乙型肝炎病毒X蛋白羧基端缺失突变体转染细胞的基因表达谱和蛋白质组差异分析

摘要

目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）羧基端40个氨基酸的缺失突变体（HBx3′-40）不同生物学效应的分子基础。方法采用Trizol法抽提HBx3′-40（实验组）和野生型HBx（wtHBx,对照组）转染的人肝癌Huh7细胞的总RNA,经标记后,与含21074个靶基因点的cDNA芯片进行杂交,通过扫描杂交信号强弱获得差异表达基因;用固相梯度双向凝胶电泳分离实验组和对照组的细胞总蛋白质,银染显色,PDQuest2-D软件分析两组细胞蛋白质组的表达差异,借助质谱技术鉴定其中的差异蛋白质点。结果cDNA芯片检测结果显示,对比wtHBx组,HBx3′-40组存在165个基因（0.82%）的显著性改变,144和21个基因分别显示上调和下调。双向凝胶电泳结果显示,对比wtHBx组,HBx3′-40组存在（135±13）个蛋白差异点。基因表达谱和质谱分析结果显示,HBx3′-40组差异表达的基因和蛋白质主要涉及宿主细胞的基因转录、癌基因和抑癌基因、细胞连接、信号转导和代谢、免疫应答等过程。结论HBx缺失突变体对细胞基因和蛋白质的影响是广泛的,调节涉及肝组织特异性的代谢基因的变化。这些差异表达的基因和蛋白质在HBx突变致癌过程中是否发挥了重要的作用,需要进一步的研究证实。