白藜芦醇对钛颗粒诱导小鼠巨噬细胞形成的破骨细胞数量及F-actin环面积影响观察

摘要

目的 观察白藜芦醇对钛颗粒诱导小鼠巨噬细胞株RAW264.7形成的破骨细胞数量及F-actin环面积影响,并探讨其机制.方法 将小鼠巨噬细胞株RAW264.7分为Sham组、Vehicle组、Low-Res组、Mid-Res组、High-Res组,Sham组加入完全培养基,Vehicle组加入钛颗粒+完全培养基,Low-Res组加入钛颗粒+完全培养基+白藜芦醇(1 μmol/L),Mid-Res组加入钛颗粒+完全培养基+白藜芦醇(10 μmol/L),High-Res组加入钛颗粒+完全培养基+白藜芦醇(15 μmol/L).各组细胞培养5天后,采用TRAP染色法检测各组破骨细胞数,采用鬼笔环钛染色法检测各组破骨细胞F-actin环面积,采用Realtime-PCR法检测各组细胞中TNF-α、IL-1β mRNA,采用ELISA法检测各组细胞中TNF-α、IL-1β蛋白,采用Western blotting法检测各组细胞p-p65、p-IκB蛋白.结果 Vehicle组可观察到较多体积较大、酒红色、内含多个细胞核的破骨细胞,而应用不同浓度白藜芦醇干预后,破骨细胞数随着药物浓度的增加而减少;Sham组、Vehicle组、Low-Res组、Mid-Res组、High-Res组破骨细胞数分别为0、(145.31 ±7.87)个、(129.63 ±4.12)个、(85.51 ±3.65)个、(69.76±5.63)个,其中Vehicle组和Low-Res组破骨细胞数相比,P＞0.05,其余组间相比,P均＜0.05.Vehicle组可观察到少量较大的F-actin环,Low-Res组、Mid-Res组的F-actin环较Vehicle组略有减少,High-Res组多核细胞明显减少;Sham组、Vehicle组、Low-Res组、Mid-Res组、High-Res组F-ac-tin环面积分别为0、(3 642.31 ±987.01) μm2、(3 265.75±871.98) μm2、(2 497.45 ±712.61) μm2和(1 741.81±716.07) μm2,组间相比,P均＜0.05.Low-Res组、Mid-Res组、High-Res组细胞中TNF-α mRNA、IL-1β mRNA、TNF-α蛋白、IL-1β蛋白、p-p65蛋白、p-IκB蛋白相对表达量或表达水平均低于Vehicle组,且降低程度与白藜芦醇浓度有关.结论 白藜芦醇呈浓度依赖性对钛颗粒诱导小鼠巨噬细胞株RAW264.7形成的破骨细胞数量及F-actin环面积产生抑制作用,其抑制作用的机制与NF-κB信号通路有关.