基于mPGES-1表达调控的药物筛选模型的建立

摘要

聚合酶链式反应扩增mPGES-1上游调控序列并插入到已预先在pGL3-Basic载体的Sal Ⅰ位点插入真核筛选基因新霉素抗性基因（neomycin）形成的质粒pGL3B—neo中，构建重组报告基因载体pGL3B-neo／mPGES-1，转染人肺癌细胞A549，通过G418筛选，建立了稳定的mPGES-1表达下调剂筛选细胞株SPGES1。通过检测荧光素酶报告基因表达水平的变化筛选人mPGES．1表达下调剂，并优化了其筛选条件，优化的条件是每孔细胞接种数目为1×104-3×104个，溶剂DMSO终浓度为1％，底物用量为20μL。利用该模型可有效地进行人mPGES-1表达下调剂的筛选。