CRISPR/Cas9基因转录激活技术的建立及其应用

摘要

建立基于CRISPR/Cas9的基因转录激活技术,实现在HEK293细胞中激活cGAS基因的转录.首先利用慢病毒载体构建稳定表达Cas9的HEK293细胞;并采用Real-time PCR和western blot方法鉴定Cas9蛋白质表达效果.再选取不同靶序列,分别构建用于激活cGAS基因转录的sgRNA载体,将构建好的序列载体与CRISPR体系工具质粒共转染至稳定表达Cas9的HEK293细胞中.采用Real-time PCR方法检测细胞中内源cGAS的转录激活效果.成功建立了基于CRISPR/Cas9的基因转录激活技术,并在cGAS基因阴性表达的细胞中激活基因的转录.