摘要:马铃薯晚疫病病原菌致病疫霉的PiGK5蛋白是一类跨膜蛋白,该蛋白在致病疫霉的致病性、无性生殖及有性生殖方面均有重要作用,但其结构与详细功能目前尚未可知。本研究通过PCR扩增PiGK5胞外端编码区,分别构建融合His标签及MBP和His双标签的原核表达载体,比较了不同标签对PiGK5胞外端表达水平、可溶性及稳定性的影响。结果显示,融合His标签的PiGK5胞外端蛋白主要以包涵体形式存在于沉淀中,仅有少量以可溶性蛋白的形式存在,1 L大肠杆菌表达的蛋白总量为28.11 mg,其中可溶性蛋白总量约为2.73 mg,而纯化后可获得纯蛋白量为0.1175 mg。纯化后的重组蛋白稳定性较好,可在96小时内维持蛋白结构稳定。融合MBP、His双标签的PiGK5胞外端蛋白主要以可溶性蛋白的形式存在,1 L大肠杆菌表达的蛋白总量为49.93 mg,其中可溶性蛋白总量约为44.73 mg,而纯化后可获得纯蛋白量为6.0125 mg。但重组蛋白的稳定性较差,仅在1.5小时就出现了蛋白降解现象。因此,虽然融合His标签的PiGK5胞外端蛋白的可溶性蛋白量较低,但重组蛋白更稳定,融合His标签更适合于PiGK5胞外端的原核表达及后续结构与功能研究。本研究比较了不同标签对PiGK5蛋白胞外端表达的影响,建立了该蛋白的原核表达条件,为其结构与功能的研究奠定了基础。