死胎胎盘组织中HBV-DNA测定及意义

摘要

@@ 乙型肝炎病毒(HBV)产妇传播是导致新生儿发育不良和死亡的重要原因之一,也是导致慢性HBV无症状携带(CSC)的重要原因.HBV-DNA已被证明是HBV复制的标志.为了解胎儿胎盘组织中是否有HBV复制及其复制状况,我们对50例乙型肝炎孕妇分娩的死亡胎儿胎盘组织中的HBV复制情况进行了观察,现报告如下. 材料和方法:采集50例乙型肝炎产妇娩下的孕周为36～40周的死胎,常规尸检,取胎盘组织 ,10%中性福尔马林固定,石腊包埋,组织切片(原位分子杂交按Southurn法),脱蜡水化, 蒸馏水冲洗,37℃温箱烘干,蛋白酶K(20μg/ml)室温下消化30分钟,脱水,37℃温箱烘干, 加生物素标记的HBV-DNA探针,加盖玻片,加热(95℃)10分钟(变性),放入孵育盆进37 ℃温箱过夜,加蛋白阻断液,37℃温箱5分钟,滴加mouse BiotinIgG,37℃孵育20分钟,37 ℃的增强洗液冲洗,甩干;加Goat AntiMouseIgG,37℃孵育20分钟,37℃的增强洗液冲洗,