脑死亡状态对巴马小型猪肝脏形态与功能的影响

摘要

目的探讨脑死亡状态对巴马小型猪肝脏的影响及其机制。方法巴马小型猪15只,随机分脑死亡组（B组）、灯盏花素处理组（P组）和对照组（C组）,每组5只。用颅内加压法建立脑死亡模型。建模成功后,B组不行其他处理;P组分别于初次确认脑死亡后1、12h时灯盏花素按2.5mg/kg,加入100ml生理盐水中,静脉滴注;C组仅开颅麻醉维持。脑死亡3、6、12、18和24h取血清测丙氨酸转移酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）及肿瘤坏死因子α（TNFα）、IL1β、IL6水平。取脑死亡后6、12和24h点肝组织行HE染色并免疫组化法测蛋白激酶Cα（PKCα）的表达水平并RT PCR法测PKCαmRNA的变化,12、24h点肝组织观察肝脏超微结构变化。结果初次判定巴马小型猪脑死亡后12、18和24h:ALT水平C组分别为33.0±6.7、29.0±1.6和（36.6±5.6）U/L,B组分别为141.8±9.1、191.4±10.9和（238.6±10.4）U/L,P组分别为91.0±4.9、131.6±6.4和（175.6±7.0）U/L;AST水平C组分别为27.4±3.9、29.8±1.6和（29.2±3.4）U/L;B组分别为91.4±8.1、126.6±5.5和（184.4±5.4）U/L;组分别为59.2±6.1、86.8±5.5和（146.2±6.4）U/L;B组血清ALT、AST水平随着脑死亡时间的延长逐渐升高;明显高于C组,P组两者水平亦升高,但升高幅度较B组低。炎症介质在首次判定脑死亡后3、6、12、18和24h的IL1β水平,C组分别为5.91±0.17、5.91±0.10、6.06±0.12、6.08±0.12和（6.10±0.15）pg/ml,B组分别为8.26±0.21、9.17±0.08、10.30±0.11、12.53±0.35和（16.37±0.16）pg/ml,P组分别为7.75±0.12、8.08±0.11、9.25±0.21、11.44±0.19和（15.43±0.36）pg/ml;IL6水平C组分别为17.35±0.59、18.04±0.23、17.99±0.83、17.77±1.05和（17.62±0.67）pg/ml,B组分别为29.50±1.92、37.92±1.69、46.32±1.70、56.62±1.95和（66.68±2.11）pg/ml,P组分别为21.27±1.05、23.65±1.09、31.46±1.91、37.60±1.75和45.16±1.9pg/ml;TNFα水平,C组分别为14.94±0.36、15.03±0.49、14.71±0.46、14.66±0.31和（14.64±0.63）pg/ml,B组分别为19.45±0.16、21.76±0.25、24.31±0.20、27.65±0.27和（31.35±0.16）pg/ml,P组分别为18.45±0.11、20.21±0.41、23.41±0.32、26.17±0.21和（28.36±0.20）pg/ml;B组血清IL1β、IL6和TNFα水平随着脑死亡时间的延长逐渐升高;明显高于C组,P组三者水平亦升高,但升高幅度较B组低。6、12和24h的肝细胞中PKCα蛋白表达水平,C组分别为0.0887±0.0113、0.0950±0.0284和0.0994±0.0113,B组分别为0.1508±0.0108、0.3811±0.0382和0.6209±0.0312,P组分别为0.1091±0.0292、0.1284±0.0142和0.2995±0.0276;6、12和24h肝细胞中PKCαmRNA表达水平,C组分别为5782±594、5501±423和5729±533,B组分别为26789±3059、32877±5526和39869±6548,P组分别为24027±5012、20409±4793和14307±3786。PKCα蛋白在C组肝细胞表达在胞浆内,仅见少量阳性细胞,B组6h可见肝脏中阳性细胞显著增多,P组PKCα蛋白表达阳性细胞较B组低。3脑死亡后肝脏中PKCαmRNA的变化与PKCα蛋白变化趋势相同。肝脏光镜及电镜下肝脏损伤变化B组明显重于C组,P组在脑死亡后12h仅出现细胞水肿。结论脑死亡状态下肝脏出现功能与形态学的损伤性变化;PKCα可能参与了这种损伤机制,灯盏花素能够抑制动物肝脏中PKC-α的活化,灯盏花素处理可以减轻肝脏这种损伤。