白蛋白结合型紫杉醇对肺鳞癌H520细胞株PD-L1、ERK、p-ERK的调控作用观察

摘要

目的探讨白蛋白结合型紫杉醇(ab-PTX)对肺鳞癌H520细胞株的程序性死亡蛋白1配体(PD-L1)表达的影响及其可能的作用机制。方法(1)本研究采用的ab-PTX浓度及作用时间的确定:用0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L ab-PTX培养H520细胞株24、36、48 h,计算细胞增殖抑制率,最终选择细胞增殖抑制作用最显著的48 h及其对应的ab-PTX IC50值(1.221μmol/L)进行后续试验。(2)给予不同浓度ab-PTX培养后H520细胞株PD-L1表达观察:培养基中加入0、0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L ab-PTX体外培养肺鳞癌H520细胞株48 h(基于(1)中确定的ab-PTX作用时间),采用流式细胞术测算PD-L1阳性细胞率,采用qRT-PCR法检测PD-L1 mRNA。(3)单独或联合给予ab-PTX、细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂培养后ERK、p-ERK的表达观察:将H520细胞株分为Control组、abPTX组、PD98059(ERK抑制剂)]组、TPA(ERK激活剂)组、ab-PTX联合PD98059组、ab-PTX联合TPA组,ab-PTX组加入1.221μmol/L ab-PTX(基于(1)中确定的ab-PTX浓度);PD98059组加入50μmol/L PD98059;TPA组加入50nmol/LTPA;ab-PTX+PD98059组加入1.221μmol/Lab-PTX和50μmol/LPD98059;ab-PTX+TPA组加入1.221μmol/L ab-PTX和50 nmol/L TPA,培养48 h,流式细胞术测算PD-L1阳性细胞率,Western blotting法检测ERK、p-ERK。结果(1)不同浓度ab-PTX培养后H520细胞株PD-L1表达:采用0、0.001、0.01、0.1、1、10μmol/L ab-PTX培养的H520细胞株PD-L1阳性细胞率分别为33.9%±1.1%、39.5%±2.7%、52.6%±3.3%、60.3%±3.4%、69.9%±2.3%、77.8%±2.2%,PD-L1 mRNA相对表达量分别为1.06±0.07、1.65±0.22、2.12±0.16、3.25±0.11、3.79±0.14、4.45±0.28,随着ab-PTX浓度的增加,PD-L1阳性细胞率、PD-L1 mRNA相对表达量逐渐上升(P均<0.05)。(2)单独或联合给予ab-PTX、ERK抑制剂培养后ERK、p-ERK的表达及PD-L1阳性细胞率:与Control组相比,ab-PTX组p-ERK相对表达量升高,PD98059组p-ERK相对表达量降低,TPA组p-ERK相对表达量升高;ab-PTX联合PD98059组较ab-PTX组p-ERK相对表达量降低,较PD98059组p-ERK相对表达量升高;ab-PTX联合TPA组较ab-PTX组及TPA组p-ERK相对表达量升高(P均<0.05)。与Control组相比,ab-PTX组PD-L1阳性细胞率升高;与ab-PTX组比较,ab-PTX联合PD98059组PD-L1阳性细胞率降低;与PD98059组比较,ab-PTX联合PD98059组PD-L1阳性细胞率升高;与ab-PTX组及TPA组比较,ab-PTX联合TPA组PD-L1阳性细胞率升高(P均<0.05)。结论ab-PTX可上调H520细胞株PD-L1表达,一定范围内呈剂量依赖性;ab-PTX上调PD-L1表达的作用机制可能部分与ERK信号通路激活有关。