；主动脉；HUVEC；主动脉平滑肌细胞，增殖；主动脉平滑肌细胞，可收缩；心脏；直肠；小肠；结肠；胃；肝脏；胎儿肝脏；肺；骨骼肌；食道；胰腺；膀胱；甲状腺；气管；肾；唾液腺；皮肤；肾上腺；胰岛；间质干细胞；骨；子宫；前列腺；睾丸；卵巢；胎盘；子宫颈；乳腺；前列腺上皮。

观察该图，说明人类FPRL2的表达涵盖脑、周围神经和心脏。脑中的表达涵盖前海马回、海马回和黑质。周围神经中的表达涵盖坐骨神经。显著FPRL2表达也在(例如)脾、肺、胰腺、骨和卵巢中观察到。(见实例9)。

图3对人类FPRL2(图A)、FPRL1(图B)和FPR(图C)进行护脑素和[Gly14]护脑素促进的[³⁵S]GTPγS结合分析。在FPRL2中，护脑素的EC₅₀是约320nm，而[Gly14]护脑素的EC₅₀则为约72nm。这些值比在FPRL1中的相应值(其对于护脑素约为9.24μM，而对于[Gly14]护脑素约为1.5μM)低一个以上的数量级。护脑素或[Gly14]-护脑素无法证明在FPR中显示高达10μM剂量的显著活性。因而护脑素和[Gly14]-护脑素是FPRL2的强选择性激动剂。(见实例10)

图4在黑素细胞中，人类FPRL2以剂量依赖性方式和Gi偶联，对护脑素作出响应。在黑素细胞中，护脑素促进的色素聚集(Gi偶联)的EC₅₀约为239nM。(见实例11)

图5在人类FPRL2、FPRL1和FPR中，化合物1(表1中的“Cmpd1”)的活性是由[³⁵S]GTPγS结合分析和黑素细胞分析来确定。我们发现化合物1是FPRL2的强选择性激动剂。(见实例21)

图6在人类FPRL2和FPRL1中，护脑素、[Gly14]-护脑素和化合物1的活性是由全细胞腺苷酸环化酶分析来确定。虽然护脑素和[Gly14]-护脑素是FPRL2和FPRL1两者的激动剂(图A)，但化合物1是FPRL2的选择性激动剂。(见实例21)

图7通过人类FPRL2传递信号的护脑素的百日咳敏感性是由腺苷酸环化酶分析来确定。通过人类FPRL2传递信号的化合物1的百日毒素咳敏感性是由相似方法来确定。由护脑素(图A)或由化合物1(图B)调节的cAMP抑制作用对百日咳敏感，说明FPRL2在对护脑素或化合物1的响应中与对百日咳敏感的G蛋白偶联。(见实例22)

图8FPRL2在对护脑素、[Gly14]-护脑素或化合物1的响应中与Gα16偶联的能力是由IP₃分析来确定。观察到护脑素(图A)、[Gly14]-护脑素(图B)和化合物1(图C)使胞内IP₃含量呈剂量依赖性增加，说明在对护脑素或者化合物1的响应中，FPRL2都可以通过Gα16传递信号。(见实例23)

图9在由脑起源性神经生长因子(BDNF)促使分化之前或之后确定由人类神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y进行的FPRL2和FPRL1表达。FPRL2mRNA在未分化和已分化的SH-SY5Y细胞中都可以检测到，而FPRL1 mRNA在两种细胞中都不可检测。(见实例24)

图10护脑素或化合物1抑制血清除尽的分化SH-SY5Y细胞的细胞死亡的能力是由LDH分析(图A)或台盼蓝染色(图B)来检测。护脑素和化合物1都抑制血清除尽的SH-SY5Y细胞的细胞死亡。(见实例25)

图11确定护脑素或化合物1抑制由抗APP mAb 22C11诱导的原代小鼠皮层神经元的细胞死亡的能力。图A是原代小鼠皮层神经元的5天培养物的照片。护脑素和化合物1保护原代小鼠皮层神经元免于出现由抗APP mAb22C11诱导的细胞死亡(图B)。(见实例26)

图12确定护脑素或化合物1抑制分化SH-SY5Y细胞的Aβ诱导的细胞死亡的能力。护脑素和化合物1保护分化SH-SY5Y细胞免于出现由Aβ诱导的细胞死亡。(见实例27)

图13展示一种缺氧/复氧体外模型的概图。

图14通过免疫组织化学来确定阿尔兹海默氏病脑中的FPRL2表达相对于非阿尔兹海默氏病脑中的FPRL2表达的情形。在阿尔兹海默氏病脑样品中的FPRL2表达相对于非阿尔兹海默氏病脑样品中的FPRL2表达有所上调。

具体实施方式

定义

已经围绕受体而展开的科学文献采用了许多术语来指示对受体具有各种影响的配体。为清晰和一致起见，在所述专利文献全文中将使用以下定义。在这些定义与这些术语的其他定义相抵触时，应参照以下定义：

激动剂应指与受体结合时可激活胞内响应的物质(例如配体、候选化合物)。在一些实施例中，激动剂是与受体结合时可激活胞内响应(例如，增强GTPγS与膜的结合或降低胞内cAMP含量)的那些先前未知物质。在一些实施例中，激动剂是与受体结合时具有神经保护性或肌保护性的那些先前未知物质。

变构调节物应指影响受体的功能活性而不抑制内源性配体与受体结合的物质(例如配体、候选化合物)。变构调节物包括反向激动剂、部分激动剂和激动剂。

阿尔兹海默氏病是一种进行性神经退化性疾病，其特征在于一个以上认知区域中的功能显著丧失，并常伴有行为或个性的改变。阿尔兹海默氏病是痴呆的最普遍原因。人们认为β-淀粉样肽(Aβ)在阿尔兹海默氏病的病理中起主要作用。

本文所用的氨基酸缩写列于表A中。

         表A

  丙氨酸  ALA  A  精氨酸  ARG  R  天冬酰胺  ASN  N  天冬氨酸  ASP  D  半胱氨酸  CYS  C  谷氨酸  GLU  E  谷氨酰胺  GLN  Q  甘氨酸  GLY  G  组氨酸  HI S  H  异亮氨酸  ILE  I  亮氨酸  LEU  L  赖氨酸  LYS  K  蛋氨酸  MET  M  苯丙氨酸  PHE  F  脯氨酸  PRO  P  丝氨酸  SER  S  苏氨酸  THR  T  色氨酸  TRP  W  酪氨酸  TYR  Y  缬氨酸  VAL  V

拮抗剂应指在同一位点与激动剂竞争结合至受体而不激活胞内响应并可因此抑制由激动剂引起的胞内响应的物质(例如配体、候选化合物)。在激动剂不存在下，拮抗剂不减少基线胞内响应。在一些实施例中，拮抗剂是与受体结合时与激动剂竞争来抑制细胞响应的那些先前未知物质，例如其中细胞响应为GTPγS结合至膜或胞内cAMP含量降低。

本文中的抗体是用来涵盖单克隆抗体和多克隆抗体。抗体进一步是用来涵盖IgG、IgA、IgD、IgE和IgM。抗体包括全抗体(包括单链全抗体)和其抗原结合片段(包括Fab、Fab′、F(ab)2和F(ab′)2)。抗体可来自任何动物来源。抗体更优选来自人类、鼠科动物、兔、山羊、豚鼠、仓鼠、骆驼、驴、绵羊、马或鸡的抗体。更佳地，抗体具有解离常数或Kd值小于5×10^-6M、10^-6M、5×10^-7M、10^-7M、5×10^-8M、10^-8M、5×10^-9M、10^-9M、5×10^-10M、10^-10M、5×10^-11M、10^-11M、5×10^-12M、10^-12M、5×10^-13M、10^-13M、5×10^-14M、10^-14M、5×10^-15M和10^-15M的结合亲和力。本发明的抗体可通过此项技术中已知的任何合适方法来制备。抗体的衍生物是用来涵盖(但不限于)抗原结合片段。

GPCR多肽或氨基酸序列的生物活性片段应指具有天然存在GPCR的结构功能和生化功能的多肽或氨基酸序列的片段。在某些实施例中，此生物活性片段与G蛋白偶联。在某些实施例中，此生物活性片段结合至护脑素。

候选化合物应指可经受筛选技术检验的分子(例如且不限于化合物)。

脑淀粉样β-蛋白血管病或脑淀粉样血管病(CAA)是阿尔兹海默氏病和相关病症的关键特征。CAA是脑中出现的小血管疾病，其中淀粉样蛋白在管壁上的沉积物可导致中风、脑出血或痴呆。血管淀粉样沉积导致管壁恶化和动脉瘤形成，并且可能是10-15％的老年出血性中风的病因。

化学基团(GROUP、MOIETY或RADICAL)：

术语“C_1-5酰基”表示连接羰基的C_1-4烷基，其中烷基的定义与本文所述的定义相同；一些实例包括(但不限于)乙酰基、丙酰基、正丁酰基、异丁酰基、2-甲基-丁酰基、2，2-二甲基-丙酰基(即新戊酰基)、3-甲基-丁酰基和其类似基团。

术语“C_1-5酰氧基”表示连接氧原子的C_1-5酰基，其中C_1-5酰基的定义与本文所述的定义相同；一些实例包括(但不限于)乙酰氧基、丙酰氧基、正丁酰氧基、异丁酰氧基、2-甲基丁酰氧基、2，2-二甲基-丙酰氧基(即新戊酰氧基)、3-甲基丁酰氧基和其类似基团。

术语“C_2-6烯基”表示含有2至6个碳的基团，其中存在至少一个碳-碳双键，一些实施例为2至3个碳，并且一些实施例具有2个碳。术语“烯基”包含E和Z异构体。此外，术语“烯基”包括二烯类。因此，如果存在一个以上的双键，那么所述双键可都为E或Z或为E与Z的混合物。烯基的实例包括乙烯基、丙烯基、烯丙基、异丙烯基、2-甲基-丙烯基、1-甲基-丙烯基、丁-1-烯基、丁-2-烯基、丁-3-烯基、丁-1，3-二烯基和其类似基团。

术语“C_1-4烷氧基”表示如本文所定义的直接连接氧原子的烷基。实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基和其类似基团。

术语“C_1-6烷基”表示含有所指示的碳数的直链或支链碳基，例如，在一些实施例中，烷基是“C_1-4烷基”并且此基团含有1至4个碳，在其他实施例中，烷基是“C_2-6烷基”并且此基团含有2至6个碳。在一些实施例中，烷基含有1至3个碳，一些实施例含有1至2个碳，并且一些实施例含有1个碳。烷基的实例包括(但不限于)甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、异戊基、仲戊基、新戊基、己基、异己基、仲己基、新己基和其类似基团。

术语“C_1-4烷基甲酰胺基”或“C_1-4烷基甲酰胺”表示连接酰胺基中的氮的单一C_1-4烷基，其中烷基的定义与本文所建立的定义相同。所述C_1-5烷基甲酰胺基可由下式来代表：

实例包括(但不限于)N-甲基甲酰胺、N-乙基甲酰胺、N-正丙基甲酰胺、N-异丙基甲酰胺、N-正丁基甲酰胺、N-仲丁基甲酰胺、N-异丁基甲酰胺、N-叔丁基甲酰胺和其类似物。

术语“C_2-6炔基”表示含有2至6个碳和至少一个碳-碳三键的基团，一些实施例为2至4个碳，并且一些实施例具有2个碳。炔基的实例包括(但不限于)乙炔基、丙-1-炔基、3-丙-2-炔基、丁-1-炔基、1-甲基-丙-2-炔基、丁-1，3-二炔基和其类似基团。术语“炔基”包括二炔类。

术语“C_1-4烷基胺基”表示一个连接胺基的烷基，其中此烷基的含义与本文所述的含义相同。一些实例包括(但不限于)甲胺基、乙胺基、正丙胺基、异丙胺基、正丁胺基、仲丁胺基、异丁胺基、叔丁胺基和其类似基团。

术语“C_1-4烷基磺酰胺”表示

术语“C_1-4烷基亚磺酰基”表示连接式-S(O)-的亚砜基的C_1-6烷基，其中此烷基的定义与本文所述的定义相同。实例包括(但不限于)甲基亚磺酰基、乙基亚磺酰基、正丙基亚磺酰基、异丙基亚磺酰基、正丁基亚磺酰基、仲丁基亚磺酰基、异丁基亚磺酰基、叔丁基亚磺酰基和其类似基团。

术语“C_1-4烷基磺酰基”表示连接式-S(O)₂-的砜基的C_1-6烷基，其中此烷基的定义与本文所述的定义相同。实例包括(但不限于)甲磺酰基、乙磺酰基、正丙基磺酰基、异丙基磺酰基、正丁基磺酰基、仲丁基磺酰基、异丁基磺酰基、叔丁基磺酰基和其类似基团。

术语“C_1-4烷硫基”表示连接式-S-的硫化物基团的C_1-6烷基，其中此烷基的定义与本文所述的定义相同。实例包括(但不限于)甲硫基(即CH₃S-)、乙硫基、正丙硫基、异丙硫基、正丁硫基、仲丁硫基、异丁硫基、叔丁硫基和其类似基团。

术语“C_1-4烷基脲基”表示

术语“氨基”表示-NH₂基团。

术语“C_1-6-烷氧基羰基”表示羧酸的C_1-6烷基酯，其中所述烷基是如本文所定义。实例包括(但不限于)甲氧羰基、乙氧羰基、丙氧羰基、异丙氧羰基、丁氧羰基、仲丁氧羰基、异丁氧羰基、叔丁氧羰基和其类似基团。

术语“甲酰胺”表示-CONH₂基团。

术语“羧基”(“carboxy”或“carboxyl”)表示-CO₂H基团；也可称为羧酸基。

术语“氰基”表示-CN基。

术语“C_3-6环烷基”表示含有3至6个碳的饱和环基；一些实施例含有3至5个碳，一些实施例含有3至4个碳。实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基。

术语“C_2-6二烷基氨基”表示由两个相同或不同烷基取代的氨基，其中烷基的定义与本文所述的定义相同。C_2-6二烷基氨基可由以下基团来代表：

C_2-6二烷基氨基的实例包括(但不限于)二甲氨基、甲基乙基氨基、二乙氨基、甲基丙基氨基、甲基异丙基氨基和其类似基团。

术语“C_1-4二烷基甲酰胺基”或“C_1-4二烷基甲酰胺”表示两个连接甲酰胺基的相同或不同烷基，其中烷基的定义与本文所述的定义相同。C_1-4二烷基甲酰胺基可由以下基团来代表：

其中C_1-4的定义与本文所述的定义相同。二烷基甲酰胺的实例包括(但不限于)N，N-二甲基甲酰胺、N-甲基-N-乙基甲酰胺、N，N-二乙基甲酰胺、N-甲基-N-异丙基甲酰胺和其类似物。

术语“卤素”或“卤基”表示氟基、氯基、溴基或碘基。

术语“C_1-4卤代烷氧基”表示如本文所定义的卤代烷基，其直接连接氧原子。实例包括(但不限于)二氟甲氧基、三氟甲氧基、2，2，2-三氟乙氧基、五氟乙氧基和其类似基团。

术语“C_1-4卤代烷基”表示烷基，其中所述烷基是经卤素单取代至全取代，其中全取代卤代烷基可由式C_hL_2h+1来代表，其中L为卤素且“h”代表碳原子数；当存在一个以上的卤素时，这些卤素可相同或不同并是选自由F、Cl、Br和I组成的群组；应了解，术语“烷基”和“卤素”的定义与本文所建立的定义相同。在一些实施例中，卤代烷基是“C_1-4卤代烷基”且此基团含有1至4个碳，一些实施例含有1至3个碳，一些实施例含有1至2个碳，一些实施例含有1个碳。当卤代烷基是经卤素原子全取代时，本文中将此基团称为全卤烷基，一个实例是经氟原子全取代的烷基并且在本文中称为“全氟烷基”。在一些实施例中，卤代烷基的实例包括(但不限于)二氟甲基、氟甲基、2，2，2-三氟-乙基、2，2-二氟-乙基、2-氟-乙基、1，2，2-三氟-乙基、1，2-二氟-乙基、1，1-二氟-乙基、1，1，2-三氟-乙基、3，3，3-三氟-丙基、2，2-二氟-丙基、3，3-二氟-丙基、3-氟-丙基、2，3，3-三氟-丙基、2，3-二氟-丙基、2，2，3，3，3-五氟-丙基、2，2，3，3-四氟-丙基、2，2，3-三氟-丙基、1，2，3，3-四氟-丙基、1，2，3-三氟-丙基、3，3-二氟-丙基、1，2，2，3-四氟-丙基、4，4-二氟-丁基、3，3-二氟-丁基、4，4，4-三氟-丁基、3，3-二氟-丁基和其类似基团。在一些实施例中，全氟烷基的实例包括(但不限于)三氟甲基、五氟乙基、七氟丙基、1，2，2，2-四氟-1-三氟甲基-乙基和其类似基团。

术语“C_1-4卤代烷基亚磺酰基”表示连接式-S(O)-的亚砜基的卤代烷基，其中此卤代烷基的定义与本文所述的定义相同。

术语“C_1-4卤代烷基磺酰基”表示连接式-S(O)₂-的砜基的卤代烷基，其中卤代烷基的定义与本文所述的定义相同。

术语“C_1-4卤代烷硫基”表示直接连接硫原子的卤代烷基，其中此卤代烷基的含义与本文所述的含义相同。

术语“羟基”表示-OH基。

术语“硝基”表示-NO₂基。

密码子应指三个核苷酸(或核苷酸的等同物)的群组，其一般包含与磷酸盐基团偶联的核苷酸[腺苷(A)、鸟苷(G)、胞苷(C)、尿苷(U))和胸苷(T)]，并且其在接受翻译时可编码氨基酸。

组合物是指包含至少一种组分的物质。“医药组合物”是组合物的实例。

化合物效能应指对化合物抑制或激发受体功能性的能力(即激活/抑制信号转导途径的能力，与受体结合亲和力相反)的衡量。检测化合物效能的示范性方法在本专利文献的实例部分有所揭示。

在本文中，包含、基本上由......组成和由......组成是根据其标准含义来定义的。在《专利审查程序手册》(M.P.E.P.)中所阐明的规定含义涵盖此项技术中所规定的含义，且参照性联邦巡回法院先前案例(Federal Circuitcase law)中所阐明的规定含义涵盖《专利审查程序手册》所阐明的含义。

充血性心力衰竭应指一种病症，其中心脏丧失其有效泵血的能力。随着年龄增长，充血性心力衰竭变得更为普遍。缺血性心脏病是充血性心力衰竭的最普遍原因，占所有病例的60-70％。高于12mmHg的静脉压增加是充血性心力衰竭的主要弗雷明汉标准(Framingham criteria)之一，心输出量的减少与大于25秒的循环时间等效。

组成性活性受体应指通过与使受体与其配体或其化学等同物结合不同的方式而在活性状态下稳定的受体。组成性活性受体可为内源性或非内源性受体。

组成性活化受体应指已进行修饰以便具有组成性活性的内源性受体。

组成性受体活化应指在受体不与其配体或其化学等同物结合的情况下使受体活化。

接触(CONTACT或CONTACTING)应指无论在体外系统还是在体内系统中，将至少两个半族聚集到一起。

降低(DECREASE)是用于指出可测量的减少，并且在使用时与术语减少(“reduce”、“diminish”、“lower”和“lessen”)同义。

内源性应指哺乳动物自然产生的物质。关于(例如且不限于)术语“受体”的内源性应指其是哺乳动物(例如且不限于人类)自然产生的。应了解，内源性包含基因的等位基因变异体和这样编码的等位基因多肽变异体。在本文中使用时，“内源性GPCR”(“endogenous GPCR”和“native GPCR”)是交换使用的。相反，上下文中的术语“非内源性”应指其并不是由哺乳动物(例如且不限于人类)自然产生的。例如(但并不限于此)，内源性形式不具有组成性活性而当经过处理时变得具有组成性活性的受体在本文中最好称作“非内源性、组成性活化受体”。

表达载体在本文中是定义为在适于所述表达载体的宿主细胞重组体中，克隆DNA的转录和转录mRNA s的翻译所需的DNA序列。适当构建的表达载体应含有用于在宿主细胞中自主复制的复制起点、可选择标志、有限数目的有效限制酶位点、高拷贝数的潜能和活性启动子。将所述的待转录的克隆DNA可行性地连接至所述表达载体中的组成性或条件性活性启动子。作为说明(但并非限制)，pCMV是一种表达载体。

在本文所揭示的本发明上下文中，G蛋白偶联受体融合蛋白和GPCR融合蛋白各自是指包含与至少一个G蛋白融合的内源性、组成性活性GPCR或非内源性、组成性活化GRCR的非内源性蛋白，所述GPCR最佳与所述G蛋白的α亚单位(此亚单位是结合GTP的亚单位)融合，此G蛋白优选与和内源性GPCR自然偶联的G蛋白同型。例如(且不限于)在内源性状态下，如果G蛋白“Gsα”是与GPCR偶联的优势蛋白，那么基于特异性GPCR的GPCR融合蛋白将是包含与Gsα融合的GPCR的非内源性蛋白；如下文所述，非优势G蛋白在一些情形下同样可与GPCR融合。G蛋白可直接与组成性活性GPCR的C-末端融合或在两者之间可存在间隔物。

宿主细胞应指其中能够并入载体的细胞。在某些实施例中，该载体是表达载体。示范性宿主细胞包括(但不限于)293、293T、CHO、MCB3901和COS-7细胞与黑素细胞。

当与化合物有关时，护脑素活性应指所述化合物结合至护脑素受体并是其调节物，其中所述受体优选具有内源性且更优选FPRL2，并且其中所述调节物优选激动剂。

本文所使用的需要预防或治疗是指由护理者(就人类来说，例如医生、护士、从业护士等；就动物(包括非人类哺乳动物)来说，例如兽医)做出的判断，即个体或动物需要治疗或将从治疗中受益。此判断是基于护理者的专业知识领域内的多种因素而做出的，但此判断包括以下认识，即所述个体或动物由于一种可通过本发明化合物来治疗的病症而患病或将要患病。

本文所使用的个体是指任何动物，包括哺乳动物，优选小鼠、大鼠、其他啮齿动物、兔、狗、猫、猪、牛、绵羊、马或灵长类动物，并且最佳为人类。

与术语“响应”有关系的抑制(INHIBIT或INHIBITING)应指在化合物存在下，响应与此化合物不存在下相对有所减少或得到预防。

反向激动剂应指与受体的内源性形式或组成性活化形式结合的物质(例如配体、候选化合物)，其使得在激动剂不存在下所观察到的受体的基线胞内响应有所减少。

缺血性心脏病应指由于心脏组织缺乏氧气而引起的病症，其中心肌受到影响并且心脏不能适当泵血。在美国，缺血性心脏病是最普遍的心肌病。

被分离应指物质从它的初始环境(例如，如果此物质是天然存在的，那么在自然环境)中被移除。例如，存在于活体动物中的自然产生多核苷酸或多肽并不会被分离，而从自然系统中的一些或所有共存物质中分离出来的相同多核苷酸或DNA或多肽却会被分离。所述多核苷酸可以是载体的一部分和/或所述多核苷酸或多肽可以是组合物的一部分，并且，在该载体或组合物并不是其自然环境的一部分时，所述多核苷酸或多肽仍将得到分离。

配体应指特异性结合至GPCR的分子。例如，配体可以是多肽、脂质、小分子、抗体。内源性配体是天然GPCR的内源性、天然配体。配体可以是GPCR“拮抗剂”、“激动剂”、“部分激动剂”或“反向激动剂”或其类似物。

如本文所用，术语调节或修饰是指一种特殊活性、功能或分子的数量、质量或功效的增加或减少。作为说明(且不加限制)，G蛋白偶联受体的激动剂、部分激动剂、反向激动剂和拮抗剂是此受体的调节物。

运动神经元疾病应指一种疾病，其特征在于脊髓、脑干或运动皮质的运动神经元的选择性退化。临床亚型是通过主要退化位点来区分。

心肌梗塞应指心肌的某个区域由于缺乏充足的氧气供应而损害或坏死。心肌梗塞通常是由阻塞一条冠状动脉(将血液和氧气带入心肌的血管)的凝块引起。这个凝块阻止血液和氧气到达心脏的那个区域，从而导致那个区域中的心脏细胞死亡。

在一个或一个以上的上下文中，肌保护性应指保护肌细胞免于死亡的特性。由此可见，肌保护性GPCR的调节物是肌保护调节物。

在一个或一个以上的上下文中，神经保护性应指保护神经细胞免于死亡的特性。由此可见，神经保护性GPCR的调节物是神经保护调节物。

帕金森氏病是一种慢性、进行性神经退化性病症，其特征在于例如震颤、运动徐缓、肌强直、步伐紊乱和姿态不稳的运动症状。虽然研究人员已经确定黑质中的多巴胺能神经元退化是最初的病理生理学机制，但他们认为其他神经递质系统(如5-羟色胺能系统和谷氨酸能系统)也不同程度地卷入此疾病的进程中。

部分激动剂应指与受体结合时激活胞内响应的物质(例如配体、候选化合物)，其作用程度(degree/extent)比完全激动剂的程度要轻。

周围神经病是一个用来描述多种病症的广义术语，通常表现为四肢疼痛或不适感觉，并且神经病是其病因。这种病状常见于末期肾病和糖尿病患者。远端对称性多发性神经病(DSP)(一种影响身体两侧并且侵害末梢感觉神经的神经病)是糖尿病性神经病的最常见临床表现，并且大约占所有在糖尿病患者中观察到的神经病的80-85％。

医药组合物应指包含至少一种活性成分的组合物，由此所述组合物可在哺乳动物(例如且不限于人类)中研究出详细、有效的结果。所属领域的技术人员应了解并清楚适于确定一种活性成分是否具有基于技术人员需要的所要有效结果的技术。

多核苷酸应指单链或双链形式的一种以上核苷酸的RNA、DNA或RNA/DNA混合序列。本发明的多核苷酸可通过任何已知方法来制备，包括合成、重组(不包括体内产生)或其组合和利用此项技术中已知的任何纯化方法。

多肽应指氨基酸的聚合物，而不考虑此聚合物的长度。因而，在多肽的定义中包括肽类、寡肽类和蛋白类。此术语也不规定或排除多肽的表达后修饰。例如，术语“多肽”清楚地涵盖包括糖基、乙酰基、磷酸盐基团、脂质基团和其类似物的共价连接的多肽。

