蜂毒肽基因原核表达载体的构建及重组蛋白生物活性作用的研究

摘要

本研究根据Genebank中公布的蜂毒肽(melittin)基因序列(NM001011607),将其插入pGEX6p-1载体,转人BL21(DE3)进行诱导表达并纯化重组蛋白melittin,测定其浓度,采用SDS-PAGE电泳及免疫印迹分析重组蜂毒肽的分子量和活性;进行抑菌试验,以及肿瘤细胞毒性实验,判断重组蜂毒肽的生物活性.重组蛋白经SDS-PAGE和灰度分析在25 ～35 kDa之间出现一条明显条带;重组蛋白对金黄色葡萄球菌有高度敏性,对大肠埃希菌有中度敏感性,对铜绿假单胞菌和伤寒沙门菌有低度敏感性.5个浓度重组蛋白50、25、12.5、6.25、3.125 mg/L分别作用人乳腺癌MCF-7细胞,在12、24、36、48、72 h时间对人乳腺癌MCF-7细胞生长均有稳定抑制作用,与对照组相比有明显差异(P＜0.05).蜂毒肽融合蛋白通过pGEX6p-1载体转化到原核细胞进行表达稳定可行,且具有明显抑菌和抗肿瘤的作用.