中国人促红细胞生成素基因组的克隆及其表达

摘要

cqvip:促红细胞生成素(EPO)是调节前体红细胞增殖、分化和保持外周血中红细胞处于正常生理范围的最主要的激素,国外已能生产rhEPO并用于临床治疗多种红细胞减少症,临床实验结果表明rhEPO具有很好的临床疗效。1989年,美国FDA已批准rhEPO投放市场用于治疗肾衰后引起的贫血。EPO基因组的5’侧翼区和第一个内含于以及3’侧翼区可能存在着氧敏感调控序列,在人和动物的肝肾及某些特异的细胞系中,它们使EPO基因对于缺氧敏感从而增强其表达;而这些序列对于EPO基因组在COS等常见的用于表达外原基因的哺乳动物细胞中的表达则没有增强作用,此外,在EPO基因组的5’旁侧0.4-6kb,存在一个负调控序列不适宜用于体外表达。据此本文构建了去除上述负调控片段和不必要的片段的EPO次全基因组,并证明了人EPO次全基因组在COS-7细胞系中获得了,表达。 首先根据人EPO基因组的结构(图1(a)),设计了两对引物。第一对引物:P1与P2。