绿原酸灌胃对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的改善作用及其机制

摘要

目的观察绿原酸(CGA)对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的改善作用,并探讨其可能的作用机制。方法将60只雄性C57BL/6小鼠随机分为CGA低剂量组、CGA中剂量组、CGA高剂量一组、CGA高剂量二组、模型组及对照组,每组各10只。除对照组外其余5组小鼠均气管内一次性注入博莱霉素2 mg/kg(记作第1天),第1天小鼠自然苏醒后,CGA高剂量二组小鼠继续予CGA 80 mg/kg灌胃,1次/天,连续灌胃14天;第8天时CGA低剂量组、CGA中剂量组、CGA高剂量一组分别予绿原酸20、40、80 mg/kg灌胃,1次/天,连续灌胃14天;第8天时对照组及模型组予等体积超纯水连续灌胃,1次/天,连续灌胃14天。第21天后处死各组小鼠取肺组织,观察各组小鼠肺组织肺纤维化程度(肺系数、HE染色观察肺组织形态学、Masson染色观察肺组织胶原纤维沉积及Ashcroft评分);采用免疫荧光法检测各组肺组织α⁃平滑肌肌动蛋白(α⁃SMA)表达,采用免疫组化法检测各组肺组织胶原蛋白Ⅰ(CollagenⅠ)、波形蛋白(Vimentin)、转化生长因子⁃β1(TGF⁃β1)、Smad2/3蛋白表达,采用TBA法检测各组肺组织丙二醛(MDA)含量,采用RT⁃qPCR法检测各组肺组织E⁃钙连蛋白(E⁃cadherin)及α⁃SMA mRNA。结果与对照组相比,模型组小鼠肺组织正常结构遭到严重破坏,胶原纤维大量沉积,肺系数及Ashcroft评分高(P<0.001);与模型组相比,CGA各剂量组小鼠肺组织结构破坏程度减轻,胶原纤维沉积减少,肺系数及Ashcroft评分低(P均<0.001),且呈剂量依赖性(P<0.001);与对照组比较,模型组小鼠肺组织中MDA含量高,肺组织E⁃cadherin mRNA相对表达量低、α⁃SMA mRNA相对表达量高,肺组织α⁃SMA、Col⁃lagenⅠ、Vimentin、TGF-β1、Smads2/3蛋白相对表达量高(P均<0.001);与模型组比较,CGA各剂量组随作用浓度升高,各组小鼠肺组织α⁃SMA、CollagenⅠ、Vimentin、TGF-β1、Smads2/3蛋白相对表达量降低(P均<0.01),α⁃SMA mRNA相对表达量降低(P<0.001)、E⁃cadherin mRNA相对表达量升高(P<0.01);与CGA高剂量一组比较,CGA高剂量二组小鼠肺系数低(P<0.001),CollagenⅠ、Vimentin及TGF-β1、Smads2/3蛋白相对表达量低(P<0.001),MDA含量低(P<0.05)。结论在一定浓度范围内,CGA可改善博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化程度,且呈剂量依赖性。CGA可能通过抑制TGF-β1、Smads2/3等TGF-β1/Smads信号通路蛋白表达从而上调E⁃cadherin,下调α⁃SMA、Vimentin等标志物的表达来抑制上皮—间充质转化(EMT),改善博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化。