本文中使用引物来表示一种特殊的寡核苷酸序列，其与目标核苷酸序列互补并用于与目标核苷酸序列杂交。引物充当由DNA聚合酶、RNA聚合酶或逆转录酶催化的核苷酸聚合的起始点。

本文中的朊毒体相关疾病是用于涵盖(但不限于)牛海绵状脑病、克雅氏病、库鲁病、GSS综合症和致死性家族性失眠症。

本文中的纯化是用于描述已经从其他化合物中分离出来的本发明的多核苷酸或多核苷酸载体，这些化合物包括(但不限于)其他核酸、碳水化合物、脂质和蛋白(如在多核苷酸的合成中所使用的酶)。在某些实施例中，当至少约50％、至少约60％、至少约75％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或至少约99.5％的样品含有单一多核苷酸序列时，此多核苷酸大体上是纯的。在一些实施例中，大体上纯的多核苷酸通常包含约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约99.5％(重量/重量)的多核苷酸样品。

同样，本文中的术语纯化是用于描述已经从其他化合物中分离出来的本发明的多肽，这些化合物包括(但不限于)核酸、脂质、碳水化合物和其他蛋白。在某些实施例中，当样品中至少约50％、至少约60％、至少约75％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或至少约99.5％的多肽分子具有单一氨基酸序列时，此多肽大体上是纯的。在一些实施例中，大体上纯的多肽通常包含约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、约99％或约99.5％(重量/重量)的蛋白样品。

同样，本文中的术语纯化是用于描述本发明的调节物。在某些实施例中，大体上纯的调节物通常包含至少约70％、至少约80％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或至少约99.5％(重量/重量)的所述调节物的制剂。在某些实施例中，所述调节物具有“至少”在90％与100％之间(精确至任何数至千分之一位)的纯度(例如，至少99.995％纯度)。

此外，本文中所用的术语纯化不需要绝对纯度；更确切的说，其是指一个相对定义。

受体功能性应指受体在细胞中接收刺激并缓和效应的正常操作，其包括(但不限于)调节基因转录、调节离子流入或流出、影响催化反应和/或通过G-蛋白来调节活性。

第二信使应指由于受体活化而产生的胞内响应。例如，第二信使可包括三磷酸肌醇(IP₃)、甘油二酯(DAG)、环AMP(cAMP)、环GMP(cGMP)和Ca²⁺。可测量第二信使响应来确定受体活化。另外，可测量第二信使响应来确定候选化合物(例如，反向激动剂、部分激动剂、激动剂和拮抗剂)。

信号噪声比应指对活化、扩增或刺激作出响应而产生的信号，其中所述信号是在对非活化、非扩增或非刺激作出响应的背景噪声或基准水平之上。

间隔物应指若干被翻译的氨基酸，其位于基因(例如，所关注的GPCR)的末尾密码子或末尾氨基酸之后，但在所关注G蛋白的起始密码子或开始区域之前，其中被翻译的若干氨基酸与所关注G蛋白的开始区域一起放置在框内。被翻译氨基酸的数目可为1、2、3、4等，并且可多达12个。

与术语“反应”相关的刺激(STIMULATE或STIMULATING)应指在存在一种化合物时，与缺乏此化合物的情况相反，反应有所增加。

中风是影响血管向大脑供应血液的心血管疾病，并在本文中用于包括脑血栓症(中风的最常见类型)。当血凝块形成时，发生脑血栓症并且阻塞将血液带入大脑部分的动脉血流。血凝块通常形成于受动脉粥样硬化破坏的动脉中。

患者应指灵长类动物，包括(但不限于)人类和狒狒与宠物(例如狗和猫)、实验动物(例如大鼠和小鼠)和家畜(例如马、绵羊和母牛)。

本文所使用的治疗有效剂量是指在研究人员、兽医、医师或其他临床医师正在探寻的组织、系统、动物、个体或人类中引起生物学或医学响应的活性化合物或药剂的量，所述响应包括下列一项或一项以上：

(1)预防疾病；例如预防个体的疾病、病状或病症，所述个体可能易患此疾病、病状或病症，但尚未经历或显示此疾病的病理或症状；

(2)抑制疾病；例如抑制个体的疾病、病状或病症，所述个体正在经历或显示此疾病、病状或病症的病理或症状(即阻止病理和/或症状的进一步发展)；并

(3)改善疾病；例如改善个体的疾病、病状或病症，所述个体正在经历或显示此疾病、病状或病症的病理或症状(即逆转病理和/或症状)。

本文中所使用的术语变异体是分别与参考多核苷酸或多肽不同(但保持本质特性)的多核苷酸或多肽。多核苷酸的典型变异体在核苷酸序列上与另一参考多核苷酸不同。变异体的核苷酸序列变化可改变或不可改变参考多核苷酸所编码的多肽的氨基酸序列。多肽的典型变异体在核苷酸序列上与另一参考多肽不同。变异体和参考多肽可在氨基酸序列上有所不同，这种不同表现为一个或一个以上的取代、增加、缺失的任何组合。多核苷酸或多肽的变异体可为自然发生的变异体(如等位基因变异体)，或可为不知是否会自然发生的变异体。多核苷酸和多肽的非自然发生变异体可通过突变技术或直接合成而制得。

A.引言

以下部分的次序是为了获得直观效果而提出，并且不希望也不应理解为其是对揭示内容或随后的权利要求书的限制。

B.受体表达

1.所关注的GPCR多肽

本文所使用的“FPRL2氨基酸序列”是用来涵盖SEQ ID NO：2的内源性人类FPRL2氨基酸序列和变异氨基酸序列，后者与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％的一致性。换句话说，包含SEQ ID NO：2氨基酸序列的变异体的GPCR也可用于本方法。在某些实施例中，可用于本方法的GPCR可包含SEQ ID NO：2氨基酸序列的等位基因变异体。作为说明(且不加限制)，SEQ ID NO：2氨基酸序列的等位基因变异体可包含在SEQ ID NO：2的氨基酸位置94上由丙氨酸取代甘氨酸、在SEQ ID NO：2的氨基酸位置211上由苏氨酸取代丝氨酸、在SEQ ID NO：2的氨基酸位置338上由组氨酸取代天冬氨酸，或可包含所述氨基酸取代的任何组合(基因序列数据库登记号AAA58482)。在某些实施例中，SEQ ID NO：2氨基酸序列的等位基因变异体是由内源性FPRL2核苷酸序列来编码，此内源性FPRL2核苷酸序列可通过使用特异性引物SEQ ED NO：3和SEQ ED NO：4在人类DNA样品上进行聚合酶链反应(PCR)来获得。在一些实施例中，SEQ ID NO：2氨基酸序列的等位基因变异体是由内源性FPRL2核苷酸序列来编码，此内源性FPRL2核苷酸序列可通过使用包含SEQ ED NO：3的特异性引物和包含SEQ ED NO：4的特异性引物在人类DNA样品上进行聚合酶链反应(PCR)来获得。在某些实施例中，可用于本方法中的变异氨基酸序列是SEQ ID NO：2氨基酸序列的哺乳动物直向同源物。作为说明(且不加限制)，设想黑猩猩的FPRL2氨基酸序列(例如，基因序列数据库登记号P79243)、大猩猩的FPRL2氨基酸序列(例如，基因序列数据库登记号P79178)、猩猩的FPRL2氨基酸序列(例如，基因序列数据库登记号P79237)和恒河猴(Macaca mulatto)的FPRL2氨基酸序列(基因序列数据库登记号P79191)在“FPRL2氨基酸序列”范围内。在某些实施例中，可用于本方法中的GPCR可包含SEQ ID NO：2氨基酸序列的非内源性、组成性活化突变体、SEQ ID NO：2的等位基因或SEQ ID NO：2的哺乳动物直向同源物。如此项技术中所知，可使用多种方法(参见，例如1998年10月22日公布的PCT申请号为PCT/US98/07496的WO 98/46995；和美国专利第6,555,339号；各专利的揭示内容是以全文引用的方式并入本文中)来制得组成性活化GPCR。本发明可使用来自下列各物的生物活性片段：SEQ ID NO：2的氨基酸序列；SEQ ID NO：2的等位基因；SEQ ID NO：2的哺乳动物直向同源物；内源性FPRL2的非内源性、组成性活化突变体；或与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％一致性的氨基酸序列。作为说明(且不加限制)，设想N-末端蛋氨酸或N-末端信号肽的缺失提供可用于本方法的生物活性片段。

在某些实施例中，可用于本方法中的GPCR可包含与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％一致性的氨基酸序列。在某些实施例中，可用于本方法中的GPCR可包含与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％一致性的氨基酸序列。在某些实施例中，可用于本方法中的GPCR可包含与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约75％一致性的氨基酸序列。在某些实施例中，可用于本方法中的GPCR可包含与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约80％一致性的氨基酸序列。在某些实施例中，可用于本方法中的GPCR可包含与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约85％一致性的氨基酸序列。在某些实施例中，可用于本方法中的GPCR可包含与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约90％一致性的氨基酸序列。在某些实施例中，可用于本方法中的GPCR可包含与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约91％一致性的氨基酸序列。在某些实施例中，可用于本方法中的GPCR可包含与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约92％一致性的氨基酸序列。在某些实施例中，可用于本方法中的GPCR可包含与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约93％一致性的氨基酸序列。在某些实施例中，可用于本方法中的GPCR可包含与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约94％一致性的氨基酸序列。在某些实施例中，可用于本方法中的GPCR可包含与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约95％一致性的氨基酸序列。在某些实施例中，可用于本方法中的GPCR可包含与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约96％一致性的氨基酸序列。在某些实施例中，可用于本方法中的GPCR可包含与SEQ IDNO：2氨基酸序列具有至少约97％一致性的氨基酸序列。在某些实施例中，可用于本方法中的GPCR可包含与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少约98％一致性的氨基酸序列。在某些实施例中，可用于本方法中的GPCR可包含与SEQID NO：2氨基酸序列具有至少约99％一致性的氨基酸序列。与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少(例如)95％“一致性”的氨基酸序列是指：所述氨基酸序列与SEQ ID NO：2氨基酸序列相同，但在每100个SEQ ID NO：2氨基酸序列的氨基酸中，它可包括多达5个氨基酸改变。因而，为获得与SEQ ID NO：2氨基酸序列具有至少95％一致性的氨基酸序列，可插入、删除或用另一种氨基酸(与SEQ ID NO：2氨基酸序列相比)来取代所述序列中的多达5％(100个中的5个)氨基酸残基。这些改变可出现在氨基或羧基末端或那些末端位置之间的任何位置，单独散布于序列中的残基中或散布于序列中的一个或一个以上相邻基团中。

在一些实施例中，可用于本方法的FPRL2氨基酸序列是由多核苷酸序列的互补序列编码的G蛋白偶联受体的氨基酸序列，此互补序列在严格环境下与结合在过滤器上的具有SEQ ID NO：1中所述序列的DNA杂交。杂交技术已为熟练技术工人所熟知。优选的严格杂交环境包括：在42℃下，在包含50％甲酰胺、5xSSC(150mM NaCl、15mM柠檬酸三钠)、50mM磷酸钠(pH7.6)、5x登哈特溶液(Denhardt′s solution)、10％硫酸右旋糖酐和20μg/ml变性、已剪切鲑精DNA的溶液中培养一整夜；接着，在约65℃下在0.1xSSC中洗涤该过滤器。

a.序列一致性

用于确定查询序列(例如SEQ ID NO：2氨基酸序列)与待询问序列之间的最佳全面匹配的优选方法(也称作全域序列匹配)可使用基于Brutlag等人[《计算机应用生物科学》(1990)6：237-245；此揭示内容以全文引用的方式并入本文中]的运算法则的FASTDB计算机程序来确定。在序列匹配中，查询序列和所询问序列都是氨基酸序列。所述全域序列匹配的结果是以一致百分数来表示。FASTDB氨基酸匹配中使用的优选参数为：矩阵＝PAM 0、k-元组＝2、错配罚分＝1、连接罚分＝20、随机化组＝25、长度＝0、截断值＝1、视窗大小＝序列长度、空隙罚分＝5、空隙大小罚分＝0.05、视窗大小＝247或所询问氨基酸序列的长度(无论哪一个较短)。

如果由于N-或C-末端缺失(而非内部缺失)而导致所询问序列比查询序列短，那么必须用手校正一致百分数的结果，因为在计算全域一致百分数时，FASTDB程序不解释所询问序列的N-和C-末端截断。对于在N-和C-末端被截断的所询问序列来说，相对于查询序列，其一致百分数是通过计算查询序列的残基数来进行校正，这些残基在所询问序列的N-和C-末端、与相应的询问序列的残基不匹配、占查询序列的总碱基的一个百分比。通过FASTDB序列匹配的结果来确定残基是否匹配。接着，从一致百分数中减去这个百分比，通过上述FASTDB程序、使用规定的参数来进行计算，从而达到最终的一致百分数数值。此最终的一致百分数值是用于达成本发明目的的数值。为了手动调整一致百分数值，只考虑在所询问序列的N-和C-末端、与查询序列不匹配的残基。即，只考虑所询问序列的N-和C-最末端残基外部的查询氨基酸残基。

例如，90氨基酸残基的所询问序列与待确定一致百分数的100-残基的查询序列匹配。在所询问序列的N-末端发生缺失且因此，FASTDB匹配在N-末端与第一种残基不匹配。10个未配对残基占序列的10％(N-和C-末端不匹配的残基数/查询序列中的总残基数)，因此，从FASTDB程序所计算出的一致百分数数值中减去10％。如果剩余的90个残基正确匹配，那么最终一致百分数将为90％。

在另一个实例中，将90-残基的所询问序列与100-残基的查询序列相比。此时，缺失在内部，因此在所询问序列的N-或C-末端没有与查询序列不匹配的残基。在这种情况下，通过FASTDB计算出的一致百分数并未手动校正。再一次，如FASTDB匹配所显示，只手动校正位于所询问序列的N-和C-末端外部、与查询序列不匹配的残基。未进行其他用于达成本发明目的的校正。

b.融合蛋白

在某些实施例中，所关注的多肽是融合蛋白，并且可能含有(例如)亲和标记域或报告域。合适的亲和标记物包括任何可与另一半族(通常是另一多肽，最通常是抗体)特异性结合的氨基酸序列。合适的亲和标记物包括抗原决定部位标记物，例如此项技术中已知的V5标记物、FLAG标记物、HA标记物(来自流感病毒血凝素)、myc标记物和其类似物。合适的亲和标记物也包括：已知结合底物的域，例如此项技术中已知的HIS、GST和MBP标记物；和可获得特异结合伴侣(例如抗体，尤其是单克隆抗体)的来自其他蛋白的域。合适的亲和标记物也包括任何蛋白-蛋白相互作用区域(如IgG Fc域)，使用合适的结合伴侣(例如IgG Fc受体)可使其特异性结合并可对其进行检测。明确地设想，所述融合蛋白可含有在框架中与N-末端蛋氨酸残基已被删除或已由替代氨基酸取代的GPCR融合的异种N-末端域(例如抗原决定部位标记物)。

合适的报告域包括任何可报导多肽存在的域。同时应承认，使用(例如)特异性结合至亲和标记物的已标记抗体可将所述亲和标记物用于报告多肽的存在，更常使用发光报告域。合适的发光报告域包括荧光素酶(例如，来自于萤火虫、海萤(Vargula)、海参(Renilla reniformis)或牟氏海参(Renilla muelleri))或其发光变异体。其他合适的报告域包括荧光蛋白(例如，来自于水母、珊瑚和其他来自于水母(Aequoria)、海参(Renilla)、海笔(Ptilosarcus)、白海笔(Stylatula)种的腔肠动物)或其发光变异体。在此项技术中，这些报告蛋白的发光变异体已为我们所熟知并且与自然报告蛋白相比，其可更明亮、更暗淡或具有不同的激发和/或发射光谱。例如，如此项技术所知，一些变异体在改变之后不再呈现出绿色，并可能呈现出蓝色、青色、黄色、加强型黄红色(分别称为BFP、CFP、YFP、eYFP和RFP)或具有其他发射光谱。其他合适的报告域包括可通过生物化学或颜色变化来报告多肽存在的域，如β-半乳糖苷酶、β-葡糖苷酸酶、氯霉素乙酰转移酶和分泌性胚胎碱性磷酸酶。

此项技术中同样已知，亲和标记物或报告域可存在于所关注多肽的任何位置。然而，在大多数实施例中，他们是存在于所关注多肽的C-或N-末端。

2.编码所关注GPCR多肽的核酸

由于用于操纵核酸的遗传密码和重组技术是已知的，并且所关注GPCR多肽的氨基酸序列是如上所述，编码所关注GPCR多肽的核酸的设计和产生完全在技术工人的技术范围内。在某些实施例中，使用标准重组DNA技术(Ausubel等人的《精编分子生物学实验指南》(Short Protocols inMolecular Biology)，第3版，威利父子公司(Wiley & Sons)，1995年；Sambrook等人的《分子克隆：实验室手册》(Molecular Cloning：ALaboratory Manual)，第2版，(1989年)冷泉港实验室(Cold Spring Harbor)，纽约)方法。例如，使用多种无需在本文中描述的重组方法中的任一种或其组合可从GPCR编码序列库中分离GPCR编码序列。在编码蛋白的核酸序列中，也可使用标准重组DNA技术来进行随后的核苷酸取代、缺失和/或添加。

例如，在编码所关注多肽的多核苷酸中，可使用定位诱变和亚克隆来引入/删除/取代核酸残基。在其他实施例中，可使用PCR。编码所关注多肽的核酸也可通过化学合成而完全由寡核苷酸制得(例如Cello等人，《科学》(Science)(2002年)297：1016-8)。

在一些实施例中，将编码所关注多肽的核酸密码子最优化以在特殊物种(特别是哺乳动物，例如小鼠、大鼠、仓鼠、非人类灵长类动物或者人类物种)的细胞中进行表达。在一些实施例中，将编码所关注多肽的核酸密码子最优化以在特殊物种(特别是两栖类物种)的细胞中进行表达。

a.载体

本发明进一步提供包含该核酸的载体(也称为“构建物”)。在本发明的多个实施例中，该核酸序列在已经可行性地连接至表达控制序列(例如，包括启动子)之后将在宿主中进行表达。该核酸一般也是放置在表达载体中，此表达载体可在宿主细胞中复制成为游离体或宿主染色体DNA的主要部分。一般地，表达载体将含有选择标记物(例如四环素或新霉素)，从而容许检测那些以所要DNA序列转化的细胞(参见，例如美国专利第4,704,362号，其是以引用的方式并入本文中)。载体(包括单表达和双表达盒式载体)在此项技术中已为我们所熟知(Ausubel等人的《精编分子生物学实验指南》，第3版，威利父子公司，1995年；Sambrook等人的《分子克隆：实验室手册》，第2版，(1989年)冷泉港实验室，纽约)。合适的载体包括病毒载体、质粒、装配型质粒、人工染色体(人类人工染色体、细菌人工染色体、酵母人工染色体等)、微型染色体和其类似物。可使用逆转录病毒载体、腺病毒载体和腺相关病毒载体。

为了在细胞中产生所关注的多肽，所属领域的技术人员可利用多种表达载体。一种合适的载体是pCMV，其已用于某些实施例中。依据《国际承认用于专利程序的微生物寄存布达佩斯条约》(Budapest Treaty for theInternational Recognition of the Deposit of Microorganisms for thePurpose of Patent Procedure)的规定，此载体已在1998年10月13日寄存于美国模式培养物保藏所(American Type Culture Collection)(ATCC)(10801学院大街(University Blvd.)，马纳萨斯(Manassas)，弗吉尼亚州(VA)20110-2209，美国)中。所述DNA已由ATCC检验并被确定为具有生存力。ATCC已将以下寄存号分配给pCMV：ATCC#203351。

该核酸通常包含编码所关注多肽的单一可读框架，然而在某些实施例中，由于用于表达所关注多肽的宿主细胞可能是真核细胞(例如哺乳动物细胞，如人类细胞)，所述可读框架可能会被内含子中断。所述核酸一般是转录单元的部分，除所述核酸之外，所述单元也可能含有可引导RNA稳定性、翻译效率等的3′和5′未翻译区域(UTR)。所述核酸也可是表达盒的部分，除所述核酸之外，所述表达盒也含有引导所关注多肽的转录和表达的启动子和转录终止子。

真核启动子可以是任何在真核宿主细胞中具有功能的启动子，包括病毒启动子和源自真核基因的启动子。示范性真核启动子包括(但不限于)以下各物：小鼠金属硫蛋白I基因序列的启动子(Hamer等人，《分子应用基因杂志》(J.Mol.Appl.Gen.)，1：273-288，1982年)；疱疹病毒的TK启动子(McKnight，《细胞》(Cell)31：355-365，1982年)；SV40早期启动子(Benoist等人，自然(Nature)(伦敦)290：304-310，1981年)；酵母gall基因序列启动子(Johnston等人，《美国科学院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sci.)(美国)79：6971-6975，1982年)；Silver等人，《美国科学院院刊》(美国)81：5951-59SS，1984年)、CMV启动子、EF-1启动子、(多种)蜕皮激素反应启动子、四环素反应启动子和其类似物。由于病毒启动子通常是强启动子，其可能受到特别关注。在某些实施例中，所使用的启动子即为目标病原体的启动子。选择本发明中所用的启动子，从而使得其在引入细胞类型(和/或动物)中时具有功能性。在某些实施例中，所述启动子是CMV启动子。

在某些实施例中，该载体也可提供可选择标记物的表达。合适的载体和可选择标记物在此项技术中已为我们所熟知，并在Ausubel等人的(《精编分子生物学实验指南》，第3版，威利父子公司，1995年)和Sambrook等人的(《分子克隆：实验室手册》，第3版(2001年)冷泉港实验室，纽约)中有所讨论。已经使用多种不同的基因来作为选择标记物，并且在该载体中用作可选择标记物的特别基因的选择首先是为方便起见。已知的可选择标记基因包括：胸苷激酶基因、CAD、腺甙脱氨酶基因、天冬酰胺合成酶基因、抗生素抗性基因(例如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因、氯霉素抗性基因或氯霉素乙酰转移酶基因、卡那霉素抗性基因或新霉素抗性基因(氨基糖苷磷酸转移酶基因))、潮霉素B磷酸转移酶基因和其类似物。

如上所述，所关注的多肽可为含有亲和域和/或报告域的融合蛋白。用于在报告基因或标记物与GPCR之间(例如在GPCR的C-或N-末端)构造融合物的方法完全在所属领域的技术人员的技术范围内(例如McLean等人的《分子药理学》(Mol.Pharma.Mol Pharmacol.)第56：1182-91，1999年；Ramsay等人的《英国药理学杂志》(Br.J.Pharmacology)2001年，第315-323页)，并将不再进行任何进一步描述。明确地设想，所述融合蛋白可含有在框架中与N-末端蛋氨酸残基已被删除或已由替代氨基酸取代的GPCR融合的异种N-末端域(例如抗原决定部位标记物)。应了解，所关注的多肽首先可由内源性多肽制得，并接着可行性地连接至如上所述的合适的报告基因/标记物。

通常为了便于构建编码所关注多肽的核酸，该核酸也可含有限制位点、多克隆位点、引物结合位点、可连接末端、重组位点等。

b.宿主细胞

本发明进一步提供包含载体的宿主细胞，此载体包含核酸。合适的宿主细胞包括：原核细胞，例如细菌细胞(如大肠杆菌(E.coli))；和真核细胞，例如动物细胞(如昆虫、哺乳动物、鱼、两栖动物、鸟或爬行动物细胞)；植物细胞(如玉米或拟南芥(Arabidopsis)细胞)或真菌细胞(如酿酒酵母(S.cerevisiae)细胞)。在某些实施例中，任何适于表达编码所关注多肽的核酸的细胞都可用做宿主细胞。通常使用动物宿主细胞系，其实例是如下所述：猴肾细胞(COS细胞)、由SV40转化的猴肾CVI细胞(COS-7，ATCCCRL 165 1)；人类胚肾细胞(HEK-293[“293”]，Graham等人的《基因病毒学杂志》(Gen Virol)36：59，1977年)；HEK-293T[“293T”]细胞；幼仓鼠肾细胞(BHK，ATCC CCL 10)；中国仓鼠卵巢细胞(CHO，Urlaub和Chasin，美国科学院院刊(美国)77：4216(1980年))；叙利亚金仓鼠细胞MCB3901(ATCC CRL-9595)；小鼠塞尔托利细胞(TM4，Mather，《生殖生物学》(Biol.Reprod.)23：243-251(1980年))；猴肾细胞(CVI ATCC CCL70)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76，ATCC CRL-1587)；人类宫颈癌细胞(HELA，ATCC CCL 2)；犬肾细胞(MDCK，ATCC CCL 34)；布法罗大鼠肝细胞(BRL 3A，ATCC CRL 1442；人类肺细胞(W138，ATCC CCL 75)；人类肝细胞(hep G2，HB 8065)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562，ATCC CCL 51)；TRI细胞(Mather等人，《纽约科学院年报》383：44-68(1982年))；NIH/3T3细胞(ATCCCRL-1658)；和小鼠L细胞(ATCC CCL-1)。在某些实施例中，使用黑素细胞。黑素细胞是在低等脊椎动物中发现的的皮肤细胞。根据美国专利第5,462,856号和美国专利第6,051,386号的揭示内容，将遵循相关的物质和方法。这些专利揭示内容是以全文引用的方式并入本文中。额外细胞系对于所属领域的技术人员来说将变得显而易见，并且多种细胞系可从美国模式培养物保藏所(10801学院大街，马纳萨斯，弗吉尼亚州20110-2209)购得。

C.候选化合物的筛选

1.通用GPCR筛选分析技术

当G蛋白受体变得具有活性时，其结合至G蛋白(例如Gq、Gs、Gi、Gz、Go)并刺激GTP结合至G蛋白。此G蛋白接着充当GTP酶并缓慢地将GTP水解为GDP，由此使所述受体在正常环境下变得失去活性。然而，活化受体继续将GDP交换为GTP。可使用GTP的不可水解类似物[³⁵S]GTPγS来监控与表达活化受体的膜的增强结合。据报导，在配体不存在和存在下，可使用[³⁵S]GTPγS来监控G蛋白与膜的偶联。在所属领域的技术人员熟知并可利用的其他实例中，Traynor和Nahorski在1995年报导了此监控的实例。不考虑与受体的胞内区域相互作用的特殊G蛋白，由于此分析系统一般适用于所有G蛋白偶联受体，此系统的优选用途是候选化合物的最初筛选。

2.特异性GPCR筛选分析技术

一旦使用“通用”G蛋白偶联受体分析(即选择激动剂或反向激动剂化合物的分析)来确定候选化合物，在一些实施例中优选进一步筛选来证实此化合物在受体位点上已相互作用。例如，通过“通用”分析所确定的化合物可能未结合至受体，但其可能仅将G蛋白从胞内区域“去偶联”。

a.Gs、Gz和Gi.

