ERIC-PCR技术与MLST技术对30株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的基因分型结果观察

摘要

目的 采用肠杆菌基因间重复一致序列PCR(ERIC-PCR)技术与多位点序列分型技术(MLST)技术分析耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌菌株的基因分型,为临床用药与院感控制提供依据.方法 采用VITEK-2细菌分析仪检测30株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌菌株对阿米卡星、氨苄西林等16种抗菌药的耐药性.提取30株菌株的基因组DNA,制备菌株基因组模板,扩增碳青霉烯酶基因(KPC-2、NDM-1、IMP、VIM、OXA),对扩增阳性产物进行测序,所得序列在NCBI网站上进行Blast比对,确定碳青霉烯酶耐药基因的分型.ERIC-PCR基因分型法:根据肠细菌基因间共有重复序列ERIC设计引物,对30株肺炎克雷伯菌进行基因分型,运用NTSYS软件对ERIC-PCR得到的电泳图进行聚类分析.MLST基因分型法:扩增肺炎克雷伯菌的7个管家基因(rpoB、gapA、mdh、pgi、phoE、infB和tonB)片段,扩增片段测序后与数据库数据比对得出等位基因谱,从而得到相应的序列型(ST).结果 30株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌菌株对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、氨曲南、头孢他啶、头孢唑林、头孢吡肟、亚胺培南、和哌拉西林/他唑巴坦的耐药率均为100％,阿米卡星和复方新诺明的耐药率为76.6％,其他药物的耐药性介于两者之间.30株菌均为多重耐药菌,在检测的16种药物中,耐药率介于76.6％～100％.30株菌株中25株菌KPC-2基因扩增阳性,2株NDM基因扩增阳性,1株KPC-2、NDM-1基因,2株未检测到碳青霉烯酶基因.30株耐碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌株的MLST方法分型为5个ST型,其中ST11(83.3％,25/30)、ST641(6.6％,2/30)、ST76 (3.3％,1/30)、ST392 (3.3％,1/30)和ST1322(3.3％,1/30);ERIC-PCR分型为5个谱型,分别为A型(83.3％,25/30),B型(6.6％,2/30)、C型(3.3％,1/30)、D型(3.3％,1/30)和E型(3.3％,1/30).结论 30株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌菌株均为多重耐药菌.ERIC-PCR与MLST分型用于肺炎克雷伯菌的基因分型中分辨率相同.