干扰MiRNA-155表达的寻常型银屑病患者CD4+T细胞分化观察

摘要

目的 观察干扰微小核糖核酸(miRNA)-155表达的寻常型银屑病患者外周血CD4+T细胞分化情况.方法 ①30例寻常型银屑病患者、30例健康志愿者,抽取两组空腹外周静脉血10 mL,免疫磁珠法分选CD4+T细胞,qPCR法检测外周血miRNA-155,流式细胞仪测算表达IL-17A的细胞比例,酶联免疫吸附试验检测外周血IL-17A.②另取寻常型银屑病患者外周血CD4+T细胞,诱导Th17分化后分为miRNA-155模拟物组、miRNA-155抑制物组、空白对照组,分别加入50 nmol/L miRNA-155模拟物(促进表达)、50 nmol/L miRNA-155抑制物(抑制表达)、含有Lipofectamine2000的DMEM高糖培养基,流式细胞仪测算表达IL-17A的CD4+T细胞比例,酶联免疫吸附试验检测IL-17A,qPCR法检测细胞miRNA-155、IL-17A和E26转录因子(Ets)-1mRNA.③取分离培养CD4+T细胞,IL-2刺激培养72 h,将细胞分为A、B、C组.A、B、C组分别加入50 nmol/L miRNA-155模拟物、50 nmol/L miRNA-155抑制物、含Lipofectamine2000的DMEM高糖培养基.A、B、C组再各自分为两个亚组,分别转染Ets-1 siRNA(促进表达)、Ets-1 siRNA阴性对照(空白质粒),培养48 h.荧光定量RT-PCR法检测各组IL-17A、Ets-1mRNA,Western blotting法检测各组细胞Ets-1蛋白.结果 寻常型银屑病外周血miRNA-155相对表达量、IL-17A细胞比例及IL-17A相对表达量均高于健康体检者(P均<0.05).模拟物组、抑制物组、空白对照组CD4+T细胞表达IL-17A细胞比例分别为34.56％ ±4.78％、19.21％ ±1.56％、21.23％ ±2.65％,组间两两比较,P均<0.05.模拟物组、抑制物组、空白对照组培养液IL-17A水平分别为(1486±137)(783±86)、(886±100)pg/mL,组间两两比较,P均<0.05.与空白对照组、抑制物组比较,模拟物组miRNA-155、IL-17A mRNA相对表达量均升高,Ets-1 mRNA相对表达量降低(P均<0.05).与本组Ets-siRNA阴性者比较,A、B、C组IL-17A mRNA相对表达量均升高,Ets-1 mRNA及蛋白相对表达量均降低(P均<0.05).结论 寻常型银屑病患者外周血CD4+T细胞miRNA-155表达升高、Ets-1表达降低.抑制miRNA-155表达可抑制寻常型银屑病患者CD4+T细胞分化为Th17细胞,其机制可能为抑制Ets-1 mRNA及蛋白表达.