Bax、Bad基因真核表达质粒构建及转染人胚肾细胞后的翻译水平观察

摘要

cqvip:目的构建Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2相关细胞死亡因子(Bad)基因真核表达质粒PcDNA3. 1-Bax、 PcDNA3. 1-Bad,并观察两质粒转染至人胚肾293(HEK293)细胞后Bax、Bad的表达。方法采用TRIzol试剂提取大鼠脑组织总RNA,利用反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)扩增Bax和Bad的互补DNA(cDNA)序列,将cDNA分别克隆至pcDNA3.1载体上。采用脂质体转染法将序列正确的PcDNA3. 1-Bax和PcDNA3. 1-Bad真核表达质粒分别转染至HEK293细胞,免疫印迹法鉴定Bax、Bad在细胞中的表达。结果双酶切和DNA测序分析显示Bax和Bad基因片段成功插人pcDNA3. 1载体中,并且与其cDNA( Genbank: NM_017059. 2和AF031227. 1)序列完全一致。免疫印迹显示pcDNA3. l-Bax、pcDNA3. 1-Bad真核表达质粒能够在HEK293细胞中高效表达。结论pcD- NA3. l-Bax、pcDNA3. 1-Bad真核表达质粒构建成功,Bax、Bad在HEK293细胞中成功过表达。