表皮生长因子受体2靶向小分子干扰RNA对卵巢癌细胞化疗敏感性的影响

摘要

目的探讨表皮生长因子受体2（HER-2）靶向小分子干扰 RNA（siRNA）对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响。方法采用蛋白质印迹法筛选出特异性的 HER-2 siRNA,将其转染人卵巢上皮性癌细胞株 SKOV3细胞。将实验分为对照组（不转染 HER-2 siRNA）,非特异性 siRNA 组（转染非特异性 siRNA）,HER-2 siRNA 组（转染特异性 siRNA）,3组分别加入0、0.05、0.2、0.4、0.8、1.0、2.0、10、20μg/ml 不同浓度的顺铂,采用噻唑蓝法检测3组 SKOV3细胞增殖情况;在给予1μg/ml 顺铂后,采用膜联蛋白 V 法检测顺铂组、HER-2 siRNA 组与 HER-2 siRNA 联合顺铂组在不同时间（2～4 d）凋亡率变化的情况;应用蛋白印迹法检测顺铂组及 HER-2 siRNA+顺铂组抗凋亡蛋白 Bcl-2、存活素、X 连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）和促凋亡蛋白第二线粒体衍生蛋白酶活化子（Smac）的表达。结果暴露于顺铂24 h 后,3组细胞增殖率均随顺铂浓度的增加而降低,但降低的幅度不同,其中,转染 HER-2siRNA 组细胞降低最为显著;在给予1μg/ml 顺铂后,转染 HER-2 siRNA 组细胞增殖率[（58.1±4.7）%]与转染非特异性 siRNA 组[（65.3±2.7）%]、空白对照组[（68.5±2.8）%]相比,差异均有统计学意义（P＜0.01）,而非特异性组与空白对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05）;HER-2siRNA 联合顺铂组细胞凋亡率明显增加,与单独使用顺铂及单独使用 HER-2 siRNA 组相比,差异有统计学意义（P＜0.01）。HER-2 siRNA 联合顺铂组抗凋亡蛋白 Bcl-2、存活素、XIAP 明显低于顺铂组;促凋亡蛋白 Smac 明显高于顺铂组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 HER-2 siRNA 能增加卵巢癌 SKOV-3细胞对顺铂的敏感性,显著诱导凋亡。HER-2 siRNA 联合顺铂对卵巢癌治疗具有协同作用。HER-2 siRNA 和顺铂协同诱导细胞凋亡的机制可能与 Bcl-2、存活素、XIAP 蛋白质的下调、Smac蛋白质的上调有关。