lncRNA FLVCR1-AS1靶向miR-381-3p对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响及其分子机制

摘要

目的 探讨长链非编码RNA FLVCR1-AS1(lncRNA FLVCR1-AS1)调控微小RNA-381-3p(miR-381-3p)表达影响结直肠癌(CRC)细胞增殖、凋亡的作用及机制.方法 取正常结肠上皮细胞FHC及CRC细胞SW480、DLD-1、HCT116,采用qRT-PCR法检测细胞中的FLVCR1-AS1与miR-381-3p.将FLVCR1-AS1表达最高的CRC细胞随机分为7组:NC组不处理,si-FLVCR1-AS1组、si-con组分别转染FLVCR1-AS1小干扰RNA及乱序无意义序列,miR-381-3p组、miR-con组分别转染miR-381-3p模拟物(mimics)及阴性对照mimic NC序列(miR-con),si-FLVCR1-AS1+anti-miR-381-3p组、si-FLVCR1-AS1+anti-miR-con组分别共转染si-FLVCR1-AS1与miR-381-3p特异性寡核苷酸抑制剂及其阴性对照;采用MTT法测算细胞存活率,流式细胞术测算细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-Caspase-3).先用Starbase对FLVCR1-AS1和miR-381-3p结合进行预测,再以双荧光素酶报告基因检测FLVCR1-AS1与miR-381-3p的相互作用.结果 与FHC比较,SW480、DLD-1、HCT116中FLVCR1-AS1表达水平均升高而miR-381-3p表达水平均降低(P均<0.05),其中SW480的FLVCR1-AS1表达最高.与NC组、si-con组、miR-con组比较,si-FLVCR1-AS1组、si-FLVCR1-AS1+anti-miR-con组细胞存活率降低、细胞凋亡率升高,细胞中Cyclin D1蛋白表达量降低、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量升高(P均<0.05);miR-381-3p组细胞存活率降低、细胞凋亡率升高,细胞中Cyclin D1蛋白表达量降低、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量升高(P均<0.05);NC组、si-con组、miR-con组两两比较,差异均无统计学意义;与si-FLVCR1-AS1+anti-miR-con组比较,si-FLVCR1-AS1+anti-miR-381-3p组细胞存活率升高、细胞凋亡率降低,细胞中Cyclin D1蛋白表达量升高、Cleaved-Caspase-3蛋白表达量低(P均<0.05).Starbase预测显示,FLVCR1-AS1与miR-381-3p存在靶向结合位点;双荧光素酶报告实验显示,在转染野生型载体WT-FLVCR1-AS1的SW480细胞中,共转染miR-381-3p mimics的荧光素酶活性低于共转染miR-con的细胞(P<0.05).结论 lncRNA FLVCR1-AS1可靶向调节miR-381-3p以促进CRC细胞增殖、抑制细胞凋亡,该作用可能通过上调Cleaved-Caspase-3表达及下调Cyclin D1表达实现.