miR-146b-5p下调促进巨噬细胞与胶质瘤干细胞融合后恶性转化的分析

摘要

目的观察在巨噬细胞（Mφ）-胶质瘤干细胞（GSCs）双色荧光示踪体外共培养模型中, 二者间的相互作用, 以多指标验证融合细胞的存在及其生物学特性, 并分析相关分子机制。方法将红色荧光蛋白基因稳定转染的人GSCs细胞株SU4-RFP, 与源于绿色荧光蛋白（EGFP）Balb/c裸小鼠的Mφ体外共培养, 细胞工作站下观察SU4-RFP与Mφ间的包括融合在内的多种相互作用, 克隆高增殖力RFP/EGFP双阳性细胞, 以免疫印迹、荧光探针原位杂交（FISH）、免疫细胞化学染色和染色体核型分析多指标鉴定融合细胞, 命名为Mφ与GSCs的融合细胞（F-Mφ）, 分析其生物学特性及相关分子机制。结果体外共培养发现高增殖力EGFP/RFP双阳性细胞存在, 单克隆并连续传代后在转录、翻译及荧光蛋白表达水平均证实RFP和EGFP共表达。融合细胞共表达Mφ标志物CD68和GSCs标志物Nestin, 兼具两种细胞特征性染色体, 证实其源于SU4-RFP与Mφ的自发融合。融合细胞的增殖速度、侵袭能力均高于SU4-RFP。融合细胞转染miR-146b-5p后, STAT3表达下降, 凋亡率上升（18.83%）, 而致瘤率（4/5）及肿瘤体积（9.7 mm±1.6 mm）均下降。结论 Mφ可与GSCs自发融合, 融合细胞转化后恶性程度更高, 与miR-146b-5p下调介导STAT3通路激活相关。