种子种苗上黄瓜绿斑驳花叶病毒IC-RT-PCR检测方法的建立及应用

摘要

黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)是一种检疫性植物病毒,种传和农事操作是其主要传播途径,因此种子和种苗的早期检测尤为重要。鉴于种子检测的特殊性及幼苗病毒含量低的特点,本试验通过制备CGMMV单克隆抗体,结合特异性引物,建立了黄瓜绿斑驳花叶病毒的IC-RT-PCR早期检测方法,比较了IC-RT-PCR与DAS-ELISA和RT-PCR方法的特异性、灵敏度,并对实际检测效果进行了评价。在操作程序上,IC-RT-PCR法与DAS-ELISA法一样简便,但灵敏度远大于DAS-ELISA。IC-RT-PCR与RT-PCR均可检出20~25 ng种子上的病毒,且特异性相当,而DAS-ELISA法只可检出10μg种子上的病毒。综上所述,IC-RT-PCR法可简便有效地应用于种子和种苗上CGMMV的检测,为病毒防治的早期干预提供技术支撑。