骨形成蛋白-7对MCP-1诱导人肾小管上皮细胞转分化和TGF-β1-Smad3信号转导的作用

摘要

目的探讨骨形成蛋白7（BMP-7）对单核细胞趋化蛋白1（MCP1）诱导体外培养人肾小管上皮细胞转分化的作用,并初步探讨该作用与转化生长因子β1（TGFβ1）、Smad3表达变化的关系。方法将体外培养HK2细胞分为以下各组:阴性对照组;阳性对照组:TGF-β1（5ng/ml）处理;MCP-1（0.1,1,10及50ng/ml）组,BMP7组（0.1,1,10,50ng/ml）;MCP1（1ng/ml）加BMP-7（50ng/ml）组;MCP1（1ng/ml）加MCP1中和抗体（5μg/ml）组。应用半定量RTPCR方法检测HK-2细胞α平滑肌肌动蛋白（αSMA）mRNA表达,ELISA方法测定上清液中I型胶原分泌,Westernblot方法检测HK2细胞TGFβ1及Smad3表达。结果MCP1（0.1,1ng/ml）组HK2细胞αSMAmRNA表达较阴性对照组明显增强（P＜0.01）。ELISA方法测定MCP1（0.1,1ng/ml）组上清液中I型胶原分泌明显高于阴性对照组（P＜0.01）。MCP-1中和抗体与MCP-1（1ng/ml）共同作用24h后,HKC细胞αSMAmRNA表达几乎被完全抑制（P＜0.001）,而BMP7（50ng/ml）与MCP1（1ng/ml）共同作用24h后HK2细胞αSMAmRNA表达仅部分被抑制（P＜0.01）;MCP-1中和抗体或BMP7（50ng/ml）与MCP1（1ng/ml）共同作用24h后Ⅰ型胶原分泌较MCP1（1ng/ml）组明显降低（P＜0.05）。Westernblot方法检测显示,MCP1（1ng/ml）组HK2细胞TGF-β1及Smad3表达水平均较阴性对照组明显上调（P＜0.01）。MCP1中和抗体或BMP7（50ng/ml）与MCP-1（1ng/ml）共同作用24h后,HK2细胞TGF-β1表达均分别比MCP1（1ng/mL）单独作用明显下调,以MCP1中和抗体的作用更强（P＜0.01,P＜0.05）;在MCP1中和抗体或BMP7作用24h后,Smad3表达也有类似下调（P＜0.01,P＜0.05）。结论MCP1能诱导体外培养的HK2细胞发生转分化,该作用可能与TGFβ1及Smad3表达上调有关。BMP7能部分抑制MCP1诱导HK2细胞转分化,该作用可能与TGFβ1及Smad3表达部分下调有关;同时提示MCP1诱导的转分化可能涉及非TGFβ依赖的细胞信号传导途径,需进一步研究。