Gs会刺激腺苷酸环化酶。另一方面，Gi(和Gz和Go)会抑制腺苷酸环化酶。腺苷酸环化酶可催化ATP转化为cAMP；因而，与Gs蛋白偶联的活化GPCR与增加的细胞cAMP含量有关。另一方面，与Gi(或Gz、Go)蛋白偶联的活化GPCR与减少的细胞cAMP含量有关。一般，见《(突触传递的直接机制》(Indirect Mechanisms of Synaptic Transmission)第8章，从神经元到大脑(From Neuron To Brain)(第3版)Nichols，J.G.等人编，SinauerAssociates，Inc.(1992年)。因而，可利用检测cAMP的分析来确定一种候选化合物是(例如)受体的反向激动剂(即所述化合物将减少cAMP含量)。可利用此项技术中已知的多种用于测量cAMP的方法；在一些实施例中，优选方法依赖于抗cAMP抗体在基于ELISA的模式下的用途。另一种可利用的分析类型是全细胞第二信使报告系统分析。基因启动子可推动由特殊基因编码的蛋白的表达。环AMP通过促进cAMP响应性DNA结合蛋白的结合或转录因子(CREB)来推动基因表达，其接着在被称为cAMP响应元件的特异性位点与启动子结合并推动基因表达。可构建报告系统，其具有在报告基因之前含有多个cAMP响应元件的启动子，例如β-半乳糖苷酶或荧光素酶。因而，与G s连接的活化受体引起cAMP的积聚，其接着激活基因和报告蛋白的表达。接着，可使用标准生物化学分析(Chen等人，1995)来删除报告蛋白，如β-半乳糖苷酶或荧光素酶。

b.Go和Gq

Go和Gq与磷脂酶C的活化有关，磷脂酶C的活化依次水解磷脂PIP₂、释放两种胞内信使：甘油二酯(DAG)和1，4，5-三磷酸肌醇(IP₃)。IP₃的积聚增加与Gq-和Go-相关受体的活化有关。一般，见《突触传递的直接机制》第8章，从神经元到大脑(第3版)Nichols，J.G.等人编，Sinauer Associates，Inc.(1992年)。可利用检测IP₃积聚的分析来确定候选化合物是否是(例如)Gq-和Go-相关受体的的反向激动剂(即所述化合物将降低IP₃含量)。由于Gq-依赖性磷脂酶C引起含有AP1元件的基因的活化，也可使用AP1报告分析来确定Gq-相关受体；因而，活化Gq-相关受体将证明所述基因的表达有所增加，由此反向激动剂又将证明所述表达的减少，并且激动剂将证明所述表达的增加。用于所述检测的市售分析是可用的。

3.GPCR融合蛋白

将内源性、组成性活性GPCR或非内源性、组成性活化GPCR用于筛选候选化合物以直接确定反向激动剂或激动剂的用途提供一种有趣的筛选挑战，因为根据定义，所述受体即使在缺乏所结合的内源性配体时仍具有活性。因而，为了区分(例如)在候选化合物存在下的非内源性受体和缺乏所述化合物时的非内源性受体，为使所述区分能使人们了解所述化合物是否是反向激动剂或激动剂或是否对所述受体无影响，在一些实施例中优选可增强所述区分的方法来加以利用。在一些实施例中，优选方法是使用GPCR融合蛋白。

一般地，一旦使用上文所阐述的分析技术(和所属领域的技术人员已知的其他技术)来确定非内源性GPCR已进行组成性活化，即有可能确定与内源性GPCR偶联的主要G蛋白。G蛋白与GPCR的偶联提供一条可评估的信号途径。在一些实施例中，优选使用哺乳动物表达系统来进行筛选，预期所述系统中将具有内源性G蛋白。因而，根据定义，此非内源性、组成性活化GPCR在所述系统中将连续发出信号。在一些实施例中，最好使此信号增强，从而使得在(例如)受体的反向激动剂存在下(特别是在筛选时)，更有可能使与反向激动剂接触的受体更易于区分。

GPCR融合蛋白是用于增强与非内源性GPCR偶联的G蛋白的效能。优选将GPCR融合蛋白与内源性、组成性活性GPCR或非内源性、组成性活化GPCR一起用于筛选，因为所述方法会增加所述筛选技术中产生的信号。促进形成显著的“信号噪声”比是重要的；优选将所述显著比率用于筛选本文所揭示的候选化合物。

适用于表达GPCR融合蛋白的构建物的构建在所属领域的技术人员的技术范围内。市售的表达载体和系统提供多种满足研究者特殊需要的方法。所述GPCR融合蛋白构建物的重要构建标准包括(但不限于)：GPCR序列和G蛋白序列均在框架中(内源性GPCR的序列优选位于G蛋白序列的上游)；并且GPCR的“终止”密码子被删除或替代，从而使得在GPCR表达之后，G蛋白随即也可得到表达。GPCR可直接连接至G蛋白，或在两者之间可存在间隔物残基(优选仅有12个，尽管这个数字可被所属领域的任何技术人员轻易地确定)。基于便利性考虑，优选使用间隔物。在一些实施例中，与非内源性GPCR偶联的G蛋白较佳将在GPCR融合蛋白构建物产生之前得到确定。因为只有少数G蛋白已得到确定，较佳可在包含G蛋白序列(即通用G蛋白构建物，见以下实例5(a))的构建物中插入内源性GPVR序列；在大规模筛选多种具有不同序列的不同内源性GPCR的情况下，此提供更高效率。

如上所述，预期与Gi、Gz和Go偶联的活化GPCR能抑制cAMP的形成，使得基于这些GPCR类型的分析具有挑战性[即，一旦经活化，cAMP的信号即减弱；因而使得(例如)激动剂(其将进一步减弱此信号)的直接确定具有挑战性]。如本文所揭示，人们已确定这些类型的受体有可能不基于GPCR的内源性G蛋白而产生GPCR融合蛋白，旨在建立基于环化酶的可行性分析。因而，(例如)可将内源性Gi偶联受体与Gs蛋白融合，所述的融合构建物一旦经表达即“推动”或“促使”内源性GPCR与(例如)Gs(而不是“内源性”Gi蛋白)偶联，从而可建立基于环化酶的分析。因而，对于Gi、Gz和Go偶联受体来说，在一些实施例中，当使用GPCR融合蛋白且基于腺苷酸环化酶的活性检测来进行分析时，最好由Gs(或刺激腺苷酸环化酶形成的G蛋白等同物)来建立所述融合构建物。

                               表B

  G    蛋白   cAMP产生  对GPCR活化的  影响(即组成性  IP₃积聚对    GPCR活化的影    响(即组成性活  cAMP产生    对与反向激动    剂接触的影响  IP₃积聚对与    反向激动剂接触    的影响  Gs 增加  未受影响  减少  未受影响  Gi 减少  未受影响  增加  未受影响  Gz 减少  未受影响  增加  未受影响  Go 减少  增加  增加  减少  Gq 未受影响  增加  未受影响  减少

利用与Gs、Gi、Gz或Go蛋白融合的Gq蛋白的G蛋白融合构建物是同样有效的。在一些实施例中，优选融合构建物可与Gq蛋白一起完成，其中G蛋白α-亚单位(“Gαq”)的最初6个氨基酸被删除且Gαq的C-末端的最后5个氨基酸被所关注G蛋白的相应Gα氨基酸替代。例如，融合构建物可具有与Gi蛋白融合的Gq(6个氨基酸缺失)，导致“Gq/Gi融合构建物”。此融合构建物将促使内源性Gi偶联受体与其非内源性G蛋白Gq偶联，从而可测量第二信使(例如三磷酸肌醇或甘油二酯)，而非测量cAMP的产生。

4.目标Gi偶联GPCR与信号增强子Gs偶联GPCR的共转染(基于cAMP的分析)

已知Gi偶联受体可抑制腺苷酸环化酶，并因此降低cAMP的产生含量，其可使cAMP含量的评估具有挑战性。在某些实施例中，用于测量cAMP产生的减少(表示活化时主要与Gi偶联的受体的活化)的有效技术可通过使信号增强子(例如，在活化时主要与Gs偶联的非内源性、组成性活化受体(例如TSHR-A623I；见下文))与连接有Gi的GPCR共转染来实现。显而易见，Gs偶联受体的活化可基于cAMP产生的增加而得到确定。Gi偶联受体的活化导致cAMP产生的减少。因而，共转染方法是用于有利地利用这些“相对”影响。例如，非内源性、组成性活化Gs偶联受体(“信号增强子”)与单独的表达载体的共转染提供一个基线cAMP信号(即尽管Gi偶联受体将降低cAMP含量，此“降低”是相对于由组成性活化Gs偶联信号增强子建立的cAMP含量的实质性增加来说的)。接着，通过使信号增强子与“目标受体”共转染，Gi偶联目标受体的反向激动剂将增加所测得的cAMP信号，而Gi偶联目标受体的激动剂将减弱此信号。

应独立评估使用此方法直接确定的候选化合物，从而确保这些化合物未把信号增强受体作为目标(此评估可在筛选共转染受体之前或之后进行)。

D.药物化学

候选化合物

可对此项技术中已知的任何分子调节(增加或减少)本发明GPCR活性的能力进行测试。为了确定可调节活性的化合物，可直接将候选化合物提供给表达受体的细胞。

本发明的这个实施例极其适于从化学库中筛选调节(例如抑制、拮抗或激动)受体数量或活性的分子。此等化学文库可为肽文库、肽模拟物文库、化学合成文库、重组体文库(例如噬菌体呈现文库)和基于体外翻译的文库、其他非肽合成有机文库等。本发明的这个实施例也极其适于筛选包含生物物质(包括(但不限于)血浆和组织提取物)的内源性候选化合物和筛选已知具有生物活性的内源性化合物文库。

在一些实施例中，对候选化合物的直接确定是和经过组合化学技术产生的化合物一起进行的，由此随机制备数千种用于所述分析的化合物。此候选化合物可以是化学文库中的一个成员。此文库可包含任何合适数目的独立成员，例如数十种到数百种到数千种到数百万种合适的化合物，如肽类、类肽类和其他寡聚化合物类(环状或直链)和基于模板的小分子类(例如苯并二氮类、乙内酰脲类、联芳基类、碳环和多环化合物(如萘类、吩噻嗪类、吖啶类、类固醇类等))、碳水化合物和氨基酸衍生物类、二氢吡啶类、二苯甲基类和杂环类(如三嗪类、吲哚类、噻唑烷类等)。所引用的数目和所列举出的化合物类型是作为说明，而非用于限制。优选的化学文库包含低分子量的化合物和潜在的治疗剂。

示范性化学文库可从若干来源(ArQule、Tripos/PanLabs、ChemDesign、Pharmacopoeia)购得。在一些情况下，这些化学文库是使用组合策略所产生的，其在成员化合物所连接的底物上对文库中的每一成员的特征进行编码，因而允许对作为有效调节物的分子进行直接且快速的鉴定。因而，在多种组合方法中，化合物在板上的位置规定了此化合物的组成。同样，在一个实例中，单个的板位置可具有1-20种化学物质，其可通过投入含有所关注的相互作用的孔中而进行筛选。因而，如果调节作用被删除，那么可用于分析调节活性的相互作用对的集合体越来越小。通过这些方法，可以筛选多种候选化合物。

在此项技术中，多种适于使用的多样性文库已为人们所知且可用于提供待根据本发明进行测试的化合物。或者，可使用标准方法来构建文库。此外，更一般地，也可使用结构上受到限制的有机多样性(例如非肽)文库。举例来说，可使用苯并二氮文库(例如，见Bunin等人的《美国科学院院刊》(美国)1994年，91：4708-4712)。

在本发明的另一实施例中，可使用组合化学来鉴定本发明GPCR的调节物。组合化学能够创造含有几十万种化合物的文库，其中多种化合物可在结构上类似。当高流通量筛选程序能够筛选出这些对已知目标具有亲和性的庞大文库时，已经发展出新的方法，其获得较小规模的文库，但提供最多的化学多样性(例如，见Matter的《药物化学杂志》(Journal of MedicinalChemistry)1997年，40：1219-1229)。

先前已经使用了一种组合化学方法(亲和指纹分析)来测试离散的小分子文库与规定的蛋白板的结合亲和力。将通过筛选所获得的指纹用于预测独立的文库成员与其他所关注蛋白或受体(在本发明中，是指本发明的受体)的亲和力。将此指纹与由其他已知可与所关注蛋白反应的化合物获得的指纹相比较，从而预测文库化合物是否会同样地反应。例如，在测试配体与复合物或蛋白成分的相互作用时，仅可测试与已知具有活性的其他化合物具有相似指纹的配体，而非测试庞大文库中的每一个配体(例如，参见Kauvar等人的《化学和生物学》(Chemistry and Biology)1995年，2：107-118；Kauvar的《亲和指纹，国际药物制造》(Affinity fingerprinting，Pharmaceutical Manufacturing International)1995年，8：25-28；和Kauvar的《农用化学品免疫分析的新领域中通过模式识别进行的毒性化学物质检验》(Toxic-Chemical Detection by Pattern Recognition in NewFrontiers in Agrochemical Immunoassay)，D.Kurtz、L.Stanker和J.H.Skerritt编辑，1995年，官方农业化学家协会(AOAC)(华盛顿哥伦比亚特区)，305-312)。

鉴定为调节物的候选化合物

一般地，所述筛选的结果将为具有独特核心结构的化合物；之后，这些化合物可以在(多个)优选的核心结构周围经历额外化学修饰，从而进一步增强其药用特性。所述技术已为所属领域的技术人员所知且在本专利文献中将不再详述。

在某些实施例中，所述经鉴定的调节物具有生物有效性。多种可为所属领域的技术人员利用的计算方法已研究用于预测药物的口服生物利用度[Ooms等人，《生物化学与生物物理学学报》(Biochim Biophys Acta)2002年，1587：118-25；Clark和Grootenhuis，Curr OpinDrug Discov Devel，2002年，5：382-90；Cheng等人，《计算机化学杂志》(J Comput Chem)2002年，23：172-83；Norinder和Haeberlein，《先进药物输送评论》(Adv DrugDeliv Rev)2002年，54：291-313；Matter等人，《组合化学高流通量筛选》(Comb Chem High Throughput Screen)2001年，4：453-75；Podlogar和Muegge，《现代顶尖药物化学》(Curr Top Med Chem)1：257-75；其中各文献的揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]。此外，正电子发射X射线断层成像术(PET)已成功地被多个团体用于在口服药物之后获得哺乳动物体内(包括非人类灵长类动物体内和人体内)的药物分布的直接测量，包括对口服生物利用度的评估[Noda等人的《核医疗学杂志》(J Nucl Med)2003年，44：105-8；Gulyas等人的《欧洲核医疗学和分子成像杂志》(Eur J NuclMed Mol Imaging)29：1031-8；Kanerva等人的《精神药理学》(Psychopharmacology)1999年，145：76-81；其中各文献的揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]。也可参见下文，包括实例18。

在某些实施例中，所述经鉴定具有生物有效性的调节物进一步能够穿过血脑屏障。多种可为所属领域的技术人员利用的计算方法已研究用于预测血脑屏障的渗透[Ooms等人，《生物化学与生物物理学学报》2002年，1587：118-25；Clark和Grootenhuis，Curr OpinDrug Discov Devel，2002年，5：382-90；Cheng等人，《计算机化学杂志》2002年，23：172-83；Norinder和Haeberlein，《先进药物输送评论》2002年，54：291-313；Matter等人，《组合化学高流通量筛选》2001年，4：453-75；Podlogar和Muegge，《现代顶尖药物化学》1：257-75；其中各文献的揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]。多种用于预测药物的血脑屏障渗透性的体外方法已经得到发展[Lohmann等人，《靶向药物杂志》(J Drug Target)2002年，10：263-76；Hansen等人，《药学与生物医学分析杂志》(J Pharm Biomed Anal)2002年，27：945-58；Otis等人，《药物学与毒物学方法杂志》(J Pharmocol ToxicolMethods)2001年，45：71-7；Dehouck等人，《神经化学杂志》(J Neurochem)1990年，54：1798-801；其中各文献的揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]。此外，已发展了多种用于增强穿过血脑屏障的药物传输的策略[Scherrmann，《血管药物学》(Vascul Pharmacol)2002年，38：349-54；Pardridge，《神经病学文献》(Arch Neurol)2002年，59：35-40；Pardridge，《神经元》(Neuron)2002年，36：555-8；其中各文献的揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]。最后，正电子发射X射线断层成像术(PET)已成功地被多种团体用于获得哺乳动物体内(包括非人类灵长类动物体内和人体内)的药物分布的直接测量，包括脑中药物分布的直接测量[Noda等人，《核医疗学杂志》2003年，44：105-8；Gulyas等人，《欧洲核医疗学和分子成像杂志》2002年，29：1031-8；Kanerva等人，《精神药理学》1999年，145：76-81；其中各文献的揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]。

E.本发明化合物

本发明化合物

本发明的一个方面是关于式(I)的某些二甲基八氢菲羧酸甲酰胺衍生物：

其中：

R₁-R₄是各自独立地选自由下列各基团组成的群组：H、C_1-5酰基、C_1-5酰氧基、C_2-6烯基、C_1-4烷氧基、C_1-6烷基、C_1-4烷基甲酰胺、C_2-6炔基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷基磺酰胺、C_1-4烷基亚磺酰基、C_1-4烷基磺酰基、C_1-4烷硫基、C_1-4烷基脲基、氨基、C_1-6-烷氧基羰基、甲酰胺、羧基、氰基、C_3-6环烷基、C_2-6二烷基氨基、C_2-6二烷基甲酰胺、卤素、C_1-4卤代烷氧基、C_1-4卤代烷基、C_1-4卤代烷基亚磺酰基、C_1-4卤代烷基磺酰基、C_1-4卤代烷硫基、羟基、硝基和硫醇；或其医药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。

在一些实施例中，至少一个R₁-R₄基团不是H。

在一些实施例中，当R₁、R₃和R₄是H时，R₂不是-OAc或-OCH₃。

在一些实施例中，当R₁和R₄是H且R₃是-CH₃时，R₂不是-OH。

在一些实施例中，当R₁和R₄是H且R₂是H或Br时，R₃不是-CH(CH₃)₂。

在一些实施例中，当R₁、R₂和R₃是H时，R₄不是-OAc。

在一些实施例中，R₁是H或卤素。在一些实施例中，R₁是H，并可用如下所示的式(Ib)来代表：

其中式(Ib)的每个变量具有如本文(上文和下文)所述的含义。

在一些实施例中，R₄是H或卤素。在一些实施例中，R₄是H，并可用如下所示的式(Id)来代表：

其中式(Id)的每个变量具有如本文(上文和下文)所述的含义。在一些实施例中，本发明化合物具有式(Id)，其中R₁是H；这些化合物可用如下所示的式(If)来代表：

其中式(Id)的每个变量具有如本文(上文和下文)所述的含义。

在一些实施例中，R₂是选自由下列各基团组成的群组：H、C_1-5酰基、C_1-5酰氧基、C_2-6烯基、C_1-4烷氧基、C_1-6烷基、C_1-4烷基甲酰胺、C_1-4烷基磺酰胺、C_1-4烷基亚磺酰基、C_1-4烷基磺酰基、C_1-4烷硫基、C_2-6二烷基氨基、卤素、羟基、硝基和硫醇。

在一些实施例中，R₂是选自由下列各基团组成的群组：H、C_2-6炔基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷基脲基、氨基、C_1-6-烷氧基羰基、甲酰胺、羧基、氰基、C_3-6环烷基、C_2-6二烷基甲酰胺、C_1-4卤代烷氧基、C_1-4卤代烷基、C_1-4卤代烷基亚磺酰基、C_1-4卤代烷基磺酰基和C_1-4卤代烷硫基。

在一些实施例中，R₂是H或卤素。在一些实施例中，R₂是H。

在一些实施例中，R₃是选自由下列各基团组成的群组：H、C_1-5酰基、C_1-5酰氧基、C_2-6烯基、C_1-4烷氧基、C_1-6烷基、C_1-4烷基甲酰胺、C_1-4烷基磺酰胺、C_1-4烷基亚磺酰基、C_1-4烷基磺酰基、C_1-4烷硫基、C_2-6二烷基氨基、卤素、羟基、硝基和硫醇。在一些实施例中，R₃是C_1-6烷基。在一些实施例中，R₃是选自由下列各基团组成的群组：H、C_2-6炔基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷基脲基、氨基、C_1-6-烷氧基羰基、甲酰胺、羧基、氰基、C_3-6环烷基、C_2-6二烷基甲酰胺、C_1-4卤代烷氧基、C_1-4卤代烷基、C_1-4卤代烷基亚磺酰基、C_1-4卤代烷基磺酰基和C_1-4卤代烷硫基。

本发明的一个方面是关于包含医药学上可接受的载剂或赋形剂和式(I)化合物的医药组合物：

其中：

R₁-R₄是各自独立地选自由下列各基团组成的群组：H、C_1-5酰基、C_1-5酰氧基、C_2-6烯基、C_1-4烷氧基、C_1-6烷基、C_1-4烷基甲酰胺、C_2-6炔基、C_1-4烷基氨基、C_1-4烷基磺酰胺、C_1-4烷基亚磺酰基、C_1-4烷基磺酰基、C_1-4烷硫基、C_1-4烷基脲基、氨基、C_1-6-烷氧基羰基、甲酰胺、羧基、氰基、C_3-6环烷基、C_2-6二烷基氨基、C_2-6二烷基甲酰胺、卤素、C_1-4卤代烷氧基、C_1-4卤代烷基、C_1-4卤代烷基亚磺酰基、C_1-4卤代烷基磺酰基、C_1-4卤代烷硫基、羟基、硝基和硫醇；或其医药学上可接受的盐、溶剂化物或水合物。

F.用于制造本发明化合物的合成方法

本发明化合物可易于根据多种合成方式来制备，其中所有合成方式都为所属领域的技术人员所熟悉。一种用于制备本发明化合物的方法是通过芳香族亲电取代反应，其中芳香环可经取代(即至少一个R₁-R₄基团不是H)或可不经取代(即R₁-R₄基团是H)。作为说明，由1，4a-二甲基-1，2，3，4，4a，9，10，10a-八氢-菲-1-羧酸甲酰胺(A)或其经保护衍生物开始，可在芳环上引入多种芳香族取代。化合物(A)已在下列文献中得到描述：Wenkert和同事的《美国化学学会杂志》(the Journal of the AmericanChemical Society)(1958年)，80211-17；和《美国化学学会杂志》(1958年)，80217-19，其是以全文引用的方式并入本文中。一个可使用的芳香族取代反应实例是硝化反应。多种硝化试剂和程序都可在所述文献中获得，例如在溶剂存在或不存在下使用的H₂SO₄/HNO₃、在(多种)极性溶剂(如环丁砜)中的四氟硼酸硝和其类似物。例如，使用SnCl₄、H₂(在Pd催化剂存在下)和其类似物可将化合物(B)的硝基还原为胺(C)。这些实例是如下所示：

可使胺(C)与多种试剂反应。例如，使用已知的偶联试剂可将C_1-4烷基羧酸与胺(C)偶联，从而产生甲酰胺(D)。或者，首先可将所述羧酸转化为其相应的酰基氯，并接着可使其与胺(C)反应来产生甲酰胺(D)。在另一程序中，可使C_1-4烷基异氰酸酯与胺(C)反应来产生尿素(E)。在另一程序中，通过此项技术中已知的方法可将胺(C)转化为C_1-4烷基氨基或C_2-6二烷基氨基(F)，例如用多聚甲醛(用于甲基化作用)或更高级的醛或酮进行处理，接着用NaBH₃CN或此项技术中已知的类似还原剂进行还原。或者，胺(C)可易于烷基化，例如在碱存在下通过使用C_1-4烷基卤化物来使其烷基化。应了解，试剂的当量将对产物是C_1-4烷基氨基或C_2-6二烷基氨基产生影响，使用约1.0至1.2当量的试剂将提供取代基为-NHC_1-4烷基的化合物F，而使用至少2当量将提供取代基为-N(C_1-4烷基)₂的化合物(F)。此外，可通过进行单独的单烷基化步骤而获得不对称-N(C_1-4烷基)₂取代基，其中所述烷基有所不同。这些实例是如下所示：

在另一个程序中，使用(例如)NaNO₂/H₃O⁺可将胺(C)转化为重氮盐中间体(G)，并接着使其与多种试剂反应，例如CuCl、CuBr、CuCN、氟硼酸、H₂O、Cu(I)/C_1-4烷基SH和其类似物。少数说明性实例是如下所示。

使用H₂O₂、mCPBA和其类似物可进一步将化合物(L)氧化而产生C_1-4烷基亚磺酰基和C_1-4烷基磺酰基。在另一种方式中，使用此项技术中的已知方法，可通过卤化反应直接由化合物(A)来制备化合物(H)[R₃＝Br]，例如Br₂、Br₂/AlBr₃、Br₂/FeBr₃和类似试剂。在类似方式中，使用(例如)I₂、I₂/HNO₃和类似试剂可将化合物(A)碘化。在另一实例中，使用此项技术中已知的酸性或碱性条件可易于将化合物(H)(R₃＝CN)的腈水解为甲酰胺。在另一实例中，使用此项技术中的已知方法(例如DIBAL和其类似方法)可将化合物(H)(R₃＝CN)的腈转化为醛(R₃＝CHO)。在随后的步骤中，可将所述醛氧化为羧基(R₃＝CO₂H)。在与上述方式相比的另一种方式中，在水解之后可通过达金反应(Dakin Rxn)由化合物(H)(R₃＝CHO)来制备化合物(K)。在另一实例中，在碱存在下，使用C_1-4烷基卤化物或类似试剂可易于将化合物(K)烷基化而产生C_1-4烷氧基。在另一实例中，使用此项技术中已知的方法可将化合物(K)酰基化而产生化合物(M)的C_1-5烷氧基，例如在碱存在下使用烷基酰基氯和其类似方式。在随后的程序中，可在弗里斯(Fries)重排条件下将化合物(M)重排而产生化合物(N′)和/或(N″)；合适的条件包括(例如)路易斯酸、AlCl₃、Sc(OTf)₃和其类似物。化合物(D)的氨基在光(hv)条件下也可发生类似重排。

