摘要：背景：临床上应用萋-尼氏(ziehl-Neelsen)染色方法检测临床标本或分离株，其中染色阳性的细菌统称为抗酸染色阳性菌(acid-fastbacteria)。临床上主要表现为结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis，MTB)，但也时常报道有非典型抗酸杆菌，目前多称为非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria，NTM)。由于近来NTM检出率逐渐升多，NTM感染可导致与结核病表现相似的全身中毒症状和局部损损害，在无菌种鉴定的情况下与结核病难以鉴别，许多NTM对抗结核药物天然耐药，不同种的NTM对药物敏感性也不同，所以对NTM导致的疾病的研究也在不断加强。最近几年，国内外临床分离培养到的抗酸阳性菌株也陆续有报道为戈登菌属(Gordonia)等，这通常也易被误诊为MTB。这主要是传统的基于抗酸染色和细菌培养方法难以准确地对结核病进行鉴别诊断。16S rDNA基因序列具有细菌属、种的特征，作为新的分子分型方法，16SrDNA的序列测定己作为细菌分类和鉴定的“金标准”。16SrDNA～23SrDNA间隔区序列片段较长，且种间同源性低，比常用的保守序列信息量大，应用于菌种鉴定具有一定的优越性。目的：本实验应用16S rDNA基因序列和16SrDNA-23SrDNA间隔区序列PCR技术对临床抗酸阳性菌分离株进行菌种鉴定。方法：从武汉和山东临沂等地收集结核病人抗酸阳性临床分离株共120例，其中19株初步诊断为非典型抗酸杆菌或NTM。应用结核分枝杆菌群(Mycobacteriumtubereulosis complex，MTC)特异的引物和通用引物分别对受试菌种的16S-23SrDNA间隔区序列和16S rDNA基因序列进行PCR扩增，然后对16S rDNA基因测序分析。结果：所有结核分枝杆菌分离株16S-23SrDNA间隔区序列均可扩出370bp左右的条带，而“非结核分枝杆菌”分离株则不能扩出条带。由此将结核分枝杆菌与非典型抗酸杆菌分开。19株非典型抗酸杆菌的16SrDNA基因序列比对表明：57.9％(11/19)为NTM，其中7株(36.8％，7/19)属于龟脓肿分枝杆菌复合群，4株(21.1％，4/19)属于鸟胞内分枝杆菌复合群;而42.1％(8/19)的非典型抗酸杆菌不是NTM，即分类学上不归为分枝杆菌属。其中36.8％(7/19)的菌株经DNA序列比对属于戈登氏菌属，另外1株与诺卡氏菌属菌株同源性高。16SrDNA基因的两个高变区测序可鉴定大多数的分枝杆菌菌种。但是，并不能对结核分枝杆菌复合菌群及鸟-胞内和龟-脓肿等非分枝杆菌复合群进行菌种区分。结论：由抗酸阳性菌所引起的疾病大致相同，但其菌种本身有差异，且致病机制各不同，对药物的敏感性亦大相径庭。近年来，国内外已有报道临床抗酸阳性的标本中发现有戈登菌属，对反复发作的肺部感染要考虑支气管戈登菌感染的可能。本研究应用16SrDNA基因序列和16SrDNA-23SrDNA间隔区序列PCR方法对武汉和山东两地临床获得的抗酸阳性菌进行菌种鉴定，首次报道了较高比例的NTM和部分可能为新的致病的非分枝杆菌属的抗酸阳性菌，进一步进行深入研究，将对传统的细菌学鉴定方法起到有益的补充，并对了年初抗结核的个体化治疗具有重要指导意义。
