血管生长素基因转染5-氮胞苷诱导后的骨髓基质细胞移植于缺血心肌的实验研究

摘要

目的利用编码血管生长素基因的腺病毒(Ad.ANG)转染5-氮胞苷(5-aza)诱导骨髓基质细胞(BMSC),移植于大鼠缺血心肌后对心功能的保护和促血管新生作用.方法体外培养Lewis大鼠的骨髓基质细胞,使用3 μmol/L的5-aza体外强化诱导24 h;然后在50倍的转染倍数(病毒数/靶细胞)下,用Ad.ANG转染诱导BMSC.通过ELISA方法检测其对ANG的表达和分泌.然后将其移植于结扎了冠状动脉前降支的Lewis大鼠缺血心肌内(组Ⅰ).同时设置单纯细胞移植组(组Ⅱ)和基因治疗组(组Ⅲ),以注射无血清培养基的实验动物为对照组(组Ⅳ).通过心脏射血分数(EF)、左室舒张末期容积等超声指标研究其对心功能的保护作用;另外通过免疫组化、电镜研究细胞存活、分化和血管新生情况.结果 Ad.ANG转染BMSC后,在培养上清中ANG大量出现,4～7 d时达到表达高峰,15 d后仍可检测到蛋白质表达.移植于缺血心肌4周后,组Ⅰ和组Ⅱ缺血区的移植细胞大部分分化为心肌样细胞,组Ⅰ EF改善程度明显好于组Ⅱ(P<0.05)、组Ⅲ(P<0.01)和组Ⅳ(P<0.01),在促血管新生方面,组Ⅰ也明显优于以上3组(组Ⅰ 36.3个/HPF;组Ⅱ 10.5个/HPF;组Ⅲ 23.1个/HPF; 组Ⅳ 0.9个/HPF).结论转染Ad.ANG后的BMSC移植于缺血心肌后,能够安全有效地修复受损心肌和促进血管新生.