另一种制备本发明化合物的方法可通过傅列德尔-克拉夫茨(Friedel-Crafts)酰基化反应来进行。举例来说，在路易斯酸(如AlCl₃和其类似物)存在的条件下使用C_1-5酰基卤化物可将化合物(A)酰基化而产生化合物(O)。在将酰基卤化物用于此反应的实例中，所得的化合物是苯乙酮(P)。代表性实例是如下所示：

此外，可使用此项技术中的方法来氧化化合物(P)，从而产生相应的羧基，例如KOCl、KOI、KOBr和其类似物。使用此项技术中已知的甲酰胺化或酯化方法可易于将所述羧基转化为多种基团，从而产生(例如)甲酰胺、C_1-4烷基甲酰胺、C_2-6二烷基甲酰胺和C_1-6-烷氧基羰基。在另一实例中，可用(例如)Zn(Hg)/HCl、NH₂NH₂/碱和其类似物来还原化合物(O)或(P)中的羰基，从而产生烷基。在另一实例中，使用此项技术中已知的偶联技术(例如Heck反应、Suzuki反应、Stille反应、Sonogashira偶联和其类似方法)可将化合物(H)(其中R₃＝Br或I)或作为三氟甲磺酸盐(-OSO₂CF₃)的化合物(K)转化为C_2-6烯基(化合物(Q))、C_1-6烷基(化合物(R))或C_2-6炔基(化合物(S))；合适的催化剂包括Pd(OCOCH₃)₂、PdCl₂、Pd(dba)₃、Pd(PPh₃)₄、PhCH₂Pd、Pd(dppf)Cl₂、PhCH₂Pd(PPh₃)₂Cl₂和其类似物，同样合适的其他配体(即L)包括PAr₃、dppp、binap和其类似物，这些偶联反应通常包括碱的使用，例如TEA、Na₂CO₃、K₂CO₃、NaOCOCH₃、K₃PO₄、TIOH、NaOCH₂CH₃和其类似物。

另一种方法包括磺化芳香环。例如，可将化合物(A)与氯磺酰基氯化物反应以产生化合物(T)。其他合适的方法在此项技术中已为人们所知，例如使用H₂SO₄/SO₃来产生磺酸，其接着可转化为化合物(T)。可使多种胺类与化合物(T)反应，例如使C_1-4烷基胺类与化合物(T)反应来产生化合物(U)的C_1-4烷基磺酰胺基团。

应了解，在本发明化合物的制备过程中，可需要不同的保护方案。如本文所定义，术语“经保护衍生物”是指一种分子，其中至少一个作为该分子的一部分的化学基已经改变，从而使得此基团在合成步骤中基本上稳定。一个实例可以是C(1)甲酰胺基，其可需要得到保护、转化为不同的官能团或转化为不同的官能团并在合成过程中进一步得到保护。对甲酰胺或可转化为C(1)甲酰胺的基团的保护使得甲酰胺或该基团在用于修饰芳香环的反应条件下基本稳定，并且一旦反应完成，其随后即“去保护”或“去保护并再转化”为甲酰胺。

因而，适于多种合成转化的代表性保护基在下列文献中有所揭示：Greene和Wuts的《有机合成中的保护基》(Protective Groups in OrganicSynthesis)第3版，约翰威利父子公司(纽约)，1999年，其揭示内容是以全文引用的方式并入本文中。

可用于制备中间体或本文所揭示化合物的其他合成程序的参考文献可见于下列文献：例如，Smith，M.B.和March，J.的《高等有机化学》(Advanced Organic Chgemistry)第5版，Wiley-Interscience(2001年)；或Larock，R.C.的《综合有机转换，官能团制备指导》(ComprehensiveOrganic Transformations，A Guide to Functional Group Preparations)第2版，VCH出版社(VCH Publishers，Inc.)(1999年)，两者的引文是以全文引用的方式并入本文中。

尽管以上合成说明表示一种异构体，应了解其仅具说明性且由任何所给出的反应可形成一种以上的位置异构体。例如，化合物(A)的硝化可产生一种以上如下所示的位置异构体：

可通过层析(例如(但不限于)急骤层析、低压层析、HPLC和其类似方法)、分步结晶和所属领域的技术人员所熟知的其他方法来进行位置异构体的分离。应了解，所述文献中存在多种可影响位置异构体比率的条件，例如溶剂、温度、催化剂的存在或不存在、吸电子基或给电子基的存在和其类似物。

应了解，用于制备本发明化合物的合成程序和方法实例具有代表性且决不限于特殊细节，根据本揭示内容，其他变化将为所属领域的技术人员所知或明白。

通过使用微波技术可改良各种反应，包括如本文所述的芳香族亲电取代反应和偶联反应。因此，通过使用微波照射可辅助本文所述的反应。微波照射可由多种不同的微波源产生。一种特别适于产生用于有机合成的微波的仪器是史密斯合成器(Smith Synthesizer)和来自瑞典乌普萨拉的个人化学公司AB(Personal Chemistry AB，Uppsala Sweden)的相关仪器。

另外，式(I)化合物涵盖其所有医药学上可接受的盐、溶剂化物和特殊水合物。本发明同样涵盖非对映异构体和光学异构体，例如对映异构体的混合物，其包括外消旋混合物和单独的对映异构体和非对映异构体，其是由于某些式(I)化合物的结构不对称性而产生。单独异构体的分离可通过层析(包括通过使用手性酸或碱来进行的手性层析、手性拆分)或所属领域的技术人员所熟知的各种其他方法来获得。更特殊地，通过已知方法可将外消旋混合物拆分为光学纯对映异构体，例如，使用光学活性酸来分离其非对映异构体盐，并通过用碱处理来释放光学活性胺化合物。同样地，使用光学活性碱来分离外消旋混合物的非对映异构体盐，并通过用酸进行处理来释放光学活性酸化合物，从而可拆分外消旋混合物。另一种用于将外消旋物拆分为光学纯对映异构体的方法是基于在光学活性基质或手性载体上进行的层析。因此，本发明的某些外消旋化合物可拆分为其光学对映体，例如通过d-或l-盐(酒石酸盐、扁桃酸盐或樟脑磺酸盐)的分步结晶来进行拆分。本发明化合物同样可通过使本发明化合物与光学活性胺或醇(如衍生自(+)或(-)α-甲基苄胺或其类似物的胺或醇)反应形成非对映异构甲酰胺或酯来进行拆分，通过分步结晶、手性层析或类似方法并且随后水解来进行分离。

可使用所属领域的技术人员已知的用于拆分光学异构体的额外方法，且这些方法对于所属领域的技术人员来说是显而易见的。所述方法包括下列文献所讨论的那些方法：J.Jaques、A.Collet和S.Wilen的《对映异构体、外消旋物和拆分》(Enantiomers，Racemates，and Resolutions)约翰威利父子公司，纽约(1981)。

应了解，本文所述的化学反应具有代表性且不打算以任何方式加以限制。

表1显示本发明的代表性实例。

                            表1

  化合物  化学结构  化学名称

G.医药组合物

本发明提供治疗(预防)方法，所述方法是通过向需要所述治疗(或预防)的个体投用治疗有效剂量的本发明调节物来实现[例如，也见2002年8月29日公布的PCT申请案第PCT/IB02/01461号的WO 02/066505；其中各文献的揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]。在一个优选方面，所述调节物大体上经纯化。所述个体优选动物，包括(但不限于，例如)母牛、猪、马、小鸡、猫、狗、兔、大鼠、小鼠等动物，并且优选哺乳动物且最优选人类。

可将本发明的调节物单独或以医药学或生理学上可接受的组合物(其中使用所属领域的技术人员熟知的技术将所述调节物与合适的载剂或赋形剂混合)形式投用给非人类动物[见下文实例]和/或人类。所属领域的技术人员可获得合适的医药学上可接受的载剂；例如，见《(雷氏药学大全》(Remington′s Pharmaceutical Science s)第16版，1980年，麦克出版社(Mack Publishing Co.)(Oslo等人)。

接着，提供治疗有效剂量的医药学或生理学上可接受的组合物。如将本文所述方法作为说明所确定且不受所述方法限制，治疗有效剂量是指足以使细胞死亡相关病症或者神经细胞死亡或肌细胞死亡病症的症状或生理学状态得到预防或改善的调节物的量。

我们清楚地认为，本发明的调节物可单独提供或与其他医药学或生理学上可接受的化合物组合提供。当前，其他用于治疗本发明病症的化合物已为所属领域的技术人员所熟知。本发明的一个方面涵盖根据本文所揭示实施例的用途，其进一步包含一种或一种以上选自由下列各物组成的群组的药剂：多奈哌齐(donepezil)、酒石酸卡巴拉汀(rivastigmine)、加兰他敏(galantamine)、他克林(tacrine)、吡拉西坦(piracetam)、阿尼西坦(aniracetam)、银杏(ginkgo biloba)、尼麦角林(nicergoline)、尼莫地平(minodipine)、美金刚胺(memantine)、利培酮(risperidone)、奥氮平(olanzapine)、氟哌丁苯(haloperidol)、帕罗西汀(paroxetine)、西酞普兰(citalopram)、氟西汀(fluoxetine)、氟伏沙明(fluvoxamine)、舍曲林(sertaline)、三唑酮(trazodone)和泰必利(tiapride)。在一些实施例中，所述药剂是选自由下列各物组成的群组：左旋多巴(levodopa)、左旋多巴-卡比多巴(levodopa-carbidopa)、左旋多巴-苄丝肼(levodopa-benserazide)、溴麦亭(bromocriptine)、培高利特(pergolide)、麦角乙脲(lisuride)、卡麦角林(cabergoline)、普拉克索(pramipexole)、罗平尼咯(ropinirole)、他利克索(talipexole)、阿朴吗啡(apomorphine)、恩他卡朋(entacapone)、托卡朋(tolcapone)、司立吉林(selegiline)、苯海索(trihexyphenidyl)、苯托品(benztropine)、比哌立登(biperiden)、昂他丁(arantadine)和布地品(budipine)。在一些实施例中，所述药剂是选自由下列各物组成的群组：盐酸阿米洛利(amiloride hydrochloride)、安体舒通(spironolactone)、阿替洛尔(atenolol)、比索洛尔(bisoprolol)、卡维地洛(carvedilol)、酒石酸美托洛尔(metoprololtartrat)和地高辛(digoxin)。

在一些实施例中，细胞死亡相关病症是神经细胞死亡相关病症，其是选自由下列各病组成的群组：阿尔兹海默氏病、帕金森氏病、朊毒体相关疾病、中风、运动神经元疾病、学习或记忆障碍、创伤性脑损伤、脊髓损伤和周围神经病。在一些实施例中，阿尔兹海默氏病包含轻度认知障碍(MCI)。运动神经元疾病包括(但不限于)肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性脊髓性肌萎缩症、进行性延髓麻痹和原发性侧索硬化症。周围神经病包括(但不限于)糖尿病性神经病和涉及坐骨神经的神经病。糖尿病性神经病包括(但不限于)远端对称性多发性神经病。

在一些实施例中，细胞死亡相关病症是肌细胞死亡相关病症，其是选自由下列各病组成的群组：脑淀粉样血管病、心肌梗塞和充血性心力衰竭。

给药途径

合适的给药途径包括口服、经鼻、经直肠、经粘膜或肠内给药、肠胃外传送，包括使用此项技术中已知的方法进行肌肉内、皮下、髓内注射和鞘内、直接在心室内、静脉内、腹膜内、鼻内、肺内(吸入)或眼内注射。其他特别优选的给药途径是气雾剂和长效配方。我们明确地预期本发明医药品的缓释配方，特别是长效配方。在某些实施例中，给药途径为口服。

组合物/配方

根据本发明使用的医药学或生理学上可接受的组合物和医药品可以常规方式使用一种或一种以上包含赋形剂和助剂的生理学上可接受的载剂来配制。适当的配方取决于所选的给药途径。

本文所述的某些医药品应包括医药学或生理学上可接受的载剂和至少一种本发明调节物。为了注射，可将本发明的药剂配制成水溶液，较佳调配在生理学相容性缓冲剂(例如汉克氏溶液(Hanks′s solution)、林格氏溶液(Ringer′s solution))或生理盐水缓冲剂(如磷酸盐或碳酸氢盐缓冲剂)中。为了经粘膜给药，在配方中使用适于透过屏障的渗透剂。所述渗透剂在此项技术中通常已为人们所知。

可口服的医药学或生理学上可接受的制剂包括由明胶制成的推入配合式胶囊与由明胶和增塑剂(如丙三醇或山梨糖醇)制成的柔软、密封胶囊。推入配合式胶囊可含有与填充物(如乳糖)、粘合剂(如淀粉)和/或润滑剂(如滑石粉或硬脂酸镁)和视情况加入的稳定剂混合的活性成分。在软胶囊中，可将活性化合物溶解或悬浮于合适的液体中，如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。另外，可添加稳定剂。用于口服的所有配方都应使用适合所述给药方式的剂量。

为了经口腔给药，所述组合物可采取以常规方式配制的片剂或锭剂的形式。

为了通过吸入给药，根据本发明使用的化合物适于以加压包装的喷雾器中的气雾剂喷雾传递的形式传输，同时使用合适的气体推进物，例如二氧化碳。就加压气雾剂来说，通过提供阀门来传递计量的量，从而可确定剂量单位。在吸入器或吹药器中使用的(例如)明胶胶囊和药筒可配制成含有所述化合物和合适的粉末基质(如乳糖或淀粉)的粉末混合物。

所述化合物可配制成通过注射(例如通过弹丸注射或连续输注)来用于肠胃外给药。用于注射的配方可以单位剂量的形式来提供，例如添加有防腐剂的安瓿或多剂量容器。所述组合物可采取如含水媒介物中的悬浮液、溶液或乳状液的形式，并且可含有如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂的调配剂。

用于肠胃外给药的医药学或生理学上可接受的配方包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。含水悬浮液可含有增加悬浮液粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或右旋糖酐。所述悬浮液同样可视情况含有合适的稳定剂或增加化合物溶解度的试剂，从而允许制备高浓度溶液。

或者，活性成分在使用之前可以粉末或冻干形式与合适的媒介物(如无菌无热原的水)组成制剂。

除了先前所描述的剂型之外，所述化合物也可配制为长效制剂。可通过植入(例如皮下植入或肌肉内植入)或通过肌肉内注射来投用所述长期起作用的配方。因而，举例来说，所述化合物可与合适的聚合或疏水性物质(例如，在可接受的油中的乳状液)或离子交换树脂一起配制，或配制为微溶性衍生物，例如微溶盐。

在特定实施例中，所述化合物可通过受控释放系统来传递。在一个实施例中，可使用泵(上文的Langer；Sefton，1987年，《英国生物医药CRC标准参考文献》(CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.)14：201-240；Buchwald等人，《外科》(Surgery)1980年，88：507-516；Saudek等人，《新英格兰医学杂志》(N.Engl.J.Med.)1989年，321：574-579)。在另一实施例中，可使用聚合物质(《受控释放药物的应用》(Medical Applications ofControlled Release)，Langer和Wise编辑，CRC印刷社，波卡瑞顿(BocaRaton)，佛罗里达，1974年；《控制药物的生物利用度、药物产品的设计和性能》(Controlled Drug Bioavailability，Drug Product Design andPerformance)，Smolen和Ball编辑，威利出版社(Wiley)，纽约，1984年；Ranger和Peppas，《大分子科学综述：大分子化学》(Macromol.Sci.Rev.Macromol.Chem.)1983年，23：61；Levy等人，《科学》1985年，228：190-192；During等人，《神经病学年鉴》(Ann.Neurol.)1989年，25：351-356；Howard等人，《神经外科杂志》(J.Neurosurg.)1989年，71：858-863)。其他受控释放系统在Langer的综述(《科学》1990年，249：1527-1533)中有所讨论。

另外，所述化合物可使用缓释系统来传递，例如含有治疗剂的固体疏水性聚合物的半透性基质。多种缓释物质已被确立并已为所属领域的技术人员所熟知。视化学性质而定，缓释胶囊可在数周直至100天内释放所述化合物。

视治疗剂的化学性质和生物稳定性而定，可采用额外策略来用于调节物稳定性。

所述医药学或生理学上可接受的组合物也可包含合适的固相或凝胶相载剂或赋形剂。所述载剂或赋形剂的实例包括(但不限于)：碳酸钙、磷酸钙、各种糖类、淀粉类、纤维素衍生物类、明胶和聚合物，如聚乙二醇。

有效剂量

适用于本发明的医药学或生理学上可接受的组合物包括下列组合物，其中含有有效剂量的活性成分以达到预期目的。更明确地，治疗有效剂量是指有效预防所治疗患者的疾病发展或减轻其现有症状的量。有效剂量的确定完全在所属领域的技术人员的能力范围内，特别是根据本文所提供的详细揭示内容。

对于本发明方法中所用的任何化合物来说，治疗有效剂量最初可由细胞培养分析来进行估算。例如，在动物模型中可设计一个剂量来达到循环浓度范围，其包括或涵盖一个在体外系统中表现出细胞死亡保护性的浓度点或范围。[见下文实例，用于体外分析和体内动物模型。]可使用所述资料来更精确地确定人类的有效剂量。

治疗有效剂量是指导致患者症状改善的化合物的量。所述化合物的毒性和治疗效能可通过细胞培养或实验动物的标准医药学程序来确定，例如确定LD₅₀(导致测试总体的50％死亡的剂量)和ED₅₀(有效治疗测试总体的50％的剂量)。毒性和治疗效应之间的剂量比率是治疗指数，并且其可用LD₅₀和ED₅₀之间的比率来表示。优选显示出高治疗指数的化合物。

由这些细胞培养和动物研究所获得的数据可用于设计供人类使用的剂量范围。所述化合物的剂量较佳是处于包括ED₅₀的循环浓度范围内，具有极少毒性或没有毒性。视所用的剂型和所用的给药途径而定，剂量可在此范围内变化。可由个人医师根据患者病状来选择精确剂型、给药途径和剂量。(例如，见Fingl等人的《治疗学的药理学基础》(The Pharmacological Basisof Therapeutics)第1章，1975年)。

视特殊情况而定，可个别调整剂量和时间间隔以提供足以预防或治疗本发明病症的活性化合物的血浆含量。达到这些效果所需的剂量将取决于个体特征和给药途径。

给药时间间隔同样可使用最小有效浓度值来确定。应使用在10-90％的时间(较佳在30-99％之间且最佳在50-90％之间)内使血浆含量保持在最小有效浓度以上的疗法来投用化合物。在局部给药或选择性摄取的情况下，药物的有效局部浓度与血浆浓度可不相关。

当然，所投用化合物的量将取决于所治疗患者、患者体重、痛苦的严重程度、给药方式和处方医师的判断。

可在每日或常规基础上给药来达到所要结果的本发明调节物的优选剂量范围包括(但不限于)：减少神经细胞死亡或预防或治疗肌细胞死亡的剂量是0.1-100mg/kg体重。其他优选剂量范围是0.1-30mg/kg体重。其他优选剂量范围是0.1-10mg/kg体重。其他优选剂量范围是0.1-3.0mg/kg体重。当然，这些每日剂量可在一天中按时以少量来传递或投用。应注意，这些剂量范围只是优选范围且并不限于本发明。

H.治疗方法

本发明尤其是关于减少细胞死亡相关病症的方法，特别是神经细胞死亡相关病症和肌细胞死亡相关病症，所述方法包含向需要所述治疗的个体提供本发明的调节物。在一些实施例中，所述调节物具有口服生物有效性。在一些实施例中，所述口服生物有效调节物能进一步穿过血脑屏障。在某些实施例中，此调节物是以医药学或生理学上可接受的口服组合物形式提供给个体。在某些实施例中，此个体是哺乳动物。在某些实施例中，此个体或哺乳动物是人类。

在某些实施例中，细胞死亡相关病症是神经细胞死亡相关病症。在某些实施例中，所述神经细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：阿尔兹海默氏病、帕金森氏病、朊毒体相关疾病、中风、运动神经元疾病、学习或记忆障碍、创伤性脑损伤、脊髓损伤和周围神经病。在一些实施例中，阿尔兹海默氏病包含轻度认知障碍(MCI)。运动神经元疾病包括(但不限于)肌萎缩性脊髓侧索硬化症、进行性脊髓性肌萎缩症、进行性延髓麻痹和原发性侧索硬化症。周围神经病包括(但不限于)糖尿病性神经病和涉及坐骨神经的神经病。糖尿病性神经病包括(但不限于)远端对称性多发性神经病(DSP)。

在某些实施例中，细胞死亡相关病症是肌细胞死亡相关病症。在某些实施例中，所述肌细胞死亡相关病症是选自由下列各病组成的群组：脑淀粉样血管病、心肌梗塞和充血性心力衰竭。

本发明同样关于预防或治疗细胞增生病症的方法，特别是神经细胞增生病症和肌细胞增生病症，其包含向需要所述治疗的个体提供本发明的调节物。所述调节物较佳具有口服生物有效性。在一些实施例中，所述口服生物有效调节物较佳能进一步穿过血脑屏障。此调节物较佳以医药组合物的形式提供给个体，所述组合物较佳口服。此个体较佳是哺乳动物且最佳是人类。

在某些实施例中，细胞增生病症是神经细胞增生病症。在某些实施例中，所述神经细胞增生病症是神经母细胞瘤。在其他实施例中，所述神经细胞增生病症是髓母细胞瘤。

在某些实施例中，细胞增生病症是肌细胞增生病症。在某些实施例中，所述肌细胞增生病症是选自由下列各病组成的群组：动脉粥样硬化、再狭窄和肿瘤支持性血管生成。

I.其他功效

调节(即增加、减少或阻断)FPRL2护脑素受体功能性的药剂可通过将候选化合物与FPRL2护脑素受体接触并确定候选化合物对FPRL2护脑素受体功能性的影响来进行鉴别。调节FPRL2护脑素受体功能性的化合物的选择性可通过将其对FPRL2护脑素受体的影响与其对其他G蛋白偶联受体的影响相比较来进行评估。在鉴别调节FPRL2护脑素受体功能性的化合物之后，为证实或量化其活性，所述候选化合物可进一步在其他分析中进行测试，包括(但不限于)体内模型。FPRL2护脑素受体功能性的调节物在其中涉及正常或异常FPRL2护脑素受体功能性的疾病和生理病症的治疗中具有治疗有效性。

作为FPRL2护脑素受体的配体的药剂可通过将候选化合物与FPRL2护脑素受体接触并确定此候选化合物是否结合至FPRL2护脑素受体来进行鉴别。结合至FPRL2护脑素受体的化合物的选择性可通过将其与FPRL2护脑素受体的结合和其与其他受体的结合相比较来进行评估。作为FPRL2护脑素受体功能性调节物的配体在其中涉及正常或异常FPRL2护脑素受体功能性的疾病和生理病症的治疗中具有治疗有效性。

本发明同样关于已鉴定为护脑素受体调节物或配体的本发明化合物的经放射性同位素标记型式，其不仅适用于放射成像，而且在体外和体内分析中适用于组织样品(包括人类)中的FPRL2护脑素受体的定位和定量，并通过抑制经放射性同位素标记的化合物的结合来鉴别FPRL2护脑素受体配体。本发明的进一步目的是发展新颖的FPRL2护脑素受体分析，其包含所述经放射性同位素标记的化合物。

本发明涵盖已鉴定为FPRL2护脑素受体调节物或配体的本发明化合物的放射性同位素标记型式。

本发明同样关于测试配体的放射性同位素标记型式，其适于检测与FPRL2护脑素受体结合的配体。在一些实施例中，本发明清楚地设想适于检测与FPRL2护脑素受体结合的配体的所述放射性标记测试配体的文库。在某些实施例中，所述文库包含至少约10、至少约10²、至少约10³、至少约10⁵或至少约10⁶的所述放射性标记测试化合物。本发明的进一步目的是发展新颖的FPRL2护脑素受体分析，其包含所述经放射性同位素标记的测试配体。

在一些实施例中，化合物的放射性同位素标记型式等同于此化合物，但是一个或一个以上的原子已由原子质量或原子质量数与一般可在自然中发现(即自然产生)的原子质量或原子质量数不同的原子替代或取代。可并入本发明化合物中的合适的放射性核素包括(但不限于)²H(氘)、³H(氚)、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹³N、¹⁵N、¹⁵O、¹⁷O、¹⁸O、¹⁸F、³⁵S、³⁶Cl、⁸²Br、⁷⁵Br、⁷⁶Br、⁷⁷Br、¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I和¹³¹I。并入所述放射性标记化合物中的放射性核素将取决于此放射性标记化合物的特定应用。例如，为了进行体外FPRL2护脑素受体标记和竞争分析，并入³H、¹⁴C、⁸²Br、¹²⁵I、¹³¹I、³⁵S的化合物通常将最适用。对于放射成像应用来说，通常¹¹C、¹⁸F、¹²⁵I、¹²³I、¹²⁴I、¹³¹I、⁷⁵Br、⁷⁶Br或⁷⁷Br通常将最适用。在一些实施例中，所述放射性核素是选自由下列各物组成的群组：³H、¹¹C、¹⁸F、¹⁴C、¹²⁵I、¹²⁴I、¹³¹I、³⁵S和⁸²Br。

用于将放射性同位素并入有机化合物中的合成方法适用于本发明化合物，并在此项技术中已为人们所熟知。这些合成方法(例如，将放射性水平的氚合并入目标分子中)是如下所示：

A.使用氚气来进行催化还原-此程序通常产生高比放射性产物并需要卤化或不饱和前驱物。

B.使用硼氢化钠[³H]来进行还原-此程序的成本极低并需要含有可还原官能团的前驱物，例如醛类、酮类、酯类和其类似物。

C.使用氢化铝锂[³H]来进行还原-此程序提供几乎具有理论比放射性的产物。其同样需要含有可还原官能团的前驱物，例如醛类、酮类、酯类和其类似物。

D.氚气暴露标记-此程序涉及在合适的催化剂存在下将含有可交换质子的前驱物暴露于氚气中。

E.使用碘化甲烷[³H]来进行N-甲基化-通常使用此程序，通过用高比放射性碘化甲烷[³H]处理适当的前驱物来制备O-甲基或N-甲基(³H)产物。此方法通常导致更高比放射性，例如约70-90Ci/mmol。

