УФ-спектрофотометрическоеизучение связывания профлавина бычьим панкреатическим a-химотрипсином в смесяхвода–ацетонитрил

摘要

Cпомощью метода УФ-спектрофотометрии изучена способность бычьегопанкреатического a-химотрипсина к связыванию профлавина в зависимости от состава водно-ацетонитрильнойсмеси. Содержание органического растворителя варьировалось от 0 до 99,5 об.%.Обнаружено, что существует сложная зависимость связывающей способности a-химотрипсина от содержанияацетонитрила (АН). В чистом водном растворе способность фермента к связываниюсамая высокая. При содержании АН 4,5 об.% степень связывания профлавина падаетприблизительно в 2,3 раза. Повышение концентрации АН (30–70 об.%) существеннымобразом воздействует на свойства фермента: он практически не связывает профлавин.Однако при более высоких концентрациях органического растворителя (80–98,5%)фермент частично восстанавливает свою связывающую способность. В “сухом”ацетонитриле фермент практически не связывает профлавин. На основаниилитературных данных по состоянию водородных связей воды в ацетонитрилеизменения в связывающей способности фермента были интерпретированы какрезультат одновременного действия следующих факторов: разрушениепространственной сетки водородных связей воды и понижение конформационнойподвижности белковой макромолекулы при уменьшении содержания воды.