P27对卵巢癌多细胞球体紫杉醇耐药性影响的实验研究

摘要

目的检测p27在卵巢癌多细胞球体中的表达, 探讨p27反义寡核苷酸(p27-ASON)对卵巢癌多细胞球体紫杉醇耐药的逆转作用.方法以三维培养方法获得的人卵巢癌A2780、CAOV3多细胞球体 (MCS) 为模型,以单层细胞为对照,采用流式细胞仪(FACS)检测细胞周期变化,用蛋白质免疫印迹法(Western blot)、流式细胞仪(FACS)检测p27表达.用激光共聚焦显微镜(Confocal)检测p27蛋白的亚细胞分布.将p27-ASON经脂质体(LipofectAMINE)包裹转染人卵巢癌细胞A2780、CAOV3,用台盼蓝排除实验法和FACS检测细胞凋亡率来分别比较单层细胞、p27-ASON 转染前后培养的MCS的紫杉醇敏感性.结果 (1)Western blot、Confocal检测提示MCS中p27表达明显高于单层细胞,FACS检测也提示将单层细胞培养成MCS时,其p27表达明显增高(PA2780=0.011, PCAOV3=0.024),G0-G1期细胞比率增加,S期和G2-M期细胞比率降低.(2)不同浓度的紫杉醇(0.2、2.0、10.0、20.0 μmol/L)作用后,MCS细胞抑制率明显低于单层细胞(PA2780=0.003, PCAOV3=0.015);经20.0 μmol/L的紫杉醇作用后,单层细胞的细胞凋亡率明显高于MCS,差异有显著意义.(3)p27-ASON 转染前培养的MCS较致密,而转染后的较疏松.(4)p27-ASON转染后培养的MCS(p27-ASON/MCS), p27表达明显下调,G0-G1期细胞比率减少,细胞抑制率、细胞凋亡率检测其对紫杉醇的敏感性明显高于转染前.结论卵巢癌MCS对紫杉醇化疗的耐药与p27的表达上调有关,p27-ASON可一定程度的逆转卵巢癌对紫杉醇化疗的耐药性,提高化疗疗效.