用于将放射性水平的¹²⁵I并入目标分子中的合成方法包括：

A.桑德迈耶(Sandmeyer)和其类似反应-此程序将芳基胺或杂芳基胺转化为重氮盐，例如四氟硼酸盐，并且随后使用Na¹²⁵I将其转化为经¹²⁵I标记的化合物。Zhu，D.-G.和同事在《有机化学杂志》(J.Org.Chem.)2002年，67：943-948中报告其代表性程序。

B.苯酚类的邻碘化(¹²⁵I)-此程序使得苯酚的邻位并入¹²⁵I，如Collier，T.L.和同事在J.Labeled Compd Radiopharm.1999年，42，S264-S266中所报告。

C.芳基和杂芳基溴化物与¹²⁵I交换-此方法通常为两个步骤的过程。第一个步骤是使用(例如)Pd催化反应[即Pd(Ph₃P)₄]或通过芳基或杂芳基锂，在三烷基卤化锡或六烷基二锡[例如(CH₃)₃SnSn(CH₃)₃]的存在下将芳基或杂芳基溴化物转化为相应的三烷基锡中间体。Bas，M.-D.和同时在J.LabeledCompd Radiophann.2001年，44：S280-S282中报告了代表性程序。

在一些实施例中，化合物的放射性同位素标记型式等同于此化合物，但添加有一个或一个以上包含放射性核素的取代基。在一些其他实施例中，所述化合物是多肽。在一些其他实施例中，所述化合物是抗体或其抗原结合片段。在一些其他实施例中，所述抗体是单克隆抗体。合适的所述放射性核素包括(但不限于)²H(氘)、³H(氚)、¹¹C、¹³C、¹⁴C、¹³N、¹⁵N、¹⁵O、¹⁷O、¹⁸O、¹⁸F、³⁵S、³⁶Cl、⁸²Br、⁷⁵Br、⁷⁶Br、⁷⁷Br、¹²³I、¹²⁴I、¹²⁵I和¹³¹I。并入所述放射性标记化合物中的放射性核素将取决于此放射性标记化合物的特定应用。例如，为了进行体外FPRL2护脑素受体标记和竞争分析，并入³H、¹⁴C、⁸²Br、¹²⁵I、¹³¹I、³⁵S的化合物通常将最适用。对于放射成像应用来说，¹¹C、¹⁸F、¹²⁵I、¹²³I、¹²⁴I、¹³¹I、⁷⁵Br、⁷⁶Br或⁷⁷Br通常将最适用。在一些实施例中，所述放射性核素是选自由下列各物组成的群组：³H、¹¹C、¹⁸F、¹⁴C、¹²⁵I、¹²⁴I、¹³¹I、³⁵S和⁸²Br。

用于添加一个或一个以上包含放射性核素的取代基的方法在熟练技术工人的能力范围内，并且包括(但不限于)通过酶催法[Marchalonic JJ，《生物化学杂志》(Biochemical Journal)1969年，113：299-305；ThorellJI和Johansson BG，《生物化学与生物物理学学报》(Biochimica etBiophysica Acta)1969年，251：363-9；其中各专利的揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]和/或通过氯胺-T/Iodogen/Iodobead法[Hunter WM和Greenwood FC，《自然》(Nature)1962年，194：495-6；Greenwood FC等人，《(生物化学杂志》1963年，89：114-23；其中各专利的揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]来添加放射性同位素碘。

特别是基于此专利文件的综述，所揭示受体和方法的其他用途对于所属领域的技术人员来说将变得显而易见。

                          实例

下列实例的提出是为解释本发明，而非限制本发明。当本文揭示特定核酸和氨基酸序列时，我们相信在获得与下文所报导的结果相同或者大体上相似的结果时，所属领域的技术人员具有对这些序列做出细微修改的能力。本文所揭示的突变方法并不依赖于此方法，而是基于算法和相隔位于人类GPCR的TM6域中的保守脯氨酸残基的位置距离。一旦此方法是可靠的，相信所属领域的技术人员具有做出细微修改的能力，从而达到与本文所揭示的结果大体上相同的结果(即组成性活化)。我们认为所述修改方法在本揭示内容的范围内。

下列实例的提供是为达到说明的目的，而非一种限制方式。所属领域的技术人员能够根据本文的揭示内容来设计等同的分析和方法，其中所有分析和方法形成本发明的部分。

涉及本发明的主题且已为所属领域的技术人员熟知的重组DNA技术可见于以下文献：例如，Maniatis T等人的《分子克隆：实验室手册》(Molecular Cloning：A Laboratory Manual)(1989)，冷泉港实验室；美国专利第6399373号；和2002年8月29日公布的PCT申请案第PCT/IB02/01461号的WO 02/066505；各文献的揭示内容是以全文引用的方式并入本文中。

实例1

人类GPCR的全长克隆

a.内源性人类FPRL2(SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2)

编码全长FPRL2(基因序列数据库登记号L14061)的多核苷酸序列是如本文所述进行克隆。SEQ ID NO：1是人类FPRL2多核苷酸编码序列。SEQ IDNO：2是已编码的FPRL2多肽。我们相信所属领域的技术人员具有对本文所展示的实验方案做出细微修改的能力，从而类似地克隆内源性人类FPRL1(基因序列数据库登记号AF054013)多核苷酸和内源性人类FPR(基因序列数据库登记号M60627)多核苷酸。

使用作为模板的基因组DNA和具有由制造商提供的缓冲剂系统的rTth聚合酶(PerMn Elmer)、0.25mM的每种引物和0.2mM的每4种核苷酸来进行PCR。循环条件是在94℃下历时1分钟、在64℃下历时1分钟和在72℃下历时1分钟20秒钟的30个循环。5′PCR引物在该序列中含有EcoRI位点：

5′-AAAGAATTCAGGTGTGGGAAGATGGAAACC-3′(SEQ ID NO：3)。

3’引物在该序列中含有BamHI位点：

5′-AAAGGATCCCCGACCTCACATTGCTTGTA-3′(SEQ ID NO：4)。

1.1kb PCR片段是用EcoRI和BamHI来消化并且克隆到pCMV表达载体的EcoRI-BamHI位点中。

b.HA/V5双标记内源性人类FPRL2(SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6)

编码全长FPRL2多肽并具有N末端HA抗原决定部位标记物和安置在C末端的V5抗原决定部位标记物的多核苷酸是如下文所述进行克隆。HA抗原决定部位标记物是氨基酸序列MYPYDVPDYA；V5抗原决定部位标记物是氨基酸序列GKPIPNPLLGLDST。SEQ ID NO：5是具有5′-末端HA抗原决定部位标记物和安置在3’位置的V5抗原决定部位标记物的人类FPRL2多核苷酸编码序列。SEQ ID NO：6是已编码的HA/V5双标记FPRL2多肽。我们相信所属领域的技术人员具有对本文展示的实验方案做出细微修改的能力，从而类似地克隆HA/V5双标记内源性人类FPRL1(基因序列数据库登记号AF054013)多核苷酸和HA/V5双标记内源性人类FPR(基因序列数据库登记号M60627)多核苷酸。

使用作为模板的上述(a)中的克隆FPRL2多核苷酸和具有由制造商提供的缓冲剂系统(补充有10％DMSO)的pfu聚合酶(Stratagene)、0.25mM的每种引物和0.5mM的每4种核苷酸来进行PCR。循环条件是在94℃下历时1min、在60℃下历时1min和在72℃下历时2min的25个循环。

5′PCR引物在该序列中含有HindIII位点：

5′-CCCAAGCTTCATGGAAACCAACTTCTCCATTCCTC-3′(SEQ ID NO：7)。

3’引物在该序列中含有BamHI位点：

5′-CCCGGATCCCATTGCTTGTAACTCCGTCTCCTC-3′(SEQ ID NO：8)。

1.06kb PCR片段是用HindIII和BamHI消化并且克隆到HA/V5双标记pCMV表达载体的HindlII-BamHI位点中。

实例2

制备非内源性、组成性活化人类FPRL2(SEQ ID NO：11和SEQ ID NO：12)

我们相信所属领域的技术人员具有选择用于核苷酸序列突变的技术的能力。下文展示用来产生人类GPCR的非内源型式的方法。下文所揭示的FPRL2突变是基于一种算法，由此使隔开保守脯氨酸(或其内源性、保守性取代)残基(位于GPCR的TM6域中，在TM6/IC3界面处附近)的第十六位氨基酸(位于GPCR的IC3域中)突变，较佳地突变成为丙氨酸、组氨酸、精氨酸或赖氨酸氨基酸残基，最佳地突变成为赖氨酸残基。

非内源性、组成性活化人类FPRL2是通过使氨基酸位置240的亮氨酸残基突变成为赖氨酸而得以完成(L240K)，其中使用下列序列引物：

5′-TCCAGCCGTCCCAAACGTGTCTTCGCTGC-3′(SEQ ID NO：9；下划线处为突变序列)和

5′-CTCCTTCGGTCCTCCTATCGTTGTCAGAAGT-3′(SEQ ID NO：10)。

SEQ ID NO：11是非内源性、组成性活化(L240K)FPRL2多核苷酸编码序列。SEQ ID NO：12是已编码的非内源性、组成性活化(L240K)FPRL2多肽。见(例如)2002年9月6日公布的PCT申请案第PCT/US02/05625号的WO02068600，其揭示内容是以全文引用的方式并入本文中。

1.转化体定位^TM诱变

非内源性人类GPCR的制备可根据制造商说明书在人类GPCR上使用转化体定位^TM诱变试剂盒(Clontech)来完成。利用两种诱变引物，最佳是产生赖氨酸突变的赖氨酸诱变寡核苷酸和选择标记寡核苷酸。为方便起见，也以标准形式来标记并入人类GPCR中的密码子突变。

2.QuikChange    定位^TM诱变

非内源性人类GPCR的制备也可通过使用QuikChange^TM定位^TM诱变试剂盒(Stratagene，根据制造商说明书)来完成。较佳将内源性GPCR用作模板并且利用两种诱变引物，并且最佳是赖氨酸诱变寡核苷酸和选择标记寡核苷酸(包括在试剂盒中)。为方便起见，以标准形式来标记并入新型人类GPCR中的密码子突变和各种寡核苷酸。

实例3

受体表达

尽管多种细胞可用于蛋白表达技术，最佳是利用哺乳动物细胞或者黑素细胞。首要原因是基于实用性，即如果有可能，使用(例如)酵母细胞来表达GPCR会在方案中引入非哺乳动物细胞，其可能不(实际上就酵母来说，不)包括进化用于哺乳动物系统的受体偶联、遗传机制和分泌途径，因而在非哺乳动物细胞中获得的结果即使可用，也不如由哺乳动物细胞或黑素细胞所获得的结果较佳。对于哺乳动物细胞来说，CHO、COS-7、MCB3901、293和293T尤其较佳，尽管所用的特定哺乳动物细胞可基于技术工人的特殊需要。在一些实施例中，心肌细胞是较佳的。见下文涉及黑素细胞的部分，包括实例11。

a.瞬时转染

第一天，析出6×10⁶个293细胞/10cm培养皿。第二天，准备两支反应管(各管的容积与每个培养板相称)：通过在0.5ml不含血清的DMEM(GibcoBRL)中混合4μg DNA(例如pCMV载体；带有受体cDNA的pCMV载体)来制备管A；通过在0.5ml不含血清的DMEM中混合24μl脂转染胺(GibcoBRL)来制备管B。将管A和B倒置(数次)来使其混合，随后在室温下培养30-45分钟。该混合物称作“转染混合物”。用1XPBS来洗涤所涂的293细胞，然后添加5ml不含血清的DMEM。向细胞中添加1ml转染混合物，随后在37℃下/5％CO₂中培养4小时。通过抽吸来移除转染混合物，然后添加10ml的DMEM/10％胎牛血清。在37℃下/5％CO2中培养细胞。培养48小时以后，收集细胞并将其用于分析。

b.稳定细胞系

将大约12×10⁶个293细胞涂于15cm组织培养板上。使其在含有10％胎牛血清和1％丙酮酸钠、L-谷氨酰胺和抗生素的DME高葡萄糖培养基中生长。在涂覆293细胞之后24小时(或达到约80％汇合度时)，使用12μg DNA(例如带有受体cDNA的pCMV载体)来转染所述细胞。将12μg DNA与60μl脂转染胺和2ml不含血清的DME高葡萄糖培养基结合。自培养板中吸出培养基，并将细胞用不含血清的培养基洗涤一次。将DNA、脂转染胺和培养基混合物与10ml不含血清的培养基一起添加到培养板中。在37摄氏度下培养四到五小时以后，吸出培养基并添加25ml含血清的培养基。在转染以后二十四小时，再次吸出培养基并添加含血清的新鲜培养基。在转染以后四十八小时，吸出培养基并添加含有遗传霉素(G418药物)的含血清的新鲜培养基，其最终浓度为。将大约12×10⁶个293细胞涂于15cm组织培养板上。使其在含有10％胎牛血清和1％丙酮酸钠、L-谷氨酰胺和抗生素的DME高葡萄糖培养基中生长。在涂覆293细胞之后24小时(或达到约80％汇合度时)，使用12μg DNA(例如带有受体cDNA的pCMV载体)来转染所述细胞。将12μg DNA与60μl脂转染胺和2ml不含血清的DME高葡萄糖培养基结合。自培养板中吸出培养基，并将细胞用不含血清的培养基洗涤一次。将DNA、脂转染胺和培养基混合物与10ml不含血清的培养基一起添加到培养板中。在37摄氏度下培养四到五小时以后，吸出培养基并添加25ml含血清的培养基。在转染以后二十四小时，再次吸出培养基并添加含血清的新鲜培养基。在转染以后四十八小时，吸出培养基并添加含有遗传霉素(G418药物)的含血清的新鲜培养基，其最终浓度为500μg/ml。所述转染细胞现在正经历对含有G418抗性基因的阳性转染细胞的选择。在选择发生时，每四到五天更换培养基。在选择期间，使细胞生长以产生稳定群体，或使其分裂以用于稳定克隆选择。

实例4

用于确定GPCR活性的分析

多种方法可用于评估人类GPCR的活性。下列内容具有说明性；我们相信所属领域的技术人员具有确定最有益于技术工人需要的技术的能力。

1.膜结合分析：[³⁵S]GTPγS分析

当G蛋白偶联受体处于其活性状态时，无论是由于配体结合或是由于组成性活化，该受体与G蛋白偶联并刺激GDP释放和随后的GTP与G蛋白的结合。G蛋白受体复合物的α亚单位充当GTP酶并缓慢地将该GTP水解为GDP，此时该受体通常失活。活化受体持续将GDP转换为GTP。不可水解的GTP类似物[³⁵S]GTPγS可用于证明[³⁵S]GTPγS与表达活化受体的膜的结合有所增强。使用[³⁵S]GTPγS结合来测量活性的优势在于：(a)其在遗传学上可用于所有G蛋白偶联受体；(b)其最接近膜表面，从而使其不太可能去接取影响胞内级联的分子。

该分析利用G蛋白偶联受体可刺激[³⁵S]GTPγS与表达相关受体的膜的结合的能力。因而，该分析可用于直接鉴定方法以筛选内源性GPCR和非内源性、组成性活化GPCR的候选化合物。该分析是通用的，并已应用于所有G蛋白偶联受体的药物发现。

在20mM HEPES和1至约20mM MgCl₂(可对此量进行调整以优化结果，优选20mM，pH7.4)、含有约0.3至约1.2nM[³⁵S]GTPγS的结合缓冲剂(可对此量进行调整以优化结果，尽管优选1.2)和12.5-75μg膜蛋白(例如，表达Gs融合蛋白的293细胞；可对此量进行调整以优化结果)与10μM GDP(此量可变化以优化结果)中，将[³⁵S]GTPγS分析培养1小时。随后添加麦胚凝集素珠(25μl；Amersham)，并且将该混合物在室温下另外培养30分钟。随后在室温下使所述管以1500xg离心5分钟且随后在闪烁计数器中计数。

2.腺苷酸环化酶

可对设计用于基于细胞的分析的闪光培养板^TM腺苷酸环化酶试剂盒(New England Nuclear；目录号SMP004A)进行修饰以用于粗质膜。该闪光培养板孔可含有闪烁涂层，其也含有一种识别cAMP的特异性抗体。在所述孔中产生的cAMP可通过直接竞争放射性cAMP示踪剂与cAMP抗体的结合来计量。下列内容充当用于测量在表达该受体的全细胞中的cAMP含量变化的简要方案。

在瞬时转染之后约二十四小时，收集转染细胞。小心吸出培养基并丢弃。向每只细胞培养皿中缓慢加入10ml PBS，随后小心抽吸。向每只培养板中加入1ml Sigma细胞解离缓冲剂和3ml PBS。用移液管将细胞吸出该培养板，并将细胞悬浮液收集到50ml锥形离心管中。随后在室温下使细胞以1100rpm离心5分钟。小心地使细胞沉淀物再悬浮于适当体积的PBS(约3ml/培养板)中。随后，使用血细胞计对细胞计数，并添加额外的PBS以给出适当数目的细胞(最终体积为约50μl/孔)。

根据制造商说明书来制备和保存cAMP标准物和检测缓冲剂(包含1μCi示踪剂[¹²⁵I cAMP(50μl)]/11ml检测缓冲剂)。新近制备用于筛选的分析缓冲剂，并且其含有50μl刺激缓冲剂、3μl测试化合物(12μM最终分析浓度)和50μl细胞。使用之前将分析缓冲剂储存在冰上。通过将50μl cAMP标准物添加到适当孔中来起始分析，随后向孔H-11和H-12中添加50μl PBSA。向所有孔中添加50μl刺激缓冲剂。使用一种能够分散3μl化合物溶液的针头工具向适当孔中添加DMSO(或所选的候选化合物)，获得12μM测试化合物的最终分析浓度和100μl的总分析体积。随后将细胞加入孔中，并在室温下培养60分钟。随后，将含有示踪剂cAMP的100μl检测混合物加入孔中。随后将培养板额外培养2小时，然后在WallacMicroBeta闪烁计数器中计数。然后，由每个分析培养板中所含的标准cAMP曲线外推cAMP/孔的值。

3.用于Gi偶联目标GPCR的基于细胞的cAMP分析

TSHR是一种Gs偶联GPCR，其在活化时引起cAMP累积。TSHR通过氨基酸残基623的突变(即丙氨酸残基变为异亮氨酸残基)而得以组成性活化。预期Gi偶联受体可抑制腺苷酸环化酶且因而降低cAMP产生含量，其可使cAMP含量的评估具有挑战性。一种用于测量cAMP产量降低(表示Gi偶联受体的组成性活化)的有效技术最好可通过使作为“信号增强子”的非内源性、组成性活化TSHR(TSHR-A623I)(或内源性、组成性活性Gs偶联受体)与Gi连接的目标GPCR共转染以建立cAMP的基线含量来完成。一旦产生Gi偶联受体的非内源性形式，随后使目标GPCR的这种非内源性形式与该信号增强子共转染，并且此物质可用于筛选。当使用cAMP分析时，我们将利用该方法来有效地产生信号；此方法较佳是用于Gi偶联受体的候选化合物的直接鉴定。应注意，对于Gi偶联GPCR来说，当使用此方法时，目标GPCR的反向激动剂将增强该cAMP信号，而激动剂则降低该cAMP信号。

第一天，析出2×10⁴个293细胞/孔。第二天，准备两个反应管(各管的容积与每个培养板相称)：通过在1.2ml不含血清的DMEM(IrvineScientific，Irvine，CA)中混合转染到哺乳动物细胞中的各受体的2μgDNA(总计4μg DNA)(例如pCMV载体；带有突变THSR(THSR-A623I)的pCMV载体；THSR-A623I和GPCR等)来制备管A；通过在1.2ml不含血清的DMEM中混合120μl脂转染胺(Gibco BRL)来制备管B。随后使管A和B倒置(数次)以使其混合，随后在室温下培养30-45分钟。该混合物称作“转染混合物”。用1XPBS来洗涤所涂的293细胞，然后添加10ml不含血清的DMEM。随后向细胞中添加2.4ml的转染混合物，随后在37℃下/5％CO₂中培养4小时。随后，通过抽吸来移除转染混合物，然后添加25ml的DMEM/10％胎牛血清。随后在37℃下/5％CO₂中培养细胞。培养24小时之后收集细胞，并将其用于分析。

闪光培养板^TM腺苷酸环化酶试剂盒(New England Nuclear；目录号SMP004A)是设计用于基于细胞的分析，但是可根据熟练技术工人的需要来修饰以用于粗质膜。该闪光培养板孔将含有闪烁涂层，其也含有一种识别cAMP的特异性抗体。在孔中所产生的cAMP可通过直接竞争放射性cAMP示踪剂与cAMP抗体的结合来计量。下列内容充当用于测量在表达该受体的全细胞中的cAMP含量变化的简要方案。

在瞬时转染之后约二十四小时，收集转染细胞。小心吸出培养基并丢弃。向每只细胞培养皿中缓慢加入10ml PBS，随后小心抽吸。向每只培养板中加入1ml Sigma细胞解离缓冲剂和3ml PBS。用移液管将细胞吸出所述培养板，并将细胞悬浮液收集到50ml锥形离心管中。随后在室温下使细胞以1100rpm离心5分钟。小心地使细胞沉淀物再悬浮于适当体积的PBS(约3ml/培养板)中。随后，使用血细胞计对细胞计数，并添加额外的PBS以给出适当数目的细胞(最终体积为约50μl/孔)。

根据制造商说明书来制备和保存cAMP标准物和检测缓冲剂(包含1μCi示踪剂[¹²⁵I cAMP(50μl)]/11ml检测缓冲剂)。应新近制备用于筛选的分析缓冲剂，并且其含有50μl刺激缓冲剂、3μl测试化合物(12μM最终分析浓度)和50μl细胞。使用之前将分析缓冲剂储存在冰上。通过将50μl cAMP标准物添加到适当孔中来起始分析，随后向孔H-11和H12中添加50μl PBSA。向所有孔中添加50μl刺激缓冲剂。使用一种能够分散3μl化合物溶液的针头工具向适当孔中添加所选化合物(例如TSH)，获得12μM测试化合物的最终分析浓度和100μl的总分析体积。随后将细胞加入孔中，并在室温下培养60分钟。随后，将含有示踪剂cAMP的100μl检测混合物加入孔中。随后将培养板额外培养2小时，然后在WallacMicrcBeta闪烁计数器中计数。然后，由每个分析培养板中所含的标准cAMP曲线外推cAMP/孔的值。

4.基于报告基因的分析

a.CRE-Luc报告基因分析(Gs相关受体)

以每孔2×10⁴个细胞的密度将293和293T细胞涂于96孔培养板上，并根据制造商说明书在第二天使用脂转染胺试剂(BRL)来进行转染。如下所述来制备用于各6孔转染的DNA/脂质混合物：使100μl DMEM中的260ng质粒DNA缓慢地与100μl DMEM中的2μl脂质混合(该260ng质粒DNA是由以下物质组成：200ng的8xCRE-Luc报告基因质粒、仅包含内源性受体或非内源受体或pCMV的50ng pCMV和10ng GPRS表达质粒(pcDNA3中的GPRS(Invitrogen))。如下所述来制备该8XCRE-Luc报告基因质粒：通过在Bgl-HindIII位点将大鼠的促生长素抑制素启动子(-71/+51)克隆到pβgal-Basic载体(Clontech)中来获得载体SRIF-β-gal。通过腺病毒模板AdpCF126CCRE8的PCR来获得cAMP响应元件的八个(8)复制体(见7《人类基因治疗》(Human Gene Therapy)1883(1996))，并在Kpn-BglV位点将其克隆到SRIF-β-gal载体中，得到8xCRE-β-gal报告载体。由下列方式来产生8XCRE-Luc报告基因质粒：在HindIII-BamHI位点用获自pGL3-基本载体(Promega)的荧光素酶基因来替代8xCRE-β-gal报告载体中的β-半乳糖苷酶基因。在室温下培养30分钟之后，以400μl DMEM来稀释该DNA/脂质混合物并将100μl的稀释混合物添加到各孔中。在细胞培养箱中培养4小时以后，将含有10％FCS的100μl DMEM添加到各孔中。第二天，用200μl/孔的含有10％FCS的DMEM来给转染细胞换液。八(8)小时以后，在以PBS洗涤之后将所述孔换为100μl/孔不含酚红的DMEM。第二天，根据制造商说明书使用LucLite^TM报告基因分析试剂盒(Packard)来测量荧光素酶活性，并在1450MicroBeta^TM闪烁和荧光计数器(Wallac)上读数。

b.AP1报告基因分析(Gq相关受体)

一种检测Gq刺激作用的方法是依赖于Gq依赖性磷脂酶C的已知性质，所述性质使得其启动子中含有AP1元件的基因活化。Pathdetect AP-1顺式报告系统(Stratagene，目录号219073)可根据上文中关于CREB报告基因分析所述的方案来利用，但是磷酸钙沉淀物的组分是410ng pAP1-Luc、80ng pCMV受体表达质粒和20ng CMV-SEAP。

c.SRF-LUC报告基因分析(Gq相关受体)

一种检测Gq刺激作用的方法是依赖于Gq依赖性磷脂酶C的已知性质，所述性质使得其启动子中含有血清响应因子的基因活化。PathdetectSRF-Luc报告系统(Stratagene)可用以分析(例如)COS7细胞中的Gq偶联活性。根据制造商说明书，使用哺乳动物转染^TM试剂盒(Stratagene，目录号200285)由该系统的质粒组分和编码内源性或非内源性GPCR的指示性表达质粒来转染细胞。简单地说，根据制造商说明书，在磷酸钙沉淀物上结合410ng SRF-Luc、80ng pCMV-受体表达质粒和20ng CMV-SEAP(分泌型碱性磷酸酯酶表达质粒；在转染细胞的培养基中测量碱性磷酸酯酶活性以对比样品之间的转染效率变化)。将沉淀物的一半均等分配到96孔培养板的3个孔中，使细胞在不含血清的培养基中保持24小时。在最后5小时内，用所指示的1μM血管紧张肽来培养细胞。随后使细胞溶解，并根据制造商说明书使用Luclite ^TM试剂盒(Packard，目录号6016911)和“Trilux 1450Microbeta”液体闪烁和荧光计数器(Wallac)来进行荧光素酶活性分析。可使用GraphPad Prism 2.0a(GraphPad Software Inc.)来分析数据。

d.胞内IP₃累积分析(Gq相关受体)

