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基于mPGES-1表达调控的药物筛选模型的建立

         

摘要

聚合酶链式反应扩增mPGES-1上游调控序列并插入到已预先在pGL3-Basic载体的Sal Ⅰ位点插入真核筛选基因新霉素抗性基因(neomycin)形成的质粒pGL3B—neo中,构建重组报告基因载体pGL3B-neo/mPGES-1,转染人肺癌细胞A549,通过G418筛选,建立了稳定的mPGES-1表达下调剂筛选细胞株SPGES1。通过检测荧光素酶报告基因表达水平的变化筛选人mPGES.1表达下调剂,并优化了其筛选条件,优化的条件是每孔细胞接种数目为1×104-3×104个,溶剂DMSO终浓度为1%,底物用量为20μL。利用该模型可有效地进行人mPGES-1表达下调剂的筛选。

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