整合素α3β1对肝癌细胞与Ⅳ型胶原粘附与趋化行为的影响

摘要

目的定量描述整合素α3β1对肝细胞癌(HCC)细胞与Ⅳ型胶原裱衬表面粘附力特性和HCC细胞对Ⅳ型胶原趋化行为的影响.方法采用微吸管实验技术测定HCC细胞与Ⅳ型胶原裱衬表面的粘附力;进一步加入针对整合素α3β1的单克隆抗体(Anti-α3,Anti-β1)处理HCC细胞,观察Anti-α3、Anti-β1对细胞与Ⅳ型胶原裱衬表面的粘附力的影响.采用双微吸管实验法进行HCC细胞趋化实验,在微管内加入600μg/ml的Ⅳ型胶原,并引导微管尖端与同一细胞紧密接触,动态观察细胞伪足形成过程;在微吸管内分别加入Anti-α3、Anti-β1,观察整合素亚单位阻断对HCC细胞伪足形成的影响.利用流式细胞仪对HCC细胞表面整合素α3、β1亚单位的表达进行分析.结果HCC细胞与5μg/mlⅣ型胶原裱衬表面之间的粘附力为932±134(×10-10N,n=60),加入5μ/gml Anti-α3粘附力减小到536±122(×10-10N,n=60);加入10μg/ml Anti-α3时粘附力减小到476±63(×10-10N,n=50).加入5μg/ml Anti-β1粘附力减小到449±119(×10-10N,n=60);加入10μg/mlAnti-β1时粘附力减小到220±78(×10-10N,n=55).双微吸管趋化实验表明:两侧微吸管加入相同浓度Ⅳ型胶原,细胞向两侧微吸管均有伪足形成;在此基础上,微吸管分别加入Anti-α3、Anti-β1的一侧,HCC细胞伪足生长曲线呈现明显的抑制,而未加入抗体的微吸管一侧与加入的对侧相比,该侧细胞的伪足明显增加.流式细胞仪分析表明,所研究细胞整合素α3、β1亚单位表达率达分别为95.55%和95.78%.结论整合素α3β1是联系HCC细胞与Ⅳ型胶原裱衬表面粘附以及HCC细胞对Ⅳ型胶原趋化性伪足形成的重要受体基础.