第一天，将包含受体(内源性及/或非内源性)的细胞涂于24孔培养板上，通常为1×10⁵个细胞/孔(尽管此数目可优化)。第二天，首先可通过使50μl不含血清的DMEM/孔中的0.25μg DNA和50μl不含血清的DMEM/孔中的2μl脂转染胺混合来转染细胞。将所述溶液缓慢混合并在室温下培养15-30分钟。用0.5ml PBS来洗涤细胞，并将400μl不含血清的培养基和转染培养基混合且添加到细胞中。随后在37℃下/5％CO₂中将细胞培养3-4小时，并且随后移除转染培养基并代之以1ml/孔的常规生长培养基。第三天，以³H肌醇来标记细胞。简单的说，移除培养基并用0.5ml PBS洗涤细胞。随后添加0.5ml不含肌醇/不含血清的培养基(GIBCO BRL)/孔和0.25uCi³H肌醇/孔，并且将所述细胞在37℃下/5％CO₂中培养16-18小时过夜。第四天，用0.5ml PBS来洗涤细胞并添加0.45ml的分析培养基(其含有不含肌醇/不含血清的培养基、10μM帕吉林、10mM氯化锂)或添加0.4ml分析培养基和50μl 10x酮色林(ket)，直至最终浓度为10μM。随后将细胞在37℃下培养30分钟。随后用0.5ml PBS来洗涤细胞，并在每孔中添加200μl新鲜/冰冷终止溶液(1M KOH；18mM硼酸钠；3.8mM EDTA)。将溶液在冰上保持5-10分钟或直至细胞溶解，并且随后用200μl新鲜/冰冷中和溶液(7.5％HCL)进行中和。随后将溶解物转移到1.5ml爱本德(eppendorf)管中，并在每个管中加入1ml氯仿/甲醇(1∶2)。将溶液振荡15秒并将上层相应用于Biorad AG1-X8^TM阴离子交换树脂(100-200个网眼)。首先，用水以1∶1.25W/V来洗涤所述树脂且将0.9ml上层相装载于管柱中。用10ml 5mM肌醇和10ml 5mM硼酸钠/60mM甲酸钠来洗涤所述管柱。用2ml 0.1M甲酸/1M甲酸铵将三磷酸肌醇洗入含有10ml闪烁混合物的闪烁小瓶中。通过用10ml 0.1M甲酸/3M甲酸铵洗涤来使所述管柱再生，并用dd H₂O漂洗两次且在4℃下储存在水中。

实例5

融合蛋白制备

a.GPCR:Gs融合构建物

可如下所述来实现GPCR-G蛋白融合构建物的设计：将大鼠G蛋白Gsα(长链形式；Itoh，H.等人的83PNAS 3776(1986))的5’和3’末端设计为其中包括HindIII(5′-AAGCTT-3′)序列。在确认正确序列(包括侧接的HindIII序列)之后，通过使用pcDNA3.1(-)(Invitrogen，目录号V795-20)的HindIII限制性位点进行亚克隆而将整个序列穿梭进入该载体中。在pcDNA3.1(-)亚克隆之后确定该Gsα序列的正确定向。然后，鉴定在HindIII序列上包含大鼠Gsα基因的修饰pcDNA3.1(-)；该载体现可用作“通用”Gsα蛋白载体。该pcDNA3.1(-)载体在HindIII位点上游含有各种熟知的限制性位点，因此有利地在Gs蛋白上游提供插入内源性组成性活性GPCR的编码序列的能力。可使用此方法来产生其他“通用”G蛋白载体且当然可利用技术人员已知的其他市售或专有载体，重要标准是GPCR的序列在G蛋白序列的上游和框内。

b.Gq(6氨基酸缺失)/Gi融合构建物

可如下所述来实现Gq(del)/Gi融合构建物的设计：删除具有TLESIM Gαq-亚单位序列的N末端六(6)种氨基酸(氨基酸2至7)，并用具有序列DCGLF的Gαi蛋白的相应氨基酸来代替具有序列EYNLV的C末端五(5)种氨基酸。使用下列引物由PCR来获得该融合构建物：

5′-gatcAAGCTTCCATGGCGTGCTGCCTGAGCGAGGAG-3′(SEQ ID NO.13)和

5′-gatcGGATCCTTAGAACAGGCCGCAGTCCTTCAGGTTCAGCTGCAGGATGGTG-3′(SEQ ID NO.14)，并且以含有具有血凝素标记物的小鼠G_αq-野生型型式的质粒63313作为模板。包括充当间隔物的带有低级帽的核苷酸。

通过下列循环将TaqPlus Precision DNA聚合酶(Stratagene)用于扩增(将步骤2至4重复35次)：95℃，2分钟；95℃，20秒；56℃，20秒；72℃，2分钟；和72℃，7分钟。PCR产物将在pCRII-TOPO载体(Invitrogen)中克隆，并使用ABI Big Dye Terminator试剂盒(P.E.Biosystems)对其排序。来自含融合构建物序列的TOPO克隆的插入物将在HindIII/BamHI位点通过2个步骤的克隆过程穿梭进入表达载体pcDNA3.1(+)中。另外，见2002年9月6日公布的PCT申请案第PCT/US02/05625号WO02068600，其揭示内容是以全文引用的方式并入本文中。

实例6

[³⁵S]GTPγS分析

A.膜制备

在一些实施例中，包含用于鉴定候选化合物(例如反向激动剂、激动剂或拮抗剂)的所关注目标GPCR的膜较佳是如下所述来制备：

a.物质

“刮膜缓冲剂”包含20mM HEPES和10mM EDTA，pH7.4；“洗膜缓冲剂”包含20mM HEPES和0.1mM EDTA，pH7.4；“结合缓冲剂”包含20mMHEPES、100mM NaCl和10mM MgCl₂，pH7.4。

b.程序

在整个程序中将所有物质保持在冰上。首先将培养基从汇合的单层细胞中抽出，随后用10ml冷PBS漂洗，然后将其抽出。其后添加5ml刮膜缓冲剂来刮细胞；随后将细胞提取物转移至50ml离心管中(在4℃下以20,000rpm离心17分钟)。其后抽出上清液，并且将沉淀物再悬浮于30ml洗膜缓冲剂中，随后在4℃下以20,000rpm离心17分钟。然后抽出上清液，并将沉淀物再悬浮于结合缓冲剂中。然后使用Brinkman Polytron^TM匀浆器使其匀化(15-20秒脉冲，直到所有物质呈悬浮形式)。本文中将此称为“膜蛋白”。

Bradford蛋白分析

匀化之后，使用Bradford蛋白分析来确定膜蛋白浓度(可将蛋白稀释至约1.5mg/ml，等分并冷冻(-80℃)以待稍后使用；冷冻时，使用方案是如下所述：在分析当天，将冷冻膜蛋白在室温下解冻，随后振荡且然后用Polytron以约12×1,000rpm匀化约5-10秒；应注意为了多次制备，在不同制剂的匀化过程中应彻底清洗匀浆器)。

a.物质

根据制造商说明书(Biorad，目录号500-0006)，使用结合缓冲剂(如上所述)、Bradford染色剂、Bradford蛋白标准物。

b.程序

制备两个管，一个包括膜且一个为“空白”对照物。各管含有800μl结合缓冲剂。其后，将10μl Bradford蛋白标准物(1mg/ml)添加至各管中，并且接着将10μl膜蛋白仅添加至一个管中(非空白管)中。其后，将200μl Bradford染色剂添加至各管中，随后振荡各管。五(5)分钟之后，重新振荡各管，并将其中物质转移至比色皿中。然后在595波长下，使用CECIL 3041分光光度计来读取比色皿。

鉴定分析

a.物质

GDP缓冲剂是由37.5ml结合缓冲剂和2mg GDP(Sigma，目录号G-7127)组成，随后连续稀释该结合缓冲剂以获得0.2μM GDP(各孔中的GDP最终浓度为0.1μM GDP)；包含候选化合物的各孔具有200μl最终体积，其是由100μl GDP缓冲剂(最终浓度，0.1μM GDP)、50μl溶于结合缓冲剂中的膜蛋白和50μl溶于结合缓冲剂中的[³⁵S]GTPγS(0.6nM)(每10ml结合缓冲剂含有2.5μl[³⁵S]GTPγS)组成。

b.程序

较佳使用96孔培养板格式来筛选候选化合物(所述化合物可在-80℃下冷冻)。将膜蛋白(或具有包括目标GPCR(作为对照物)的表达载体的膜)简单地匀化，直到呈悬浮形式。随后使用上述Bradford蛋白分析来确定蛋白浓度。随后将结合缓冲剂中的膜蛋白(和对照物)稀释至0.25mg/ml(最终分析浓度为12.5μg/孔)。其后，向Wallac Scintistrip^TM(Wallac)的各孔中添加100μl GDP缓冲剂。随后使用5μl针形工具将5μl候选化合物转移至所述孔中(意即，5μl在200μl总分析体积中之比例为1∶40，从而使候选化合物的最终筛选浓度为10μM)。另外，为了避免污染，在各转移步骤之后应将所述针形工具在三个包含水(1X)、乙醇(1X)和水(2X)的贮器中进行漂洗-每次漂洗之后应自所述工具中振荡出过量液体且以纸和无尘纸使其干燥。其后，向各孔中添加50μl膜蛋白(也采用包含不具有目标GPCR的膜的对照孔)且在室温下预培养5-10分钟。其后，向各孔中添加结合缓冲剂中的50μl[³⁵S]GTPγS(0.6nM)，继而在室温下在振荡器中培养60分钟(另外，在此实例中，培养板是用箔覆盖)。接着，在22℃下使培养板以4000RPM旋转15分钟，接着停止分析。以8通道歧管来抽吸所述培养板且用培养板盖来密封。随后使用“Prot.#37”设定在Wallac1450上读取培养板(根据制造商说明书)。

实例7

环AMP分析

通过使用基于环化酶的分析来实现另一种用于鉴定候选化合物(例如反向激动剂、激动剂或拮抗剂)的分析方法。除直接鉴定以外，该分析方法可用作独立方法以提供对上文实例6中所述的[³⁵S]GTPγS方法的结果确认。

根据下列方案，经修饰的闪光培养板^TM腺苷酸环化酶试剂盒(NewEngland Nuclear；目录号SMP004A)较佳是用于直接鉴定作为内源性或非内源性组成性活化GPCR的反向激动剂和激动剂的候选化合物。

在转染之后约三天时收集经转染细胞。通过在含有20mM HEPES(pH7.4)和10mM MgCl₂的缓冲剂中匀化悬浮细胞来制备膜。使用Brinkman Polytron^TM在冰上匀化约10秒。在4℃下，以49,000Xg将所得均质物离心15分钟。然后将所得沉淀物再悬浮于含有20mM HEPES(pH7.4)和0.1mM EDTA的缓冲剂中，匀化10秒，随后在4℃下以49,000Xg离心15分钟。然后将所得沉淀物储存在-80℃下，直到使用。在直接鉴定筛选当天，将膜沉淀物在室温下缓慢解冻，再悬浮于含有20mM HEPES(pH7.4)和10mM MgCl₂的缓冲剂中，从而得到0.60mg/ml的最终蛋白浓度(将再悬浮的膜置于冰上，直到使用)。

根据制造商说明书来制备且保存cAMP标准物和检测缓冲剂(包含2μCi示踪剂{[¹²⁵I]cAMP(100μl)/11ml检测缓冲剂)。新近制备用于筛选的分析缓冲剂，且其含有20mM HEPES(pH7.4)、10mM MgCl₂、20mM磷酸肌酸(Sigma)、0.1单位/ml肌酸磷酸激酶(Sigma)、50μM GTP(Sigma)和0.2mM ATP(Sigma)；然后将分析缓冲剂在冰上储存，直到使用。

较佳将候选化合物(3μl/孔；12μM最终分析浓度)与40μl膜蛋白(3μg/孔)和50μl分析缓冲剂一起添加至96孔培养板的孔中。然后将该混合物在室温下培养30分钟，同时缓慢振荡。

培养之后，将100μl检测缓冲剂添加至各孔中，随后培养2-24小时。然后使用“Prot.#31”，在Wallac MicroBeta^TM培养板读数器中对培养板计数(根据制造商说明书)。

作为实例而非限制，图1给出所得的代表性筛选分析培养板(96孔格式)结果。各条形图表示各孔中的不同化合物的结果，“目标GPCR”是内源性组成性活性Gs-偶联GPCR的Gsα融合蛋白构建物。图1给出的代表性结果也提供基于各培养板的平均结果的标准偏差(“m”)，并且所述平均值加上两个用于自最初筛选中选择作为“引导物”的反向激动剂的任意优选值涉及选择使响应百分数至少减少所述平均培养板响应(减去两个标准偏差)的候选化合物。相反地，用于自最初筛选中选择作为“引导物”的激动剂的任意优选值涉及选择使响应百分数至少增加所述平均培养板响应(加上两个标准偏差)的候选化合物。基于这些选择过程，直接将下列各孔中的候选化合物分别鉴定为孔A2和G9中的所述内源性GPCR的假定反向激动剂(化合物A)和激动剂(化合物B)。见图1。应明确注意，这些化合物的直接鉴定并未使用任何关于该GPCR的内源性配体的知识。通过关注基于受体功能的分析技术而非关注化合物结合亲和力，我们能够确定能减少此受体(化合物A)的功能活性并增加受体(化合物B)功能活性的化合物。

实例8

用于测量胞内钙浓度的荧光成像板读数器(FLIPR)分析

将来自各无性繁殖系的经目标受体(实验)和pCMV(阴性对照)稳定转染的细胞以5.5×10⁴个细胞/孔接种到经聚-D-赖氨酸预处理的含有完全培养基(含有10％FBS、2mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠的DMEM)的96孔培养板(Becton-Dickinson，#356640)中，以用于第二天分析。为制备Fluo4-AM(分子探针，#F14202)培养缓冲储备液，将1mg Fluo4-AM溶于467μl DMSO和467μl泊洛尼克酸(Pluoronicacid)(分子探针，#P3000)中，从而得到1mM可在20℃下储存一个月的储备液。Fluo4-AM为荧光钙示踪剂染料。

在清洗缓冲剂(1X HBSS/2.5mM丙磺舒(Probenicid)/20mM HEPES，pH7.4)中制备候选化合物。

分析时，将培养基自孔中移出且使细胞负载100μl 4μM的Fluo4-AM/2.5mM丙磺舒(Sigma，#P8761)/20mM HEPES/完全培养基(pH7.4)。在37℃/5％CO₂下，继续培养60分钟。

培养1小时以后，移出Fluo4-AM培养缓冲剂，并用100μl清洗缓冲剂将细胞清洗2次。各孔中剩下100μl清洗缓冲剂。再次将培养板置于37℃/5％CO₂下的培养箱中，历时60分钟。

使FLIPR(荧光成像板读数器，分子装置)程序化，从而在第30秒添加50μl候选化合物且在另外150秒内记录由候选化合物引起的胞内钙浓度([Ca²⁺])的瞬间变化。使用FLIPR软件，将总荧光变化数用于确定激动剂活性。所述仪器软件将荧光读数标准化，从而在零时产生等效初始读数。

在一些实施例中，包含目标受体的细胞进一步包含Gα15、Gα16或嵌合Gq/Giα单元。

尽管上文提供使用稳定转染细胞来确定激动剂活性的FLIPR分析，所属领域的技术人员将能够易于修改所述分析来表征激动剂活性。所属领域的所述技术人员也应易于理解或者可使用瞬时转染细胞。

实例9

人类FPRL2的组织分布：AFFYMETRIX基因芯片技术

将氨基酸序列提交至用于设计并制造含有寡核苷酸的微阵列的Affymetrix，从而使用其基因芯片技术来监控G蛋白-偶联受体(GPCR)的表达量。在所述微阵列上也存在用于表征来自Harvard Brain Band或由市售来源所获得的人类脑组织的探针。将RNA样品扩增，标记，与微阵列杂交，并根据制造商说明书对数据进行分析。

使用基因芯片来研究人类FPRL2的表达谱。见图2。图2是表示各种组织中的人类FPRL2表达量的图表。显然，人类FPRL2的表达涵盖脑、外围神经和心脏。脑中的表达包括前海马回、海马回和黑质。外围神经中的表达包括坐骨神经。例如，也在脾、肺、胰、骨和卵巢中发现显著FPRL2表达。

实例10

作为人类FPRL2选择性激动剂的护脑素的鉴定

使用瞬时转染CHO细胞，通过[³⁵S]GTPγS结合分析来确定人类FPRL2、FPRL1和FPR上的护脑素和[Gly14]-护脑素活性。

所用的质粒为pCMV中的HA/V5双标记内源性FPRL2、pCMV中的HA/V5双标记内源性FPRL1、pCMV中的HA/V5双标记内源性FPR和单独pCMV(见实例1)。在CHO-K1细胞上进行瞬时转染。在一个15cm汇合细胞培养皿中，将12μg质粒DNA和60μl脂转染胺(Invitrogen，Carlsbad，CA)添加至各培养板中。感染后24小时，如下所述来分离质膜。然后，如下所述来进行分析。

1.膜制备

a.物质

“刮膜缓冲剂”是由20mM HEPES和10mM EDTA(pH7.4)组成；“洗膜缓冲剂”是由20mM HEPES和0.1mM EDTA(pH7.4)组成；“结合缓冲剂”是由20mM HEPES、100mM NaCl和10mM MgCl₂(pH7.4)组成。

b.程序

在整个程序中将所有物质保持在冰上。首先将培养基从汇合的单层转染细胞中抽出，随后用10ml冷PBS漂洗，然后将其抽出。其后添加10ml刮膜缓冲剂来刮细胞；随后将细胞提取物转移至50ml离心管中(在4℃下以20,000rpm离心17分钟)。其后抽出上清液，并且将沉淀物再悬浮于30ml洗膜缓冲剂中，随后在4℃下以20,000rpm离心17分钟。然后抽出上清液，并将沉淀物再悬浮于结合缓冲剂中。然后使用Brinkman Polytron^TM匀浆器使其匀化(15-20秒脉冲，直到所有物质呈悬浮形式)。本文中将此称为“膜蛋白”。

对各实验样品(FPRL2、FPRL1、FPR、pCMV)进行蛋白确定(Bradford蛋白分析)，并用冷结合缓冲剂将膜蛋白的蛋白浓度调节至1.0mg/ml。

2.鉴定分析

a.物质

GDP缓冲剂是由37.5ml结合缓冲剂和2mg GDP(Sigma，目录号G-7127)组成，随后连续稀释结合缓冲剂以获得0.2μM GDP(各孔中的GDP最终浓度为0.1μM GDP)；包含候选化合物的各孔具有200μl最终体积，其是由100μl GDP缓冲剂(最终浓度，0.1μM GDP)、50μl溶于结合缓冲剂中的膜蛋白和50μl溶于结合缓冲剂中的[³⁵S]GTPγS(0.6nM)(每10ml结合缓冲剂含有2.5μl[³⁵S]GTPγS)组成。

b.程序

使用96孔培养板格式来研究护脑素和[Gly14-护脑素]活性。首先，将100μl GDP缓冲剂添加至Wallac Scintistrip^TM(Wallac)的各孔中。然后将5μl适当浓度的护脑素或[Gly14-护脑素]或5μl溶剂添加至各孔中。其后，将50μl膜蛋白添加至各孔(也可使用包含不含GPCR蛋白的膜的对照孔)中，并在室温下预培养5-10分钟。其后，将50μl溶于结合缓冲剂中的[³⁵S]GTP_γS(0.6nM)添加至各孔中，随后在室温下在振荡器中培养60分钟(此外，在该实例中，培养板是用箔覆盖)。然后，在22℃下使所述培养板以4000RPM旋转15分钟，接着停止该分析。以8通道歧管来抽吸所述培养板且用培养板盖来密封。随后使用“Prot.#37”设定在Wallac 1450上读取培养板(根据制造商说明书)。

3.结果

我们出乎意料地发现护脑素和[Gly14-护脑素]具有选择性且是FPRL2的强激动剂(见图3)。申请者提供作为FPRL2的第一内源性配体的护脑素(图3)。FRPL2中的护脑素EC50为约320nm，并且[Gly14]-护脑素的EC50为约72nm(图A)。这些数值比FRPL1的相应数值(图B)低一个数量级以上，其对护脑素来说为约9.24μM且对[Gly14]-护脑素来说为约1.5μM。护脑素或[Gly14]-护脑素并未显示出中高达10μM剂量的FPR显著活性(图C)。因此，这些结果进一步出乎意料地将FPRL2鉴定为护脑素选择性接合的受体。

实例11

黑素细胞技术

a.实验系统

黑素细胞是在低等脊椎动物中发现的皮肤细胞。其含有称作黑素体的色素细胞器。在G-蛋白偶联受体(GPCR)活化时，黑素细胞能够使所述黑素体沿微管网络重新分布。此色素移动的结果是细胞明显变亮或变暗。在黑素细胞中，由Gi-偶联受体活化所引起的胞内cAMP含量降低会导致黑素体迁移至细胞中心，导致颜色显著变亮。如果cAMP含量在Gs-偶联受体活化之后接着增加，那么黑素体将再次分散且细胞再次变暗。由Gq-偶联受体活化所引起的甘油二酯含量增加也可包括这种再分散。此外，该技术也适于研究某些受体酪氨酸激酶。黑素细胞在受体活化的数分钟内出现响应，并导致简单的强颜色变化。使用常规吸光率微型板读数器或适合的视频影像系统可易于检测该响应。与其他皮肤细胞不同，黑素细胞是来自神经冠且看来似乎表达信号蛋白的全部补体。这些细胞尤其表达各种G-蛋白，且因此在功能上表达几乎所有GPCR。

可使用黑素细胞来鉴定对抗GPCR的化合物，包括天然配体。此方法可通过引入一种色素细胞系的测试细胞来执行，所述测试细胞能够使其响应特定刺激的色素分散或聚集并表达GCPR外源性克隆编码。刺激物(例如，褪黑激素)可设置色素分散的初始状态，其中如果GPCR活化导致色素分散，那么该色素在测试胞内聚集。然而，用刺激物刺激该细胞来设置色素分散的初始状态，其中如果GPCR活化导致色素聚集，那么该色素将分散。然后将测试细胞与化合物接触，并确定细胞中的色素分散是否自色素分散的初始状态发生变化。因候选化合物(包括，但不限于配体)与GPCR偶联所引起的色素细胞分散将在皮氏培养皿上呈现暗色，而色素细胞的聚集将呈现亮色。

物质和方法将遵循美国专利第5,462,856号和美国专利第6,051,386号的揭示内容。这些专利揭示内容是以全文引用的方式并入本文中。

将细胞涂于96孔培养板中(每个培养板一个受体)。转染后48小时，将各培养板中的一半细胞用10nM褪黑激素处理。褪黑激素可活化黑素细胞中的内源性Gi-偶联受体，并导致色素聚集。将剩余的一半细胞转移至不含血清的培养基0.7XL-15(Gibco)中。1小时之后，不含血清的培养基中的细胞仍处于色素分散状态，而经褪黑激素处理的细胞却处于色素聚集状态。此时，用响应剂量的测试/候选化合物来处理细胞。如果所涂的GPCR结合至测试/候选化合物，那么预期黑素细胞将因响应该化合物而经历颜色变化。如果受体是Gs或Gq偶联受体，那么褪黑激素聚集的黑素细胞将经历色素分散。相反，如果受体为Gi偶联受体，那么预期色素分散细胞将经历量依赖性色素聚集。

b.FPRL2因响应护脑素而在黑素细胞中与Gi偶联

使用黑素细胞技术，我们发现人类FPRL2会与Gi或类Gi的G蛋白偶联，以剂量依赖方式响应护脑素。类Gi的G蛋白是类似Gi的G蛋白，其导致胞内cAMP含量减少。驱使黑素细胞(Gi偶联)中色素聚集的护脑素的EC50为约239nM(图4)。简单地说，使用胰蛋白酶(0.7X)自汇合烧瓶(T-185cm²烧瓶)中收集黑素细胞，并通过电穿孔技术进行转染。将FPRL2双标记(HA/V5)DNA用于转染黑素细胞。电穿孔之后，将细胞预涂于烧瓶中，历经约3-4小时以除去不能存活的细胞和碎屑。上述过程完成之后，随后使烧瓶胰蛋白酶化并将其涂在经聚-D-赖氨酸涂覆的96孔培养板上以用于分析。转染后48小时，进行所有分析，并用护脑素来评估FPRL-2活性。在整个48小时期间，将细胞保存在纤维母细胞条件培养基(CFM)中。在分析当天，将黑素细胞自CFM中移出并置于(0.7X)L-15培养基中。在分析之前将细胞曝露于室内照明下约1小时以达到平衡。在SpectraMax读数器上读取初始T＝0时的读数以评估背景吸光率。如图4所示，将剂量范围的护脑素添加至细胞中。在读取T＝60之前，将细胞曝露于这些剂量浓度下约1小时。用T＝0至T＝6时的吸光率变化％来表示黑素细胞细胞聚集的程度，该聚集表示短暂表达FPRL2的黑素细胞中的Gi偶联。

实例12

由Aβ诱导毒性来挽救小鼠原发性皮层神经元

使用Hashimoto等人的[J Neurosci(2001)21：9235-45；其揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]所述的体外模型，本发明的激动剂可显示出由Aβ诱导毒性来挽救小鼠原发性皮层神经元。使用0.1-100μM的该激动剂。一些较佳的该浓度是选自由0.1μM、0.3μM、1.0μM、3.0μM、10μM、30μM和100μM组成的群组。对安慰剂群组单独投用媒介物。护脑素和[Gly14]-护脑素是作为对照物包括在所述方案中。

如其他文献[Sudod等人的Mol Cell Neurosci(2000)16：708-23；其揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]所述，在血清不存在而N2补体存在下，在经聚-D-赖氨酸涂覆的24孔培养板(Sumitomo Bakelite，Akita，日本)中进行小鼠皮层神经元的原始培养。通过这种方法所达到的神经元纯度大于98％。用(或不用)所述激动剂将所制备的神经元(每个孔含有1.25×10⁵个细胞且每个孔含有250μl培养基)预培养16小时，并在该激动剂存在或不存在下用25μl Aβ处理72小时。Aβ是由Bachem(Budendorf，瑞士)和Peptide Institute(Osaka，日本)购得。通过台盼蓝(trypan blue)排斥分析或钙素染色法来测量细胞生存力。如其他文献[Hashimoto等人的Proc Natl Acad Sci USA(2001)98：6336-41；其揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]所述来执行钙素染色法。简单地说，将6μM钙素AM{3′，6′-二-(O-乙酰基)-2′，7′-双[N，N-双(羧甲基)氨甲基]荧光素，四乙酰氧基甲酯；Dojindo}添加至神经元中，并在钙素AM处理之后超过30分钟时，通过荧光显微术来观察或通过分光荧光计(Wallacl420 ARVOsx，多标记计数器)来测量钙素特异性荧光(激发波长，485nm；发射波长，535nm)。

本研究中所述的所有实验至少独立重复处理3次。用司徒顿t测试(Student′s t test)来进行统计分析，其中估计p＜0.05有效。

实例13

由Aβ诱导毒性来挽救人类脑血管平滑肌细胞

使用Jung和Van Nostrand的[J Neurochem(2003)84：266-72；其揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]所述的体外模型，本发明的激动剂可显示出由Aβ诱导毒性来挽救人类脑血管平滑肌细胞。使用0.1-100μM所述激动剂。一些较佳的该浓度是选自由0.1μM、0.3μM、1.0μM、3.0μM、10μM、30μM和100μM组成的群组。对安慰剂群组单独投用媒介物。护脑素和[Gly14]-护脑素是作为对照物包括在所述方案中。

如其他文献[Van Nostrand等人的Amyloid(1994)1：1-7]所述来确定并表征人类脑血管平滑肌(HCSM)细胞的原始培养。HCSM细胞是来自对照成人患者的柔脑膜血管，并显示出特异性标记物血管平滑肌细胞α-肌动蛋白、血管平滑肌细胞肌球蛋白和SM22α的强表达。在24孔培养板中，在补充有10％胎牛血清(Gemini Bio-Products，Woodland，CA)、1mM非必需氨基酸、2mM谷氨酰胺、1000U/mL青霉素、1000μg/mL链霉素(LifeTechnologies，Rockville，MD)的Dulbecco改良伊格尔(Eagle)培养基(DMEM)中培养HCSM细胞。为了进行实验，使细胞生长至接近汇合(90％)，并在处理之前用含有0.1％牛血清白蛋白(BSA)的不含血清的DMEM代替培养基来培养24小时。在该激动剂存在或不存在下，将细胞(一式三份)用新近溶解的β-淀粉样Dutch变异体(Aβ40D，25μM，American Peptide Co.，Sunnyvale，CA)处理6天。使用倒置系统Olympus IX70相差显微镜(OlympusAmerica Inc.，Lake Success，NY)对细胞进行常规检验。

根据制造商方案(Molecular Probes，Eugene，OR)，使用荧光活/死分析来评估细胞生存力。简单地说，在该激动剂存在或不存在下用Aβ40D处理之后，使细胞曝露于钙素Am和溴乙非啶同二聚体-1中，并使用倒置系统Olympus IX 70荧光显微镜进行观察。活细胞中的胞内酯酶将底物钙素AM转化成亮绿荧光产物钙素。当DNA螯合剂溴乙非啶同二聚体-1进入具有受损细胞膜的细胞中时，观察死细胞，导致亮红荧光。对于各实验来说，根据至少三个独立孔中的若干个场(n＝4-6)对活细胞和死细胞计数。

使用GraphPad INSTAT程序(San Diego，CA)来进行统计分析。

实例14

血清除尽PC12H细胞的细胞死亡的抑制作用

使用Kariya等人的[NeuroReport(2002)13：903-7；其揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]所述的体外模型，本发明的激动剂可显示出抑制血清除尽PC12h细胞的细胞死亡。使用0.1-100μM该激动剂。一些较佳的该浓度是选自由0.1μM、0.3μM、1.0μM、3.0μM、10μM、30μM和100μM组成的群组。对安慰剂群组单独投用媒介物。护脑素和[Gly14]-护脑素是作为对照物包括在所述方案中。

在37℃/5％CO₂下，将大鼠PC12h细胞保存在补充有血清的培养基(含有0.45％葡萄糖、5％胎牛血清和10％马血清的DMEM)中。然后，将这些细胞以2×10⁴个细胞/孔的密度涂在经胶原涂覆的96孔培养板上并培养24小时。为显示通过该激动剂来抑制血清除尽PC12h细胞的细胞死亡，在所述激动剂存在或不存在下将各孔中补充有血清的培养基替换为不含血清的培养基。在初步培养(0小时、12小时、24小时、36小时或48小时)之后，将所有孔中的培养基替换为含有20％MTS溶液的补充有血清的培养基，且将所述培养板在37℃下培养90分钟。在492nm下由培养板读数器来评估颜色强度，其与代谢活性细胞的数目成正比例。同时检测该激动剂对健全PC12h细胞的影响。

将本研究中所述的所有实验至少独立重复3次。用司徒顿t测试来进行统计分析。

实例15

改善由茛菪胺诱导的学习和记忆障碍

使用Mamiya和Ukai[Br J Pharmacol(2001)134：1597-9；其揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]所述的体内小鼠模型，本发明的激动剂可显示出改善由莨菪胺诱导的学习和记忆障碍。茛菪胺(毒蕈碱性乙酰胆碱受体拮抗剂)诱导的障碍模型是广泛用于评估抗健忘药对实验模型的学习能力的影响。通过腹膜内注射来投用所述激动剂。较佳剂量为0.1-100mg/kg。其他较佳剂量是选自由0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg组成的群组。对安慰剂群组单独投用媒介物。护脑素和[Gly14]-护脑素是作为对照物包括在所述方案中。

使用6-8周大的雄性ddY小鼠(Nihon SLC Co.，Shizuoka，日本)。将动物放置在受控环境(23±1℃，50±5％湿度)中并随意提供食物和水。提供0800至2000小时的室内照明。将莨菪胺HBr(1mg/kg，皮下注射，Sigma)和该激动剂溶于盐水中。如其他文献[Hiramatsu等人的Br J Pharmacol(1998)123：920-6；Mamiya等人的Neuropharmacology(2000)39：2391-8；Ukai等人的Eur J Pharmacol(2000)395：211-5；各文献的揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]所报道，在轻微醚麻醉下进行侧脑室(i.c.v.)注射。为确定注射位置，因为徒手注射而用印度墨水对一组小鼠进行侧脑室注射。接着，检查出在超过90％的受检动物中，墨水扩散到整个脑室中。在Y-迷宫测试之前，分别以30和15分钟来投用莨菪胺HBr(0.1ml/10g体重)和该激动剂(5μl/小鼠)。根据先前报道[Hiramatsu和Inoue的Br JPharmacol(1999)127：655-60，Ukai等人的Eur J Pharmacol(2000)395：211-5；各文献的揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]来执行所述方案。简单地说，通过监测Y-迷宫测试中的自发交替行为来检查短期记忆行为。所述迷宫是由黑漆木制成；各臂为40cm长、12cm高、3cm底宽和10cm顶宽。所述壁在最长轴线为4cm的等边三角形中心区域中集中。将该装置放置在实验室的地板上，并用距离其上方200cm的100W灯泡照射。将各小鼠放在一个臂的末端，并允许其在8分钟时间内在迷宫内自由移动，真实记录臂进口系列。交替是定义为连续进入三个臂，三个一组重叠。交替行为(％)是以真实交替与可能交替(定义为臂进口的总数减二)的比率乘以100来计算[Mamiya等人的Neuropharmacology(2000)39：2391-8；Ukai等人的Eur J Pharmacol(2000)395：211-5；各文献的揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]。实验之后，计算臂进口数目和排泄物。结果是用平均值±s.e.平均值表示。由单因素方差分析来确定统计显著性。随后进行Dunnett多重比较测试。将P＜0.05视为显著差异水平。

实例16

心脏保护

使用Fryer等人[Circ Res(1999)84：846-51；其揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]所述的体内大鼠模型，本发明的激动剂可显示出心脏保护性。通过腹膜内注射来投用所述激动剂。较佳剂量为0.1-100mg/kg。其他较佳剂量是选自由0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg组成的群组。对安慰剂群组单独投用媒介物。护脑素和[Gly14]-护脑素是作为对照物包括在所述方案中。

在本研究所有阶段使用350g至450g的雄性Wistar大鼠。在外科实验方案前1、12、24、48或72小时，通过腹膜内注射来对大鼠投用所述激动剂或盐水。随后，通过腹膜内投用硫代仲丁比妥钠(Inactin，ResearchBiochemical International；100mg/kg)来使大鼠麻醉。执行气管切开术，并用连接至啮齿动物呼吸器(CIV-101型，Columbus Instruments；或683型，Harvard Apparatus)的插管来插入气管。用补充有O₂的室内空气使大鼠以每分钟60-65次呼吸来吸氧。通过维持5-10mm水的呼气末正压来预防肺不张。通过血气系统(AVL 995pH/血气分析仪，AVL Medical Instruments)来监测动脉pH值、P_CO2和P_O2(作为对比，15分钟堵塞和60与120分钟再灌注)，并通过调节呼吸率和/或潮气量将动脉pH值、P_CO2和P_O2维持在正常生理范围(pH7.35至7.45；P_CO225至40mm Hg；P_O280至110mm Hg)内。通过使用热垫将体温维持在38℃，并因需要将动脉血pH值维持在正常生理水平而经静脉内投用碳酸氢盐。

将导管插入右颈动脉中，并由连接至Grass(7型)多种波动描记器的Gould PE50或Gould PE23压力传感器来测量血压和心率。将导管插入右颈静脉中以用于灌输盐水、碳酸氢盐和药物。在第五肋间隙处执行左开胸术，随后执行心包切开术并调整左心耳以露出左冠状动脉位置。使绷带(6-0普罗纶)通过左心耳正下方区域至左心室右部的冠状动脉下方。使缝合端穿过丙烯管以形成一个圈套器。通过将缝合端拉紧并用止血器夹紧心外膜表面上的德奈尔(dnare)来堵塞冠状动脉。通过心外膜发绀和随后的血压降低来验证心脏冠状动脉阻塞。通过松开止血器并松开圈套器来开始心脏再灌注，并通过肉眼观察心外膜充血响应来确认。在所述实验方案开始之前允许稳定心率和血压。

将大鼠随机分成指定实验组。在30分钟局部缺血和2小时再灌注(I/R)之前24小时，对对照大鼠投用盐水。为显示由该激动剂引起的敏锐心脏保护功能，在持续局部缺血损伤之前1小时投用所述激动剂。为显示预防急性局部缺血损伤的迟发心脏保护功能，在I/R之前12或24小时以指定剂量来投用所述激动剂。也可在I/R之前48或72小时以指定剂量来投用所述激动剂。

在完成上述方案时，堵塞冠状动脉并通过用经过颈静脉投用的专利蓝染料进行负染色来确定危险区(AAR)。用15％KCl溶液使大鼠安乐死。切除心脏，并从剩余组织剖开左心室且随后将其切成6个横切薄片。此方法考虑到相对于AAR染成蓝色的正常区的描述，该正常区随后保持粉色。从非局部缺血区切除AAR，并将所述组织放置在独立小瓶中，并在37℃下用1.0％2，3，5-三苯基氯化四唑(TTC)染色剂在100mmol/L磷酸盐缓冲剂(pH7.4)中培养15分钟。TTC是可存活和不可存活组织的指示剂。TTC是由可存活心肌中存在的脱氢酶来还原并产生甲腊沉淀物，其将导致深红色，然而使梗塞区仍为灰色{Klein等人的Virchows Arch[Pathol Anat](1981)393：287-97}。将组织在含有10％甲醛的小瓶中储存一整夜，并在解剖显微镜(CambridgeInstruments)照明下自AAR剖开梗塞心肌。通过重量分析法来确定梗塞大小(IS)、AAR和左心室重量。AAR是用LV百分数(AAR/LV)来表示，并且IS是用AAR百分数(IS/AAR)来表示。

如果大鼠出现严重低血压(＜30mm Hg收缩压)，或如果由于代谢性酸中毒或碱中毒而不能维持正常生理范围内的足够血气值，那么将这些大鼠排除在数据分析之外。

将所有值用平均值±SEM表示。使用单因素方差分析和Bonferroni测试来确定血液动力学、IS和AAR的群组中是否存在任何显著差异。在P＜0.05处确定显著差异。

据预想，或者可使用(例如)体内非人类灵长类动物模型来使本发明的激动剂显示出心脏保护性。

实例17

抑制支架内新生内膜生长

雷帕霉素-和紫杉醇-洗脱支架与动物研究和最初人类实验中降低的再狭窄率有关。雷帕霉素已显示出可抑制体外血管平滑肌细胞增殖。用于抑制支架内新生内膜生长的有效系统治疗应用是下列能力，即一旦基于局部支架的药物耗尽(即完全从支架释放)，即提供重复激发剂用药。

使用Farb等人[Circulation(2002)106：2379-84；其揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]所述的体内兔模型，本发明的反向激动剂或拮抗剂可显示出抑制支架内新生内膜生长。该反向激动剂或拮抗剂可显示出减少新生内膜厚度、新生内膜面积和支架狭窄百分数，并可增加管腔面积。根据经口管饲法，每日以2ml/kg的量来投用所述反向激动剂或拮抗剂。较佳剂量为0.1-100mg/kg。其他较佳剂量是选自由0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg组成的群组。在植入支架之前1-3天开始用药。对安慰剂组单独投用媒介物。

在荧光检查法指导下，对已麻醉的兔子执行两侧髂动脉囊损伤，随后放置2×12-mm MULTI-LINK(Guidant Corp)支架(6ATM，30秒充气膨胀，支架与动脉的比率为1.2∶1)。所有动物每日口服40mg阿司匹林，直到安乐死。

植入支架之后28天，麻醉动物并在安乐死前完成髂动脉的血管造影，随后执行安乐死和灌流固定。用取自各支架的近侧、中部和远侧部分的切片将已植入支架的动脉放入甲基丙烯酸甲酯中。处理仅位于支架近侧和远侧的3mm动脉段并将其染色，以评估边缘效应。将所有区域用H&E和Movat五铬染色剂染色。为评估细胞增殖，如其他文献[Farb等人的Int J RadiatOncol Biol Phys(2000)48：889-98]所述，使动物在安乐死之前服用溴脱氧尿苷(BrdU)。中部支架切片也用RAM11(Dako Corp)抗体染色以鉴定巨噬细胞和纤维素(American Diagnostica，Inc.)。为评估支架内皮化，如上所述在其他兔子中植入支架，随后纵向切去支架。

盲目检查所有动脉段。如前所述[Farb等人的Int J Radiat Oncol BiolPhys(2000)48：889-98]对所有植入支架的切片执行用计算机处理的面积法。总细胞数目、RAM11-阳性巨噬细胞和纤维素是由中部支架切片的整个新生内膜来定量。新生内膜细胞增殖指数(增殖细胞百分数)是定义为BrdU阳性新生内膜细胞与总新生内膜细胞数目的比率。内皮化的支架内膜面积百分数是根据整个支架表面的扫描电子显微镜图来测量。数据是用平均值±SD表示。残缺新生内膜愈合是定义为存在纤维素或发炎或不存在内皮细胞。使用ANOVA来完成组织数据的统计分析。将p＜0.05视为统计学有效。

实例18

抑制神经母细胞瘤生长

在年龄低于5岁的儿童中，神经母细胞瘤占所有癌症的14％。大多数神经母细胞瘤是侵袭性转移性肿瘤，尽管采用加强型多手段治疗，其临床控制结果仍较差。

使用Ponthan等人[Int J Cancer(2003)104：418-24；其揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]所述的异种大鼠模型，本发明的反向激动剂或拮抗剂可显示出抑制体内神经母细胞瘤生长。通过连续经口治疗，用胃进食管来投用所述反向激动剂或拮抗剂。较佳剂量为每日0.1-100mg/kg。较佳剂量为0.1-100mg/kg。其他较佳剂量是选自由0.1mg/kg、0.3mg/kg、1.0mg/kg、3.0mg/kg、10mg/kg、30mg/kg和100mg/kg组成的群组。在植入支架之前1-3天开始给药。对安慰剂群组单独投用媒介物。

将裸大鼠麻醉并在各自后腿注射20×10⁶个人类SH-SY5Y神经母细胞瘤细胞。当通过触诊可知和/或可见明显肿瘤出现时，每两天用卡尺测量肿瘤长度(沿肿瘤长轴)和宽度(垂直于长轴)。肿瘤体积是如下计算：长度×宽度2×0.44[Wassberg等人的Pediatr Res(1997)41：327-33]。真实肿瘤重量在尸检中记录。使用测量体积除以治疗开始时在肿瘤出现处所测量的体积来计算肿瘤体积指数。

当动物中的肿瘤量达到0.3ml时(指定为第0天)，将大鼠随机分成一或两组并开始治疗。当治疗开始时，仅对那些达到0.3ml的肿瘤量进行追踪和响应评估。治疗持续12天。在第2、4、6、8、10和12天测量肿瘤量，计算肿瘤量指数，并绘出该肿瘤量指数百分数相对于仅投用媒介物的肿瘤量指数百分数的曲线。

使用Mann-Whitney U测试对两个独立样品进行统计分析。除非另有说明，否则所有p值是指双侧概率。

最近，在[Lindskog等人的Br J Cancer(2003)88：478-85]中已描述一种使用质子核磁共振光谱法来评估人类神经母细胞瘤的异种移植模型中的肿瘤生存力的替代性非侵害方法。

实例19

口服生物可利用性

所属领域的技术人员已熟知并可使用供直接评估口服生物可利用性的物理化学分析方法[例如，见(不限于)Wong PC等人的Cardiovasc Drug Rev(2002)20：137-52和Buchan P等人的Headache(2002)Suppl 2：S54-62；各文献的揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]。作为进一步说明且不加限制，该替代性分析方法可包含液相层析串联质谱法[Chavez-Eng CM等人的J ChromatogrB Analyt Technol Biomed Life Sci(2002)767：117-29；Jetter A等人的Clin Pharmacol Ther(2002)71：21-9；Zimmerman JJ等人的J Clin Pharmacol(1999)39：1155-61；和Barrish A等人的RapidCommunMass Spectrom(1996)10：1033-7；各文献的揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]。最近，正电子发射断层显像(PET)已成功用于在口服药物之后获得哺乳动物体内药物分配的直接测量，包括口服生物可利用性[Gulyas等人的Eur J Nucl Med Mol Imaging(2002)29：1031-8；其揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]。

或者，根据已研究的体内数据来举例说明并不作限制，通过针对心脏保护的上文实例16的大鼠模型来测量本发明调节物的口服生物可利用性。通过经口管饲法来投用调节物，其剂量介于0.1ml/kg至100ml/kg之间。口服调节物显示出可提供心脏保护作用。调节物的效果显示为依赖剂量且可与腹膜内投药后的效果相比较。将口服之后要求达到IS/AAR的最大减少量的一半的调节物剂量与经腹膜内投药之后要求达到IS/AAR的最大减少量的一半的调节物剂量进行比较。作为说明，如果所述口服剂量是所述腹膜剂量的两倍，那么调节物的口服生物可利用性为50％。更一般地，如果所述口服剂量为θml/kg，并且所述腹膜剂量为ρml/kg，那么将调节物的口服生物可利用性视为百分数[(ρ/θ)×100]。

易于设想参考投药途径可不同于腹膜内投药。在一些实施例中，该参考投药途径为静脉内投药。

对于所属领域的技术人员来说，显然可改进上述测量方法以使用不同于心脏保护的体内动物模型。对于所属领域的技术人员来说，生物活性读数显然也可为不同于IS/ARR的参数。

实例20

血脑屏障模型

可使用脑源性细胞来确定本发明化合物穿过血脑屏障的能力。作为说明且不加限制，一种预想方法是使用Dehouck等人的[J Neurochem(1990)54：1798-801；其揭示内容是以全文引用的方式并入本文中]所述的血脑屏障模型，所述模型使用脑部毛细血管内皮细胞与星形细胞的共培养物。

如Meresse等人的[J Neurochem(1989)53：1363-1371；其是以全文引用的方式并入本文中]所述来分离并表征牛毛细血管内皮(BBCE)细胞。简单地说，在通过机械匀化而从牛脑的一个半球分离之后，将微血管接种在用牛角膜内皮细胞所分泌的胞外基质涂覆的培养皿上。接种后5天，第一批内皮细胞从毛细血管中迁移出，并开始形成微菌落。当所述菌落足够大时，将五个最大的胰岛胰蛋白酶化并在补充有15％小牛血清(Seromed)、3mM谷氨酰胺、50μg/ml艮他霉素、2.5μg/ml两性霉素B(Fungizone)和牛纤维母细胞生长因子(每隔一天添加1ng/ml)的Dulbecco改良伊格尔(Eagle)培养基(DMEM)存在下将其接种在经明胶涂覆的35mm直径培养皿上(每个培养皿一个菌落)。在汇合处自直径为35mm的培养皿中收集内皮细胞并将其接种在经明胶涂覆的60mm直径培养皿上。6-8天之后，将汇合细胞以1∶20的分裂比进行传代培养。将第三传代的细胞(约100个培养皿)储存在液氮中。

星形细胞的原始培养物是由初生大鼠大脑皮层制成。在已清除脑脊膜之后，如Booher和Sensenbrenner[Neurobiology(1972)2：97-105；其是以全文引用的方式并入本文中]所述，通过尼龙筛小心地推压脑组织。将补充有10％胎牛血清(Seromed)、2mM谷氨酰胺和50μg/ml艮他霉素的DMEM用于分裂脑组织并产生星形细胞。

将通过对Bornstein等人[Lab Invest(1958)7：134-139；其是以全文引用的方式并入本文中]所述的方法进行改进所制备的大鼠尾部胶原涂在培养板插入物(Millicell-CM；孔尺寸，0.4μM；直径，30mm；微孔)的两侧。

使用倒置的过滤器将星形细胞以2.5×10⁵个细胞/ml的浓度涂在底部。8天之后，将过滤器正放，每星期换两次培养基。接种之后三星期，星形细胞的培养物已变得稳定。然后，在经明胶涂覆的60mm直径培养皿上再次培养传代3已冷冻的BBCE细胞。将汇合细胞胰蛋白酶化并以4×10⁵个细胞的浓度将其涂在过滤器上部。用于共培养的培养基是补充有15％小牛血清、2mM谷氨酰胺、50μg/ml艮他霉素和每隔一天加入的1ng/ml牛纤维母细胞生长因子的DMEM。在这些条件下，BBCE细胞在8天内形成汇合单层。

将培养板设定为6孔培养板，其上腔室中添加有2ml缓冲剂且含有插入物的培养板中添加有2ml。将所述6孔培养板放置在37℃的震动水浴中。将本发明化合物添加到上腔室中，并在不同时间点从下腔室移出100μl。在某些实施例中，测试化合物是经放射性标记。在某些实施例中，放射性标记物为³H或¹⁴C。在一些实施例中，最终时间点为约20分钟、约30分钟、约40分钟、约50分钟、约60分钟、约70分钟、约80分钟或约90分钟。确定在不同时间点时存在于下腔室中的所有测试化合物的百分数。亮氨酸是用作通透性阳性对照物。菊淀粉是用作通透性阴性对照物。

在某些实施例中，在最终时间点对下腔室中的至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％或至少约90％的本发明化合物的确定表示本发明化合物能够穿过血脑屏障。

实例21

对化合物1作为人类FPRL2的选择性激动剂的鉴定

通过使用瞬时转染CHO细胞所进行的[³⁵S]GTPγS结合分析或通过黑素细胞分析来确定人类FPRL2、FPRL1和FPR中的化合物1活性。[³⁵S]GTPγS结合分析的详述可见于实例10。黑素细胞分析的详述可见于实例11。已发现化合物1为FPRL2的强选择性激动剂(图5)。

通过观察图6显然可知化合物1为FPRL2的强选择性激动剂。在图6中，通过腺苷酸环化酶活性来确定激动剂活性。简单地说，在5μM毛喉素存在下用指定浓度的护脑素、[Gly14]-护脑素或化合物1来处理经FPRL1或FPRL2稳定转染的HEK293细胞(10⁵个细胞/孔)。然后，如上文实例4所述来分析样品的胞内cAMP含量。然而，我们发现护脑素和[Gly14]-护脑素为FPRL1和FPRL2的激动剂(图6A)，也发现化合物1为FPRL2的选择性激动剂(图6B)。

实例22

护脑素和化合物1通过百日咳毒素-敏感机制在人类FPRL2上传递信号

使用经FPRL2稳定转染的HEK293细胞，通过腺苷酸环化酶分析来确定通过人类FPRL2传递信号的护脑素的百日咳毒素敏感性。同样确定通过人类FPRL2传递信号的化合物1的百日咳毒素敏感性。

简单地说，在5μM毛喉素存在下用指示浓度的护脑素或化合物1来处理经FPRL2稳定转染的HEK293细胞(10⁵个细胞/孔)。然后，如上文实例4所述来分析样品的胞内cAMP含量。为确定传递信号的百日咳毒素敏感性，用50ng/ml百日咳毒素将细胞预处理18-20小时，其后在用护脑素或化合物1进行分析之前用预热(37℃)PBS来清洗细胞。

通过观察图7显然可知，由护脑素(图7A)或化合物1(图7B)通过FPRL2所调节的cAMP抑制作用对百日咳具有敏感性，表明FPRL2与响应护脑素或化合物1的百日咳-敏感性G蛋白偶联。已知Gi和Go为百日咳-敏感性G蛋白。

实例23

FPRL2通过响应护脑素或化合物1的Gα16来传递信号

通过IP3分析来确定FPRL2与响应护脑素、[Gly14]-护脑素或化合物1的Gα16偶联的能力。简单地说，使用脂转染胺(Invitrogen)用6μg FPRL2质粒DNA和6μg Gα16质粒DNA瞬时转染HEK293细胞，每个15cm培养皿中含有10⁷个细胞。转染后24小时，用5μCi/ml[³H]-肌-醇将HEK293细胞标记一整夜。然后清洗细胞。通过使HEK293细胞与护脑素、[Gly14]-护脑素或化合物1接触来开始分析。如上文实例4所述来确定胞内IP₃含量。

对图8进行观察，表明通过护脑素、[Gly14]-护脑素或化合物1来使胞内IP₃含量呈剂量依赖性增加。作为阴性对照物，IP₃并未显示出通过经FPR(未显示)瞬时转染的HEK293细胞对护脑素、[Gly14]-护脑素或化合物1作出响应。

实例24

由SH-SY5Y细胞来表达FPRL2(而非FPRL1)

对人类神经母细胞瘤细胞系SH-SY5Y在通过脑源性神经生长因子(BDNF)分化之前或分化之后对FPRL2和FPRL1的表达进行确定。用维甲酸(10μM)处理5天，随后用BDNF(10ng/ml)处理2天，从而将SH-SY5Y细胞分化成为类神经元的细胞。使用对FPRL2或FPRL1的编码区具有特异性的引物，对由未分化(“SH-SY5Y”)或已分化(“SH-/BDNF”)的SH-SY5Y细胞所分离的mRNA进行RT-PCR分析。

使用MMLV反转录酶将mRNA转化为cDNA。使用Taq DNA聚合酶进行扩增。通过琼脂糖凝胶电泳法和溴化乙锭染色法来进行扩增产物的显像。由图9A显然可知，尽管可在未分化和已分化SH-SY5Y细胞中检测到FPRL2mRNA(“+RT”样品)，却不可检测到FPRL1mRNA(“+RT”样品)。在图9A中，“FPRL2”和“FPRL1”为阳性对照物，其中模板分别为FPRL2或FPRL1cDNA。“NT”为阴性对照物，其中没有DNA模板。“-RT”为阴性对照物，其中在将mRNA转化为cDNA的反应中略去反转录酶。“1Kb”对应于分子量标记物。

图9B表明用于FPRL2扩增的引物的特异性，其中当FPRL2cDNA是用作模板而FPRL1cDNA或FPR cDNA并不用作模板时，观察预期的扩增产物。结果作为溴化乙锭染色的琼脂糖凝胶的反向照片呈现在图9B中。

实例25

抑制血清除尽SH-SY5Y细胞的细胞死亡

确定护脑素或化合物1抑制血清除尽的分化SH-SY5Y细胞的细胞死亡的能力。简单地说，用维甲酸(10μM)处理5天，随后用BDNF(10ng/ml)处理2天，从而将SH-SY5Y细胞分化成类神经元细胞。然后，在护脑素或化合物1存在或不存在下将细胞在不含血清的培养基中培养6天。通过乳酸盐脱氢酶(LDH)分析(Roche，Indianapolis，IN；目录号1644793)或台盼蓝染色法来确定细胞生存力。LDH为稳定存在于所有细胞中的胞浆酶，其在质膜受到损害时快速释放。LDH的含量与可存活细胞的数目成反比例。根据制造商说明书来进行LDH分析。

图10A提供LGH分析的结果且图10B提供台盼蓝染色法的结果。观察图10，表明护脑素和化合物1(“Cmpd1”)可抑制血清除尽SH-SY5Y细胞的细胞死亡。

实例26

22C11(抗APP抗体)诱导的原代小鼠皮层神经元的细胞死亡的抑制作用

确定护脑素或化合物1抑制由抗体22C11诱导的原代小鼠皮层神经元的细胞死亡的能力。22C11是单克隆抗体(mAb)，其结合于人类、大鼠或小鼠β淀粉样前体蛋白(APP)的胞外域(Boehringer Mannheim；Indianapolis，IN)。22C11已显示出诱导原代大鼠皮层神经元凋亡[Rohn等人，《神经化学杂志》(J Neurochem)(2000)74：2331-2342；其是以全文引用的方式并入本文中]。

该分析基本上是如Rohn等人在《神经化学》[Neurochem(2000)74：2331-2342]中的描述来设立。简单地说，由E17胚胎来建立小鼠皮层神经元的原代培养物。将妊娠泡仔细去头，将脑收集到Hank s缓冲盐溶液(HBSS)缓冲剂中。取下皮质并用胰蛋白酶(0.05％，溶于HBSS中)处理，随后使用21g针将细胞机械解离。随后使该细胞悬浮液通过70μM过滤器，并将回收细胞涂于经聚D-赖氨酸处理的12孔培养板上。五天培养以后，将细胞用于分析。图11A展示培养五天以后的细胞的照片。图11A也显示如同对皮层神经元的预期，所述细胞对神经丝进行阳性染色。

为了所述分析，建立四个实验组。在“未处理”组中，并不添加护脑素、化合物1(″Cmpd1″)或mAb 22C11。在“22C11”组中，仅在mAb 22C11存在下培养细胞。在“护脑素”和“Cmpd1”组中，在添加mAb 22C11之前1小时开始分别用护脑素或Cmpd1来培养细胞。整夜对该分析进行处理(约18小时)，之后通过如实例25所述的LDH分析来确定细胞生存力。

观察图11B，说明护脑素和化合物1保护原代小鼠皮质神经元免于出现由抗APP mAb 22C11诱导的细胞死亡。

实例27

防止已分化SH-SY5Y细胞的Aβ诱导的细胞死亡

确定护脑素或化合物1抑制已分化SH-SY5Y细胞的Aβ诱导细胞死亡的能力。SH-SY5Y是一种人类神经母细胞瘤细胞系。用维甲酸(10pM)处理五天，随后用BDNF(10ng/ml)处理两天，从而完成SH-SY5Y分化为类神经细胞的过程。Aβ(Aβ1-42)是购自Biosource International(Camarillo，CA；目录号03-111)。

在单独细胞(“未处理”)存在下、在仅Aβ1-42存在下、在Aβ1-42和护脑素存在下或在Aβ1-42和化合物1存在下，整夜培养已分化的SH-SY5Y细胞(约18h)。在不含血清的培养基中进行所述分析。以80μg/ml来使用Aβ1-42。以1μM来使用护脑素。以20μM、5μM或1μM来使用化合物1。在添加Aβ1-42之前1小时，开始将护脑素和化合物1添加至培养物中。由台盼蓝染色来确定细胞生存力。

观察图12，说明护脑素和化合物1会保护分化SH-SY5Y细胞免于出现Aβ诱导的细胞死亡。

实例28

保护分化的SH-SY5Y细胞和原代小鼠皮层神经元免于出现缺氧/复氧诱导的细胞死亡

使用体外模型来确定护脑素或化合物1抑制分化SH-SY5Y细胞的缺氧/复氧诱导的细胞死亡的能力。SH-SY5Y人类神经母细胞瘤细胞是如实例24所述来分化。原代小鼠皮层神经元是如实例26所述来分离。

缺氧/复氧体外模型的略图展示于图13中。分化的SH-SY5Y细胞或原代小鼠皮层神经元在缺氧处理之前首先在不含血清的培养基中培养24-48小时。使用充以95％N₂和5％CO₂的密封室来达到缺氧效果。使缺氧处理进行约4到约8小时。在缺氧处理之后，历时24-48小时将细胞从所述密封室中移到周围空气中，然后由LDH分析或DNA断裂来确定细胞生存力。LDH分析是如实例25中所述来进行。通过在紫外光下由溴化乙锭进行染色来确定使用PUREGENEDNA分离试剂盒(Gentra Systems，Inc.；Minneapolis，MN)所分离的基因组DNA的DNA断裂。

单独培养SH-SY5Y细胞或原代小鼠皮层神经元，或在护脑素或化合物1存在下对其进行培养。护脑素或化合物1既可在缺氧处理开始之前约1-2小时添加，也可在缺氧处理终止之后立刻添加。护脑素或化合物1是以约0.5μM到约20μM使用。举例说明且不加限制，护脑素或化合物1是以1μM、2μM、5μM、10μM或20μM使用。在一些实施例中，分析一种作为FPRL2配体(而非护脑素或化合物1)的化合物保护分化的SH-SY5Y细胞或原代小鼠皮层神经元免于出现由缺氧/复氧诱导的细胞死亡的能力。

实例29

阿尔兹海默氏病脑中的FPRL2表达相对于非阿尔兹海默氏病脑中的FPRL2表达有所上调

通过免疫组织化学来确定阿尔兹海默氏病脑中的FPRL2表达相对于非阿尔兹海默氏病脑中的FPRL2表达的情形。用于此研究的人类脑组织的获得是经过正当许可。从一名58岁非阿尔兹海默氏病男性个体(“正常”)的海马回区域和一名65岁阿尔兹海默氏病男性患者(“AD”)的海马回区域中获得新鲜脑组织。将该脑组织用甲醛水溶液固定并用石蜡包埋。将该石蜡包埋物质用于制备4μM切片。使用为对抗FPRL2的C末端肽所形成的兔多克隆抗血清来询问FPRL2表达。通过由用以产生抗体的肽进行阻断来证明染色的特异性。

将4μM石蜡切片用抗FPRL2抗血清的1∶100稀释液来染色。用磷酸盐缓冲盐水(PBS)将玻片洗涤三次并将其与辣根过氧化物酶(HRP)的共轭羊抗兔抗体(Dako；CA)一起在室温下培养30分钟。随后将所述玻片洗涤三次并用染色底物二氨基联苯胺(DAB)处理2分钟。以水洗涤剂来终止该显色反应。随后将该组织切片用甲基绿复染并用盖玻片覆盖。

观察图14，说明阿尔兹海默氏病脑样品中的FPRL2表达相对于非阿尔兹海默氏病脑样品中的FPRL2表达有所上调。由阿尔兹海默氏病脑样品中的大锥体神经元执行的FPRL2表达相对于由非阿尔兹海默氏病脑样品中的大锥体神经元执行的FPRL2表达有所上调。

                         序列表

<110>Arena Pharmaceuticals，Inc.

     Villegas.Sonia

     Kelner.Gregory s.

     Unett，David J.

     Gatlin，Joel

<120>人类G蛋白偶联受体和用于治疗细胞死亡相关病症的其调节物

<130>30.WO1

<150>60/455,316

<151>2003-03-17

<150>60/532,001

<151>2003-12-22

<160>14

<170>PatentIn version 3.2

<210>1

<211>1062

<212>DNA

<213>智人

<400>1

atggaaacca acttctccat tcctctgaat gaaactgagg aggtgctccc tgagcctgct

60

ggccacaccg ttctgtggat cttctcattg ctagtccacg gagtcacctt tgtcttcggg

120

gtcctgggca atgggcttgt gatctgggtg gctggattcc ggatgacacg cacagtcaac

180

accatctgtt acctgaacct ggccctagct gacttctctt tcagtgccat cctaccattc

240

cgaatggtct cagtcgccat gagagaaaaa tggccttttg gctcattcct atgtaagtta

300

gttcatgtta tgatagacat caacctgttt gtcagtgtct acctgatcac catcattgct

360

ctggaccgct gtatttgtgt cctgcatcca gcctgggccc agaaccatcg caccatgagt

420

ctggccaaga gggtgatgac gggactctgg attttcacca tagtccttac cttaccaaat

480

ttcatcttct ggactacaat aagtactacg aatggggaca catactgtat tttcaacttt

540

gcattctggg gtgacactgc tgtagagagg ttgaacgtgt tcattaccat ggccaaggtc

600

tttctgatcc tccacttcat tattggcttc agcgtgccta tgtccatcat cacagtctgc

660

tatgggatca tcgctgccaa aattcacaga aaccacatga ttaaatccag ccgtccctta

720

cgtgtcttcg ctgctgtggt ggcttctttc ttcatctgtt ggttccctta tgaactaatt

780

ggcattctaa tggcagtctg gctcaaagag atgttgttaa atggcaaata caaaatcatt

840

cttatcctga ttaacccaac aagctccttg gcctttttta acagctgcct caacccaatt

900

ctctacgtct ttatgggtcg taacttccaa gaaagactga ttcgctcttt gcccactagt

960

ttggagaggg ccctgactga ggtccctgac tcagcccaga ccagcaacac agacaccact

1020

tctgcttcac ctcctgagga gacggagtta caagcaatgt ga

1062

<210>2

<211>353

<212>PRT

<213>智人

<221>VARIANT

<222>94

<223>多形性氨基酸Gly或Ala

<221>VARIANT

<222>211

<223>多形性氨基酸Ser或Thr

<221>VARIANT

<222>338

<223>多形性氨基酸Asp或His

<400>2

Met Glu Thr Asn Phe Ser Ile Pro Leu Asn Glu Thr Glu Glu Val Leu

1               5                   10                  15

Pro Glu Pro Ala Gly His Thr Val Leu Trp Ile Phe Ser Leu Leu Val

            20                  25                  30

His Gly Val Thr Phe Val Phe Gly Val Leu Gly Asn Gly Leu Val Ile

        35                  40                  45

Trp Val Ala Gly Phe Arg Met Thr Arg Thr Val Asn Thr Ile Cys Tyr

    50                  55                  60

Leu Asn Leu Ala Leu Ala Asp Phe Ser Phe Ser Ala Ile Leu Pro Phe

65                  70                  75                  80

Arg Met Val Ser Val Ala Met Arg Glu Lys Trp Pro Phe Gly Ser Phe

                85                  90                  95

Leu Cys Lys Leu Val His Val Met Ile Asp Ile Asn Leu Phe Val Ser

            100                 105                 110

Val Tyr Leu Ile Thr Ile Ile Ala Leu Asp Arg Cys Ile Cys Val Leu

        115                 120                 125

His Pro Ala Trp Ala Gln Asn His Arg Thr Met Ser Leu Ala Lys Arg

    130                 135                 140

Val Met Thr Gly Leu Trp Ile Phe Thr Ile Val Leu Thr Leu Pro Asn

145                 150                 155                 160

Phe Ile Phe Trp Thr Thr Ile Ser Thr Thr Asn Gly Asp Thr Tyr Cys

                165                 170                 175

Ile Phe Asn Phe Ala Phe Trp Gly Asp Thr Ala Val Glu Arg Leu Asn

            180                 185                 190

Val Phe Ile Thr Met Ala Lys Val Phe Leu Ile Leu His Phe Ile Ile

        195                 200                 205

Gly Phe Ser Val Pro Met Ser Ile Ile Thr Val Cys Tyr Gly Ile Ile

    210                 215                 220

Ala Ala Lys Ile His Arg Asn His Met Ile Lys Ser Ser Arg Pro Leu

225                 230                 235                 240

Arg Val Phe Ala Ala Val Val Ala Ser Phe Phe Ile Cys Trp Phe Pro

                245                 250                 255

Tyr Glu Leu Ile Gly Ile Leu Met Ala Val Trp Leu Lys Glu Met Leu

            260                 265                 270

Leu Asn Gly Lys Tyr Lys Ile Ile Leu Val Leu Ile Asn Pro Thr Ser

        275                 280                 285

Ser Leu Ala Phe Phe Asn Ser Cys Leu Asn Pro Ile Leu Tyr Val Phe

    290                 295                 300

Met Gly Arg Asn Phe Gln Glu Arg Leu Ile Arg Ser Leu Pro Thr Ser

305                 310                 315                 320

Leu Glu Arg Ala Leu Thr Glu Val Pro Asp Ser Ala Gln Thr Ser Asn

                325                 330                 335

Thr Asp Thr Thr Ser Ala Ser Pro Pro Glu Glu Thr Glu Leu Gln Ala

            340                 345                 350

Met

<210>3

<211>30

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>新型序列

<400>3

aaagaattca ggtgtgggaa gatggaaacc

30

<210>4

<211>29

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>新型序列

<400>4

aaaggatccc cgacctcaca ttgcttgta

29

<210>5

<211>1242

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>新型序列

<400>5

atgtacccat acgacgtccc agactacgct ggaagcttca tggaaaccaa cttctccatt

60

cctctgaatg aaactgagga ggtgctccct gagcctgctg gccacaccgt tctgtggatc

120

ttctcattgc tagtccacgg agtcaccttt gtcttcgggg tcctgggcaa tgggcttgtg

180

atctgggtgg ctggattccg gatgacacgc acagtcaaca ccatctgtta cctgaacctg

240

gccctagctg acttctcttt cagtgccatc ctaccattcc gaatggtctc agtcgccatg

300

agagaaaaat ggccttttgg ctcattccta tgtaagttag ttcatgttat gatagacatc

360

aacctgtttg tcagtgtcta cctgatcacc atcattgctc tggaccgctg tatttgtgtc

420

ctgcatccag cctgggccca gaaccatcgc accatgagtc tggccaagag ggtgatgacg

480

ggactctgga ttttcaccat agtccttacc ttaccaaatt tcatcttctg gactacaata

540

agtactacga atggggacac atactgtatt ttcaactttg cattctgggg tgacactgct

600

gtagagaggt tgaacgtgtt cattaccatg gccaaggtct ttctgatcct ccacttcatt

660

attggcttca gcgtgcctat gtccatcatc acagtctgct atgggatcat cgctgccaaa

720

attcacagaa accacatgat taaatccagc cgtcccttac gtgtcttcgc tgctgtggtg

780

gcttctttct tcatctgttg gttcccttat gaactaattg gcattctaat ggcagtctgg

840

ctcaaagaga tgttgttaaa tggcaaatac aaaatcattc ttgtcctgat taacccaaca

900

agctccttgg ccttttttaa cagctgcctc aacccaattc tctacgtctt tatgggtcgt

960

aacttccaag aaagactgat tcgctctttg cccactagtt tggagagggc cctgactgag

1020

gtccctgact cagcccagac cagcaacaca gacaccactt ctgcttcacc tcctgaggag

1080

acggagttac aagcaatggg atccaagggc aattctgcag atatccagca cagtggcggc

1140

cgctcgagtc tagagggccc gcggttcgaa ggtaagccta tccctaaccc tctcctcggt

1200

ctcgattcta cgcgtaccgg tcatcatcac catcaccatt ga

1242

<210>6

<211>413

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>新型序列

<400>6

Met Tyr Pro Tyr Asp Val Pro Asp Tyr Ala Gly Ser Phe Met Glu Thr

1               5                   10                  15

Asn Phe Ser Ile Pro Leu Asn Glu Thr Glu Glu Val Leu Pro Glu Pro

            20                  25                  30

Ala Gly His Thr Val Leu Trp Ile Phe Ser Leu Leu Val His Gly Val

        35                  40                  45

Thr Phe Val Phe Gly Val Leu Gly Asn Gly Leu Val Ile Trp Val Ala

    50                  55                  60

Gly Phe Arg Met Thr Arg Thr Val Asn Thr Ile Cys Tyr Leu Asn Leu

65                  70                  75                  80

Ala Leu Ala Asp Phe Ser Phe Ser Ala Ile Leu Pro Phe Arg Met Val

                85                  90                  95

Ser Val Ala Met Arg Glu Lys Trp Pro Phe Gly Ser Phe Leu Cys Lys

            100                 105                 110

Leu Val His Val Met Ile Asp Ile Asn Leu Phe Val Ser Val Tyr Leu

        115                 120                 125

Ile Thr IIe Ile Ala Leu Asp Arg Cys Ile Cys Val Leu Hie Pro Ala

    130                 135                 140

Trp Ala Gln Asn His Arg Thr Met Ser Leu Ala Lys Arg Val Met Thr

145                 150                 155                 160

Gly Leu Trp Ile Phe Thr Ile Val Leu Thr Leu Pro Asn Phe Ile Phe

                165                 170                 175

Trp Thr Thr Ile Ser Thr Thr Asn Gly Asp Thr Tyr Cys Ile Phe Asn

            180                 185                 190

Phe Ala Phe Trp Gly Asp Thr Ala Val Glu Arg Leu Asn Val Phe Ile

        195                 200                 205

Thr Met Ala Lys Val Phe Leu Ile Leu His Phe Ile Ile Gly Phe Ser

    210                 215                 220

Val Pro Met Ser Ile Ile Thr Val Cys Tyr Gly Ile Ile Ala Ala Lys

225                 230                 235                 240

Ile His Arg Asn His Met Ile Lys Ser Ser Arg Pro Leu Arg Val Phe

                245                 250                 255

Ala Ala Val Val Ala Ser Phe Phe Ile Cys Trp Phe Pro Tyr Glu Leu

            260                 265                 270

Ile Gly Ile Leu Met Ala Val Trp Leu Lys Glu Met Leu Leu Asn Gly

        275                 280                 285

Lys Tyr Lys Ile Ile Leu Val Leu Ile Asn Pro Thr Ser Ser Leu Ala

    290                 295                 300

Phe Phe Asn Ser Cys Leu Asn Pro Ile Leu Tyr Val Phe Met Gly Arg

305                 310                 315                 320

Asn Phe Gln Glu Arg Leu Ile Arg Ser Leu Pro Thr Ser Leu Glu Arg

                325                 330                 335

Ala Leu Thr Glu Val Pro Asp Ser Ala Gln Thr Ser Asn Thr Asp Thr

            340                 345                 350

Thr Ser Ala Ser Pro Pro Glu Glu Thr Glu Leu Gln Ala Met Gly Ser

        355                 360                 365

Lys Gly Asn Ser Ala Asp Ile Gln His Ser Gly Gly Arg Ser Ser Leu

    370                 375                 380

Glu Gly Pro Arg Phe Glu Gly Lys Pro Tle Pro Asn Pro Leu Leu Gly

383                 390                 395                 400

Leu Asp Ser Thr Arg Thr Gly His His His His His His

                405                 410

<210>7

<211>35

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>新型序列

<400>7

cccaagcttc atggaaacca acttctccat tcctc

35

<210>8

<211>33

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>新型序列

<400>8

cccggatccc attgcttgta actccgtctc ctc

33

<210>9

<211>29

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>新型序列

<400>9

tccagccgtc ccaaacgtgt cttcgctgc

29

<210>10

<211>31

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>新型序列

<400>10

ctccttcggt cctcctatcg ttgtcagaag t

31

<210>11

<211>1062

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>新型序列

<400>11

atggaaacca acttctccat tcctctgaat gaaactgagg aggtgctccc tgagcctgct

60

ggccacaccg ttctgtggat cttctcattg ctagtccacg gagtcacctt tgtcttcggg

120

gtcctgggca atgggcttgt gatctgggtg gctggattcc ggatgacacg cacagtcaac

180

accacctgtt acctgaacct ggccctagct gacttctctt tcagtgccat cctaccattc

240

cgaatggtct cagtcgccat gagagaaaaa tggccttttg gctcattcct atgtaagtta

300

attcatatta tgatagacat caacctgttt gtcagtgtct acctgatcac catcattgct

360

ctggaccgct gtatttgtgt cctgcatcca gcctgggccc agaaccatcg caccatgagt

420

ctggccaaga gggtgatgac gggactctgg attttcacca tagtccttac cttaccaaat

480

ttcatcttct ggactacaat aagtactacg aatggggaca catactgtat tttcaacttt

540

gcattctggg gtgacactgc tgtagagagg ttgaacgtgt tcattaccat ggccaaggtc

600

tttctgatcc tccacttcat tattggcttc agcgtgccta tgtccatcat cacagtctgc

660

tatgggatca tcgctgccaa aattcacaga aaccacatga ttaaatccag ccgtcccaaa

720

cgtgtcttcg ctgctgtggt ggcttctttc ttcatctgtt ggttccctta tgaactaatt

780

ggcattctaa tggcagtctg gctcaaagag atgttgttaa atggcaaata caaaatcatt

840

cttgtcctga ttaacccaac aagctccttg gcctttttta acagctgcct caacccaatt

900

ctctacgtct ttatgggtcg taacttccaa gaaagactga ttcgctcttt gcccactagt

960

ttggagaggg ccctgactga ggtcccgtac tcagcccaga ccagcaacac agacaccact

1020

tctgcttcac ctcctgagga gacggagtta caagcaatat ga

1062

<210>12

<211>353

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>新型序列

<400>12

Met Glu Thr Asn Phe Ser Ile Pro Leu Asn Glu Thr Glu Glu Val Leu

1               5                   10                  15

Pro Glu Pro Ala Gly His Thr Val Leu Trp Ile Phe Ser Leu Leu Val

            20                  25                  30

His Gly Val Thr Phe Val Phe Gly Val Leu Gly Asn Gly Leu Val Ile

        35                  40                  45

Trp Val Ala Gly Phe Arg Met Thr Arg Thr Val Asn Thr Ile Cys Tyr

    50                  55                  60

Leu Asn Leu Ala Leu Ala Asp Phe Ser Phe Ser Ala Ile Leu Pro Phe

65                  70                  75                  80

Arg Met Val Ser Val Ala Met Arg Glu Lys Trp Pro Phe Gly Ser Phe

                85                  90                  95

Leu Cys Lys Leu Val His Val Met Ile Asp Ile Asn Leu Phe Val Ser

            100                 105                 110

Val Tyr Leu Ile Thr Ile Ile Ala Leu Asp Arg Cys Ile Cys Val Leu

        115                 120                 125

His Pro Ala Trp Ala Gln Asn His Arg Thr Met Ser Leu Ala Lys Arg

    130                 135                 140

Val Met Thr Gly Leu Trp Ile Phe Thr Ile Val Leu Thr Leu Pro Asn

145                 150                 155                 160

Phe Ile Phe Trp Thr Thr Ile Ser Thr Thr Asn Gly Asp Thr Tyr Cys

                165                 170                 175

Ile Phe Asn Phe Ala Phe Trp Gly Asp Thr Ala Val Glu Arg Leu Asn

            180                 185                 190

Val Phe Ile Thr Met Ala Lys Val Phe Leu Ile Leu His Phe Ile Ile

        195                 200                 205

Gly Phe Ser Val Pro Met Ser Ile Ile Thr Val Cvs Tyr Gly Ile Ile

    210                 215                 220

Ala Ala Lys Ile His Arg Asn His Met Ile Lys Ser Ser Arg Pro Lys

225                 230                 235                 240

Arg Val Phe Ala Ala Val Val Ala Ser Phe Phe Ile cys Trp Phe Pro

                245                 250                 255

Tyr Glu Leu Ile Gly Ile Leu Met Ala Val Trp Leu Lys Glu Met Leu

            260                 265                 270

Leu Asn Gly Lys Tyr Lys Ile Ile Leu Val Leu Ile Asn Pro Thr Ser

        275                 280                 285

Ser Leu Ala Phe Phe Asn Ser Cys Leu Asn Pro Ile Leu Tyr Val Phe

    290                 295                 300

Met Gly Arg Asn Phe Gln Glu Arg Leu Ile Arg Ser Leu Pro Thr Ser

305                 310                 315                 320

Leu Glu Arg Ala Leu Thr Glu Val Pro Asp Ser Ala Gln Thr Ser Asn

                325                 330                 335

Thr Asp Thr Thr Ser Ala Ser Pro Pro Glu Glu Thr Glu Leu Gln Ala

            340                 345                 350

Met

<210>13

<211>36

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>新型序列

<400>13

gatcaagctt ccatggcgtg ctgcctgagc gaggag

36

<210>14

<211>53

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>新型序列

<400>14

gatcggatcc ttagaacagg ccgcagtcct tcaggttcag ctgcaggatg gtg

53